【摘要】：目的:脈絡(luò)膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV），是由多種疾病引起的病理性脈絡(luò)膜新生血管侵入視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）下和/或上增殖形成的纖維血管膜，是國內(nèi)外致盲的主要因素之一。目前對于CNV的治療方法很多，但由于其費用昂貴、療效不確切、安全性欠佳，因此CNV的研究成為目前困擾眼科界的難題之一。塞來昔布（celecoxib）是一種常見的非甾體類消炎藥，高度選擇性抑制環(huán)氧化酶-2（COX-2），很多研究證實其具有抑制CNV的作用。目前研究顯示信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3（signal transducer andactivator of transcription3，STAT3）參與腫瘤以及多種眼部新生血管相關(guān)疾病的發(fā)展過程。本研究通過觀察STAT3在激光誘導(dǎo)的棕色挪威(Brown Norway，BN)大鼠脈絡(luò)膜新生血管（CNV）模型中的表達規(guī)律以及塞來昔布對實驗性BN大鼠脈絡(luò)膜新生血管中STAT3、COX-2、VEGF表達的影響，從而探討CNV的發(fā)病機制和塞來昔布抑制CNV的作用機制。 方法： 1實驗性大鼠脈絡(luò)膜新生血管模型建立 1.110只健康雄性棕色挪威（Brown Norway，BN）大鼠（每只大鼠右眼為實驗眼，左眼為對照眼），氪激光(波長647nm,功率360mW,光斑直徑50μm,曝光時間0.05s)距離視盤2-3個視盤直徑在視網(wǎng)膜血管之間均勻光凝9個點,以見到光凝斑有氣泡產(chǎn)生為準提示Bruch’s膜被擊穿，建立大鼠CNV模型。 1.2于光凝后第1d、3d、7d、14d、21d行熒光素眼底血管造影(fluoresceinfundus angiography，F(xiàn)FA)。 1.3造影后6h待大鼠體內(nèi)熒光素大部分被排出后，處死大鼠，摘出眼球，制作眼杯石蠟包埋并切片。選取有明確血管化的激光斑連續(xù)切片中“最大CNV膜”切片，常規(guī)HE染色，并計算CNV膜相對厚度。 1.4對實驗結(jié)果采用SPSS13.0行卡方檢驗、非參數(shù)檢驗等統(tǒng)計分析。 2實驗性脈絡(luò)膜新生血管中STAT3的表達 2.1健康雄性棕色挪威(Brown Norway，BN)大鼠12只，隨機分為激光光凝后1d、3d、7d、14d四組，各組3只，激光光凝建立CNV模型，方法同前。 2.2RT-PCR檢測STAT3mRNA各時間點的表達情況。 2.3免疫組化取第一部分“最大CNV膜”切片檢測激光光凝后1d、3d、7d、14d磷酸化STAT3的表達情況。采用CMIS-2011細胞醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)測定其染色的平均灰度值，以未受激光光凝眼的組織切片做對照。 2.4對實驗結(jié)果采用SPSS13.0行方差分析、t檢驗、正態(tài)性檢驗等統(tǒng)計分析。 3塞來昔布抑制實驗性脈絡(luò)膜新生血管中STAT3、COX-2、VEGF表達的研究 3.1健康雄性棕色挪威(Brown Norway，BN)大鼠15只，隨機分為空白對照組、實驗對照組和塞來昔布治療組，其中空白對照組3只，其余兩組各6只。實驗對照組和塞來昔布治療組12只大鼠激光光凝建立CNV模型，方法同前。塞來昔布治療組在激光光凝前一周經(jīng)口灌胃塞來昔布50mg／kg，一天兩次，直到實驗結(jié)束。 3.2于光凝后3d、7d、21d對實驗對照組和塞來昔布治療組大鼠分別行眼底熒光造影檢查，觀察各組各時間點CNV發(fā)生率。 3.3造影后各組隨機選取兩只大鼠處死，摘取眼球。制作空白對照組球后段組織切片以及實驗對照組和塞來昔布治療組的“最大CNV膜”切片。 3.4HE染色各組各時間點“最大CNV膜”切片，軟件計算CNV膜相對厚度。 3.5免疫組織化學(xué)方法檢測各組各時間點“最大CNV膜”切片磷酸化STAT3、COX-2、VEGF的表達情況。 