【摘要】：研究背景感音神經(jīng)性聾是一種較為常見的聲波感受和聲波傳導(dǎo)障礙性疾病,多為重度耳聾。該病的病變常常發(fā)生于柯蒂氏器的內(nèi)外毛細(xì)胞、聽神經(jīng)及各級聽中樞,患者對于聲音的感受與神經(jīng)沖動的傳導(dǎo)發(fā)生障礙,從而引起聽力的下降。感音神經(jīng)性耳聾極大的影響了患者的生活質(zhì)量。感音神經(jīng)性耳聾分為感音性耳聾(病變位于毛細(xì)胞,又稱耳蝸性聾)和神經(jīng)性耳聾(病變位于聽神經(jīng)及其傳導(dǎo)通路,又稱蝸后性聾)。蝸后性耳聾由于神經(jīng)細(xì)胞的缺乏自我修復(fù)的能力而很難治愈。對于感音神經(jīng)性聾的恢復(fù)策略,最新的探索表明干細(xì)胞植入是潛在的治療手段。干細(xì)胞具有多向分化能力,有分化為新的毛細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和支持細(xì)胞的潛能。許多研究都表明,Wnt信號通路對于神經(jīng)干細(xì)胞的增殖發(fā)揮著決定性作用。并且,Wnt信號通路的激活有可能可以使非神經(jīng)元細(xì)胞再次進(jìn)入細(xì)胞周期轉(zhuǎn)變?yōu)樯窠?jīng)元細(xì)胞,這就使得治療蝸后性聾成為了可能。Wnt信號通路是一種在進(jìn)化中高度保守的信號通路,在多種生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要作用。Wnt蛋白通過自分泌或旁分泌的與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,激活下游的信號通路,調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)從而影響著極細(xì)胞、干細(xì)胞等的細(xì)胞增殖、分化與凋亡的過程。通路的異常激活往往與腫瘤的發(fā)生有關(guān)。Wnt信號通路分為兩種,經(jīng)典的Wnt信號通路和非經(jīng)典的Wnt信號通路。β-連環(huán)蛋白的富集與入核是經(jīng)典Wnt信號通路激活的標(biāo)志。β-連環(huán)蛋白入核后與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合從而調(diào)節(jié)下游目的基因的表達(dá)。而非經(jīng)典的Wnt信號通路,不依賴于β-連環(huán)蛋白,是由其他的一些蛋白或離子參與構(gòu)成。耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的缺失可引起神經(jīng)性耳聾的發(fā)生。而有大量研究表明,耳毒性藥物、噪聲、缺氧、衰老等常見損傷,均可造成小鼠耳蝸毛細(xì)胞及螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡,造成耳聾。而目前對于耳毒性藥物的研究,較多集中在順鉑等藥物。紫杉醇由于其與順鉑常常聯(lián)合使用,其耳毒性往往為順鉑所掩蓋,研究較少。而研究也表明紫杉醇確實具有神經(jīng)毒性,可以猜測紫杉醇的耳毒性是對耳的神經(jīng)細(xì)胞造成了影響。螺旋神經(jīng)節(jié)作為聽覺通路的第一級神經(jīng)元,有理由懷疑紫杉醇對于螺旋神經(jīng)節(jié)有損傷作用而這一作用正是它耳毒性的原因。本研究通過組織培養(yǎng)的方式來探究紫杉醇對于螺旋神經(jīng)節(jié)是否具有獨立的損傷作用,并探討Wnt信號通路對于紫杉醇的作用是否具有一定的影響。實驗?zāi)康囊訡57BL/6小鼠作為研究對象,探討紫杉醇本身是否對小鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)產(chǎn)生獨立的損傷作用,若有損傷,則進(jìn)一步探討其機(jī)制及Wnt信號通路在此過程中的作用。實驗方法1.選取出生后3天(p3)野生型的C57BL/6品系小鼠為研究對象,取小鼠耳蝸中轉(zhuǎn)(帶螺旋神經(jīng)節(jié))分組進(jìn)行原代培養(yǎng)。2.分別使用不同濃度紫杉醇培養(yǎng),利用MTT法測定細(xì)胞存活程度,并選取合適濃度進(jìn)行進(jìn)一步實驗。將小鼠耳蝸中轉(zhuǎn)隨機(jī)分為四組,分別使用培基(不加藥的空白對照)、紫杉醇、紫杉醇+Wnt信號通路激動劑(Wnt3a)、紫杉醇+Wnt信號通路抑制劑(IWP2)來處理中轉(zhuǎn)(帶螺旋神經(jīng)節(jié))48h,之后分別進(jìn)行免疫熒光染色和TUNEL染色,觀察螺旋神經(jīng)節(jié)及神經(jīng)纖維的變化。使用蛋白印跡試驗(Westernblot)來印證免疫熒光染色的實驗結(jié)果。3.紫杉醇腹腔注射一月齡小鼠,測聽后解剖,取耳蝸制作冰凍切片進(jìn)行免疫熒光染色,觀察螺旋神經(jīng)節(jié)的變化。實驗結(jié)果1.MTT結(jié)果顯示,1μl紫杉醇即可造成細(xì)胞存活率的下降,紫杉醇對螺旋神經(jīng)節(jié)的損傷呈現(xiàn)濃度依賴,后續(xù)實驗選用30μl濃度進(jìn)行。免疫熒光染色顯示,紫杉醇組螺旋神經(jīng)節(jié)結(jié)構(gòu)被破壞,細(xì)胞數(shù)量減少,神經(jīng)纖維數(shù)量減少。2.免疫熒光染色顯示紫杉醇組螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞形態(tài)破壞,出現(xiàn)了胞質(zhì)致密,染色質(zhì)邊集,核固縮及凋亡小體等凋亡表現(xiàn)。而TUNEL染色證實了凋亡的存在。3.免疫熒光染色顯示紫杉醇組螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞Caspase-3染色陽性。蛋白印跡試驗也證實了 Caspase-3的表達(dá)增多。4.加入Wnt信號通路激動劑組螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量介于對照組和紫杉醇組之間,形態(tài)較紫杉醇組稍好,神經(jīng)纖維基本整齊排列。加入抑制劑組螺旋神經(jīng)節(jié)結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞,細(xì)胞數(shù)量大量少,形態(tài)破壞較為嚴(yán)重,凋亡明顯,神經(jīng)纖維破壞嚴(yán)重。5.腹腔注射紫杉醇造模后的一月齡小鼠測聽結(jié)果顯示與正常一月齡小鼠并無顯著差別,但冰凍切片顯示耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞存在損傷和凋亡。結(jié)論1.紫杉醇對螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞有明顯損傷作用。2.損傷作用通過激活Caspase-3,誘導(dǎo)凋亡實現(xiàn)。3.Wnt信號通路對于紫杉醇的損傷具有一定的保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R764.43

