【摘要】：目的:脈絡(luò)膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV），是由多種疾病引起的病理性脈絡(luò)膜新生血管侵入視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）下和/或上增殖形成的纖維血管膜，是國(guó)內(nèi)外致盲的主要因素之一。目前對(duì)于CNV的治療方法很多，但由于其費(fèi)用昂貴、療效不確切、安全性欠佳，因此CNV的研究成為目前困擾眼科界的難題之一。塞來(lái)昔布（celecoxib）是一種常見(jiàn)的非甾體類消炎藥，高度選擇性抑制環(huán)氧化酶-2（COX-2），很多研究證實(shí)其具有抑制CNV的作用。目前研究顯示信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3（signal transducer andactivator of transcription3，STAT3）參與腫瘤以及多種眼部新生血管相關(guān)疾病的發(fā)展過(guò)程。本研究通過(guò)觀察STAT3在激光誘導(dǎo)的棕色挪威(Brown Norway，BN)大鼠脈絡(luò)膜新生血管（CNV）模型中的表達(dá)規(guī)律以及塞來(lái)昔布對(duì)實(shí)驗(yàn)性BN大鼠脈絡(luò)膜新生血管中STAT3、COX-2、VEGF表達(dá)的影響，從而探討CNV的發(fā)病機(jī)制和塞來(lái)昔布抑制CNV的作用機(jī)制。 方法： 1實(shí)驗(yàn)性大鼠脈絡(luò)膜新生血管模型建立 1.110只健康雄性棕色挪威（Brown Norway，BN）大鼠（每只大鼠右眼為實(shí)驗(yàn)眼，左眼為對(duì)照眼），氪激光(波長(zhǎng)647nm,功率360mW,光斑直徑50μm,曝光時(shí)間0.05s)距離視盤(pán)2-3個(gè)視盤(pán)直徑在視網(wǎng)膜血管之間均勻光凝9個(gè)點(diǎn),以見(jiàn)到光凝斑有氣泡產(chǎn)生為準(zhǔn)提示Bruch’s膜被擊穿，建立大鼠CNV模型。 1.2于光凝后第1d、3d、7d、14d、21d行熒光素眼底血管造影(fluoresceinfundus angiography，F(xiàn)FA)。 1.3造影后6h待大鼠體內(nèi)熒光素大部分被排出后，處死大鼠，摘出眼球，制作眼杯石蠟包埋并切片。選取有明確血管化的激光斑連續(xù)切片中“最大CNV膜”切片，常規(guī)HE染色，并計(jì)算CNV膜相對(duì)厚度。 1.4對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS13.0行卡方檢驗(yàn)、非參數(shù)檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)分析。 2實(shí)驗(yàn)性脈絡(luò)膜新生血管中STAT3的表達(dá) 2.1健康雄性棕色挪威(Brown Norway，BN)大鼠12只，隨機(jī)分為激光光凝后1d、3d、7d、14d四組，各組3只，激光光凝建立CNV模型，方法同前。 2.2RT-PCR檢測(cè)STAT3mRNA各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)情況。 2.3免疫組化取第一部分“最大CNV膜”切片檢測(cè)激光光凝后1d、3d、7d、14d磷酸化STAT3的表達(dá)情況。采用CMIS-2011細(xì)胞醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)測(cè)定其染色的平均灰度值，以未受激光光凝眼的組織切片做對(duì)照。 2.4對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS13.0行方差分析、t檢驗(yàn)、正態(tài)性檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)分析。 3塞來(lái)昔布抑制實(shí)驗(yàn)性脈絡(luò)膜新生血管中STAT3、COX-2、VEGF表達(dá)的研究 3.1健康雄性棕色挪威(Brown Norway，BN)大鼠15只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和塞來(lái)昔布治療組，其中空白對(duì)照組3只，其余兩組各6只。實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和塞來(lái)昔布治療組12只大鼠激光光凝建立CNV模型，方法同前。塞來(lái)昔布治療組在激光光凝前一周經(jīng)口灌胃塞來(lái)昔布50mg／kg，一天兩次，直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。 3.2于光凝后3d、7d、21d對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和塞來(lái)昔布治療組大鼠分別行眼底熒光造影檢查，觀察各組各時(shí)間點(diǎn)CNV發(fā)生率。 3.3造影后各組隨機(jī)選取兩只大鼠處死，摘取眼球。制作空白對(duì)照組球后段組織切片以及實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和塞來(lái)昔布治療組的“最大CNV膜”切片。 3.4HE染色各組各時(shí)間點(diǎn)“最大CNV膜”切片，軟件計(jì)算CNV膜相對(duì)厚度。 