3.6對實驗結(jié)果采用SPSS13.0行卡方檢驗、t檢驗等統(tǒng)計分析。 結(jié)果: 1實驗性脈絡(luò)膜新生血管模型的建立 1.1光凝后7dCNV開始出現(xiàn),21d CNV發(fā)生率達最高13/18，72.22%，（χ~2=118.389，P＜0.001） 1.2FFA檢查可見造影早期表現(xiàn)為強熒光斑，晚期出現(xiàn)與視網(wǎng)膜血管無關(guān)的熒光素滲漏。 1.3光鏡下可見CNV由脈絡(luò)膜穿經(jīng)破裂的Bruch’s膜向視網(wǎng)膜下發(fā)展，還可見到RPE細胞的遷移增生、巨噬細胞的浸潤和纖維母細胞的增多等。光凝后7d早期CNV形成，其后CNV進一步增生，光凝后21d，纖維血管增生明顯，CNV膜明顯增厚,內(nèi)皮細胞圍成新生血管管腔 1.4CNV相對厚度隨時間的變化也有相應(yīng)改變，在光凝后7d-21d逐漸增加，21d到達高峰。（χ~2=23.484，P＜0.05） 2實驗性脈絡(luò)膜新生血管中STAT3的表達 2.1RT-PCR檢測表明，激光光凝后3天STAT3mRNA的表達達高峰，后逐漸下降（F=36.503，p＜0.01）。 2.2免疫組化檢測表明，磷酸化STAT3在激光光凝后3天表達達到高峰，，后逐漸下降，其表達規(guī)律同RT-PCRmRNA的表達規(guī)律基本一致（F=111.629，P＜0.01）。 3塞來昔布抑制實驗性脈絡(luò)膜新生血管中STAT3、COX-2、VEGF表達的研究 3.1FFA檢查顯示光凝后7d、21d塞來昔布治療組CNV發(fā)生率明顯低于實驗對照組（χ~2=9.036,10.923P＜0.01，P＜0.01）。 3.2塞來昔布治療組CNV相對厚度明顯低于實驗對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.730,4.962P＜0.05,P＜0.01）。 3.3免疫組化結(jié)果顯示，磷酸化STAT3光凝后3天表達最多，光凝后21天表達微弱;光凝后3d、7d塞來昔布治療組P-STAT3的表達明顯低于實驗對照組（t=㧟7.834,㧟3.547P＜0.01，P＜0.01）光凝后21d兩組之間表達無差異（t=0.101P=0.921）。COX-2與VEGF表達規(guī)律相似，隨時間的發(fā)展而陽性表達增加，兩者均在光凝后21天表達最多，光凝后7d，21d塞來昔布組COX-2、VEGF的表達明顯低于實驗對照組（t=㧟3.872，㧟10.905，㧟3.608，㧟4.284P＜0.01，＜0.01，＜0.01，＜0.01）；光凝后3d兩組之間COX-2、VEGF表達無差異（t=㧟2.042，㧟1.972P=0.056,0.064）。 結(jié)論:1STAT3參與了CNV的早期形成過程，這一過程可能是通過參與COX-2，VEGF的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，進而促進新生血管形成而實現(xiàn)的。 2選擇性COX-2抑制劑塞來昔布能夠有效抑制激光誘導(dǎo)的CNV的形成，可能是通過抑制STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，減少COX-2，VEGF的表達而實現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R773.4

【參考文獻】

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1 蔡巖;王雨生;徐建鋒;石圓圓;張朝霞;馬吉獻;;玻璃體內(nèi)注射塞來昔布對激光誘導(dǎo)大鼠脈絡(luò)膜新生血管的抑制作用[J];眼科研究;2009年11期

2 趙世紅,何守志;氪激光誘導(dǎo)的大鼠脈絡(luò)膜新生血管模型研究[J];中華眼科雜志;2003年05期

3 付金玲;王桂云;隋桂琴;鄒賀;孫利仁;;塞來昔布對實驗性糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜病變的影響[J];中國老年學(xué)雜志;2008年09期

本文編號：2515021