【摘要】：目的建立和人體視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷(RIRI)疾病類似的動(dòng)物模型,對(duì)動(dòng)物給予促紅細(xì)胞生成素(rhEPO)聯(lián)合復(fù)明飲治療,并分析該藥物對(duì)RIRI的作用機(jī)制,為臨床上診治RIRI奠定實(shí)驗(yàn)學(xué)基礎(chǔ)。同時(shí)在臨床實(shí)踐中以促紅細(xì)胞生成素聯(lián)合復(fù)明飲治療視網(wǎng)膜缺血病人,研究其臨床療效。方法1.以82只未感染任何疾病的純種雄性大耳白兔為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,將其進(jìn)行隨機(jī)分為3組,正常組、損傷組、治療組各10只、36只、36只;損傷組與治療組兩組依照其不同灌注時(shí)間,各分為損傷后1/4d、1/2d、1d、2d、4d、8d組,共6組,每組大耳兔各6只。2.全部大耳兔均對(duì)右眼行建模治療,除正常組10只大耳兔不建模外,利用前房灌注增加眼內(nèi)壓途徑,建模為人視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型。對(duì)正常組動(dòng)物從耳緣部位靜注0.9%NaCl,劑量為2.0ml/kg,一日一次;損傷組在建模后,從耳緣部位靜注0.9%NaCl,劑量同正常組;治療組在建模后,用灌胃針對(duì)小鼠進(jìn)行注復(fù)明飲灌胃,大耳兔缺血后5min向其耳緣部位注射rhEPO(1000U/k)。3.損傷后1/4d、1/2d、1d、2d、4d、8d,從耳緣部位靜注10毫升02處死,死后即刻取其眼球部位,進(jìn)行包埋切片。4.運(yùn)用HE染色法,觀察分析各個(gè)時(shí)間段動(dòng)物視網(wǎng)膜的結(jié)構(gòu)改變情況;通過免疫組化法分析視網(wǎng)膜細(xì)胞Bcl-2、Bax水平;通過TUNEL法觀察視網(wǎng)膜內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞的變化;運(yùn)用熒光金逆行示蹤方法評(píng)價(jià)RGCs生存率。對(duì)全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件采用SPSS18.0進(jìn)行處理。臨床研究以哈爾濱二四二醫(yī)院眼科被診斷為視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈阻塞的60名病人為研究對(duì)象,對(duì)照組為常規(guī)治療方式,研究組基于常規(guī)治療,采取復(fù)明飲聯(lián)合促紅細(xì)胞生成素治療方式。研究組、對(duì)照組各30例患者,需要治療的眼睛只數(shù)分別為36只、35只,對(duì)患者進(jìn)行實(shí)力改善進(jìn)行檢查。結(jié)果1.HE染色:(1)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量,損傷組相比正常組偏低。損傷組中,損傷后1/4d視網(wǎng)膜出現(xiàn)輕度水腫情況,且隨著損傷時(shí)間的延長(zhǎng),水腫情況更為嚴(yán)重,組織細(xì)胞間隙加大,體積增大,液泡明顯;水腫1d后,水腫情況最嚴(yán)重,隨后2d～4d,水腫程度逐漸降低,細(xì)胞間隙逐漸縮小;8d后水腫現(xiàn)象褪去,細(xì)胞間隙恢復(fù)正常。(2)治療組:神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量偏低、細(xì)胞間隙較損傷組更小,視網(wǎng)膜水腫情況較損傷組對(duì)比更輕微。2.免疫組化分析:(1)正常組:凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白為陰性。(2)損傷組:損傷后1/4d,視網(wǎng)膜中少數(shù)Bcl-2、Bax蛋白為陽性,多在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞間隙;隨損傷時(shí)間的增加,Bcl-2、Bax蛋白陽性表達(dá)情況更為明顯,1d后陽性表達(dá)數(shù)量最多,內(nèi)核層有少量呈陽性,外核層全為陰性;2d～4d陽性表達(dá)數(shù)量減低,多數(shù)在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞間隙進(jìn)行表達(dá);損傷后8d,全部表達(dá)呈陰性。(3)治療組:Bcl-2、Bax表達(dá)情況和損傷組類似。對(duì)比損傷后1/4d、1/2d、1d、2d、4d、8d各時(shí)段,Bcl-2表達(dá)水平,除8d外,治療組相比損傷組明顯偏高。Bax水平,治療組相比損傷組明顯偏低(P0.05)。3.TUNEL法分析結(jié)果:(1)正常組:神經(jīng)細(xì)胞未見凋亡情況。(2)損傷組:損傷后1/4d,少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞可見凋亡情況,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),凋亡情況逐漸嚴(yán)重,陽性數(shù)量增加,損傷1d后,陽性表達(dá)率升至最高,2d后呈降低趨勢(shì),3d后顯著下降,5d后陽性表達(dá)全部消失。(3)治療組:神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況和損傷組類似,但凋亡細(xì)胞的陽性表達(dá)率,與損傷組對(duì)比明顯偏低。損傷組與治療組,損傷后1/4d、1/2d、1d、2d、4d時(shí)間段,細(xì)胞凋亡情況對(duì)比有明顯差別(P0.01);5d后,細(xì)胞凋亡情況對(duì)比無顯著性差異(P0.05)。4.RGCs存活率:(1)正常組RGCs存活率:各時(shí)段分別為63%、66%等。(2)損傷組RGCs存活率:各時(shí)段分別為82%、83%等。(3)治療組RGCs存活率:各時(shí)段分別為95%、94%等。三組之間對(duì)比,均呈顯著性差異(P0.05)。臨床實(shí)驗(yàn),兩組治療前后視野檢測(cè)比較:研究組在治療后的平均光敏度增加水平顯著高于對(duì)照組,兩組對(duì)比具顯著性差異(P0.05);研究組治療后平均缺損改善程度明顯高于對(duì)照組,對(duì)比具顯著性差異(P0.05)。兩組間治療前眼壓無差異性,治療后眼壓及治療前后眼壓差值均有差異(P0.05)。兩組間治療前b波幅度無差異性,治療后b波幅度及治療前后b波幅度差值均有差異(P0.05)。治療后,研究組總有效率86.7%;對(duì)照組總有效率66.7%,明顯小于研究組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 rhEPO聯(lián)合復(fù)明飲對(duì)視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷治療有明顯的臨床療效,可幫助維持視網(wǎng)膜的正常形態(tài)結(jié)構(gòu);復(fù)明飲對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況有明顯的抑制作用,主要原因是和Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R774.1

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6 陳，

本文編號(hào)：2439234