3.5免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)各組各時(shí)間點(diǎn)“最大CNV膜”切片磷酸化STAT3、COX-2、VEGF的表達(dá)情況。 3.6對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS13.0行卡方檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果: 1實(shí)驗(yàn)性脈絡(luò)膜新生血管模型的建立 1.1光凝后7dCNV開(kāi)始出現(xiàn),21d CNV發(fā)生率達(dá)最高13/18，72.22%，（χ~2=118.389，P＜0.001） 1.2FFA檢查可見(jiàn)造影早期表現(xiàn)為強(qiáng)熒光斑，晚期出現(xiàn)與視網(wǎng)膜血管無(wú)關(guān)的熒光素滲漏。 1.3光鏡下可見(jiàn)CNV由脈絡(luò)膜穿經(jīng)破裂的Bruch’s膜向視網(wǎng)膜下發(fā)展，還可見(jiàn)到RPE細(xì)胞的遷移增生、巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)和纖維母細(xì)胞的增多等。光凝后7d早期CNV形成，其后CNV進(jìn)一步增生，光凝后21d，纖維血管增生明顯，CNV膜明顯增厚,內(nèi)皮細(xì)胞圍成新生血管管腔 1.4CNV相對(duì)厚度隨時(shí)間的變化也有相應(yīng)改變，在光凝后7d-21d逐漸增加，21d到達(dá)高峰。（χ~2=23.484，P＜0.05） 2實(shí)驗(yàn)性脈絡(luò)膜新生血管中STAT3的表達(dá) 2.1RT-PCR檢測(cè)表明，激光光凝后3天STAT3mRNA的表達(dá)達(dá)高峰，后逐漸下降（F=36.503，p＜0.01）。 2.2免疫組化檢測(cè)表明，磷酸化STAT3在激光光凝后3天表達(dá)達(dá)到高峰，，后逐漸下降，其表達(dá)規(guī)律同RT-PCRmRNA的表達(dá)規(guī)律基本一致（F=111.629，P＜0.01）。 3塞來(lái)昔布抑制實(shí)驗(yàn)性脈絡(luò)膜新生血管中STAT3、COX-2、VEGF表達(dá)的研究 3.1FFA檢查顯示光凝后7d、21d塞來(lái)昔布治療組CNV發(fā)生率明顯低于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組（χ~2=9.036,10.923P＜0.01，P＜0.01）。 3.2塞來(lái)昔布治療組CNV相對(duì)厚度明顯低于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.730,4.962P＜0.05,P＜0.01）。 3.3免疫組化結(jié)果顯示，磷酸化STAT3光凝后3天表達(dá)最多，光凝后21天表達(dá)微弱;光凝后3d、7d塞來(lái)昔布治療組P-STAT3的表達(dá)明顯低于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組（t=㧟7.834,㧟3.547P＜0.01，P＜0.01）光凝后21d兩組之間表達(dá)無(wú)差異（t=0.101P=0.921）。COX-2與VEGF表達(dá)規(guī)律相似，隨時(shí)間的發(fā)展而陽(yáng)性表達(dá)增加，兩者均在光凝后21天表達(dá)最多，光凝后7d，21d塞來(lái)昔布組COX-2、VEGF的表達(dá)明顯低于實(shí)驗(yàn)對(duì)照組（t=㧟3.872，㧟10.905，㧟3.608，㧟4.284P＜0.01，＜0.01，＜0.01，＜0.01）；光凝后3d兩組之間COX-2、VEGF表達(dá)無(wú)差異（t=㧟2.042，㧟1.972P=0.056,0.064）。 結(jié)論:1STAT3參與了CNV的早期形成過(guò)程，這一過(guò)程可能是通過(guò)參與COX-2，VEGF的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，進(jìn)而促進(jìn)新生血管形成而實(shí)現(xiàn)的。 2選擇性COX-2抑制劑塞來(lái)昔布能夠有效抑制激光誘導(dǎo)的CNV的形成，可能是通過(guò)抑制STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，減少COX-2，VEGF的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R773.4

【參考文獻(xiàn)】

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1 蔡巖;王雨生;徐建鋒;石圓圓;張朝霞;馬吉獻(xiàn);;玻璃體內(nèi)注射塞來(lái)昔布對(duì)激光誘導(dǎo)大鼠脈絡(luò)膜新生血管的抑制作用[J];眼科研究;2009年11期

2 趙世紅,何守志;氪激光誘導(dǎo)的大鼠脈絡(luò)膜新生血管模型研究[J];中華眼科雜志;2003年05期

3 付金玲;王桂云;隋桂琴;鄒賀;孫利仁;;塞來(lái)昔布對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜病變的影響[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2008年09期

本文編號(hào)：2515021