【摘要】：目的已知全反式維甲酸(ATRA)可以改善角膜上皮缺損。本文通過全反式維甲酸(ATRA)處理損傷后大鼠角膜上皮,探討ATRA對大鼠角膜上皮損傷修復過程中角膜上皮細胞凋亡以及緊密連接結(jié)構重塑的影響,并進一步對其可能的機制進行初步探討。方法普通級健康2個月鼠齡雄性SD大鼠200-300g左右眼分組,左眼為溶劑對照組,右眼為ATRA處理組(加藥組)。適應性飼養(yǎng)三天后,10%的水合氯醛麻醉大鼠,眼科手術刀片刮除角膜,建立體內(nèi)大鼠角膜上皮損傷修復模型,通過熒光染色并拍照記錄損傷后不同時間大鼠角膜損傷修復情況,觀察并計算ATRA對大鼠角膜損傷修復速度的影響;原位末端凋亡法(TUNEL技術)觀察并測定不同處理下?lián)p傷修復過程中角膜組織細胞凋亡情況;免疫熒光實驗(IF)檢測角膜上皮組織中凋亡相關蛋白Bax表達與分布;組織通透性實驗檢測不同處理下?lián)p傷修復過程中角膜組織通透性變化;Western blot實驗測定ATRA處理后角膜上皮組織中凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2、Caspase家族,絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路蛋白,緊密連接蛋白ZO-1、occludin以及遷移相關蛋白MLCK、p-MLC的表達情況。結(jié)果成功復制了角膜上皮損傷修復模型。0.5 mmol/L ATRA點滴處理組角膜損傷修復的速度明顯高于對照組,表明ATRA可以促進角膜上皮損傷修復;TUNEL結(jié)果顯示ATRA處理后角膜上皮細胞凋亡明顯少于CT組和空白組,IF結(jié)果顯示ATRA能降低大鼠角膜上皮組織中bax的表達,表明ATRA可明顯較少角膜損傷修復過程中角膜上皮細胞凋亡;組織通透性實驗結(jié)果顯示ATRA可明顯降低愈合過程角膜上皮通透性;Western blot結(jié)果顯示ATRA有效抑制促凋亡蛋白Bax表達(P0.05),上調(diào)凋亡抑制蛋白bcl-2表達(P0.05),表現(xiàn)出一定的抗凋亡作用,同時上調(diào)Procaspases-9、Procaspases-3表達(P0.05),下調(diào)Caspases-3、Caspases-9表達(P0.05);結(jié)果還顯示ATRA也可調(diào)節(jié)角膜上皮組織中MAPK信號通路蛋白p38、ERK、JNK的磷酸化水平,其中p38、ERK的磷酸化水平均下調(diào),JNK的磷酸化水平上調(diào)ATRA能促進損傷修復一定階段上皮細胞間ZO-1、occludin蛋白表達水平,同時下調(diào)MLCK表達水平,抑制MLC的磷酸化。結(jié)論全反式維甲酸促進大鼠角膜上皮損傷修復,并可抑制角膜修復過程中上皮組織細胞凋亡的發(fā)生,其抑制機制可能與ATRA對MAPK通路相關蛋白磷酸化水平的影響有關;同時ATRA上調(diào)角膜組織緊密連接蛋白ZO-1、occludin的表達,該作用可能與ATRA對細胞遷移的抑制有關。
【圖文】：

安徽醫(yī)科大學碩士學士論文3.2 TUNEL 檢測 ATRA 對角膜上皮細胞凋亡影響大鼠角膜組織冰凍切片 TUNEL 檢測實驗中，角膜上皮凋亡細胞在熒光顯微鏡下觀察為紅色熒光染色。TUNEL 結(jié)果顯示，ATRA 處理后角膜上皮細胞凋亡明顯減少，，明顯少于 CT 組和空白組。說明 ATRA 治療可明顯較少細胞凋亡。見圖 2a。

圖 3 ATRA 對角膜上皮組織凋亡蛋白 bax 表達與分布的影響 IF 染色 ×100常未損傷角膜；B：角膜損傷 36 h ATRA 0.5 mmol/L 處理角膜；C：角膜損傷 36 h理角膜Fig3 Effects of ATRA on Bax expression in the rats’corneal in different groups analyzed by immunohistochemistry staining. IF staining× 100A:normal corneal；B: corneal treated with 0.5 mmol/L ATRA after 36 hours wound hC:corneal treated with SC after 36 hours wound healing. ATRA 對角膜上皮組織細胞凋亡相關蛋白影響tern blot 實驗結(jié)果顯示：與 CT 組相比，損傷修復之后，ATRA 處理角膜中促凋亡蛋白 Bax 表達量明顯下降，抗凋亡蛋白 Bcl-2 表達量明顯上調(diào)
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R772.2

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本文編號：2615395