【摘要】：目的:探討三維共培養(yǎng)模型(three-dimensionalco-culturemodel,3D共培養(yǎng)模型)對(duì)體外擴(kuò)增兔角膜緣干細(xì)胞(limbalstemcells,LSCs)的作用。方法:體外培養(yǎng)兔LSCs,以牙周膜干細(xì)胞(humanperiodontalligamentstemcell,HPDLSCs)作為飼細(xì)胞建立共培養(yǎng)模型,根據(jù)載體不同分組,纖維蛋白膠組將兔LSCs、HPDLSCs、纖維蛋白膠3D共培養(yǎng);羊膜組將兔LSCs、HPDLSCs、羊膜3D共培養(yǎng);對(duì)照組將兔LSCs、HPDLSCs共培養(yǎng)。共培養(yǎng)5d后,用倒置顯微鏡、HE染色、掃描電鏡觀察兔LSCs的細(xì)胞形態(tài),采用免疫熒光染色檢測(cè)各組兔LSCs陽(yáng)性標(biāo)志物p63的表達(dá),并比較各組陽(yáng)性率。結(jié)果:共培養(yǎng)5d后,倒置顯微鏡、HE染色觀察細(xì)胞形態(tài),羊膜組、纖維蛋白膠組細(xì)胞排列緊密,呈大小不等的團(tuán)塊狀集落,細(xì)胞大小基本一致;對(duì)照組細(xì)胞排列相對(duì)稀疏;掃描電鏡下觀察見纖維蛋白膠組、羊膜組細(xì)胞與載體貼附良好。免疫熒光染色顯示纖維蛋白膠組、羊膜組和對(duì)照組LSCs的p63陽(yáng)性率分別為(69.93±8.76)%、(78.36±8.56)%和(58.59±8.31)%,三組間總體比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=9.43,P=0.00)。兩兩比較中纖維蛋白膠組、羊膜組LSCs的p63陽(yáng)性率均大于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.05)。纖維蛋白膠組、羊膜組的p63陽(yáng)性率比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:以纖維蛋白膠、羊膜作為載體,HPDLSCs作為飼細(xì)胞的3D共培養(yǎng)模型有助于體外擴(kuò)增兔角膜緣干細(xì)胞。
【圖文】：

圖 1A P3代 HPDLSCs細(xì)胞大小均一Fig.1AUniformsizeofthirdgenerationcells面標(biāo)志物的表達(dá)果顯示，間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物 CD90（D34（0.3％）低表達(dá)。體及羊膜載體大體形態(tài)觀察及結(jié)構(gòu)半透明凝膠狀，厚約 1mm，易從 24孔板平均孔徑約為 80um，掃描電鏡觀察呈不規(guī)，各孔隙間相互連接。羊膜載體厚約 400載體密集，HE染色可見上皮細(xì)胞層、基質(zhì)皮細(xì)胞層為單層上皮細(xì)胞，排列整齊，基學(xué)觀察細(xì)胞，第 2天見細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，3天可見細(xì)

DLSCs量逐漸減少。掃描電鏡結(jié)果顯示：纖維蛋白膠載體和羊膜載體，呈不狀的立體空間結(jié)構(gòu)，表面縱橫交錯(cuò)，各孔隙間相互連接；纖維蛋白載體組體組培養(yǎng)的角膜緣干細(xì)胞均勻附著在載體骨架上，并可觀察到分裂象的細(xì)胞-C)；HE染色見 LSCs呈圓形或橢圓形，纖維蛋白膠組和羊膜組細(xì)胞數(shù)量相對(duì)較照組細(xì)胞排列相對(duì)稀疏（圖 2D-F)。
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R77

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本文編號(hào)：2595547