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉旭;張東亮;劉文虎;;Wnt信號通路與常染色體顯性多囊腎病發(fā)病關(guān)系的研究進(jìn)展[J];臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志;2011年01期

2 王麗雅;廖學(xué)娟;鄭曉輝;龍潔;;Wnt信號通路與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨之間的關(guān)系[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年20期

3 魏巍;李惠民;史明霞;;Wnt信號通路在慢性粒細(xì)胞白血病中的作用[J];山東醫(yī)藥;2013年05期

4 李萍華;劉鈺瑜;崔燎;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂和成骨分化過程中Wnt信號通路的調(diào)控效應(yīng)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年10期

5 文靜;方易冰;曾曉榮;;Wnt信號通路對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化作用的研究進(jìn)展[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2013年02期

6 殷秋菊;趙娉婷;楊春波;李筱榮;;Wnt信號通路在視網(wǎng)膜色素上皮發(fā)育中的作用[J];中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版);2014年01期

7 魏田利;朱喜科;;Wnt信號通路與胸腺發(fā)育[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2012年06期

8 謝興文;李盛華;趙永利;李寧;宋敏;;Wnt信號通路在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;2011年12期

9 馬玉新;祝頌松;;Wnt信號通路與軟骨細(xì)胞增殖分化關(guān)系的研究現(xiàn)狀[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2013年11期

10 陳定國;張瓊;;Wnt信號通路抑制因子DKK-1蛋白的實驗研究進(jìn)展[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2014年14期

相關(guān)會議論文 前10條

1 邵娜;紀(jì)春巖;;組蛋白去乙�；敢种苿┩ㄟ^活化Wnt信號通路抑制急性淋巴細(xì)胞白血病的研究[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

2 邵娜;紀(jì)春巖;;組蛋白去乙酰化酶抑制劑通過活化Wnt信號通路抑制急性淋巴細(xì)胞白血病的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會血液學(xué)分會第十三屆全國血栓與止血學(xué)術(shù)會議暨“血栓栓塞性疾�。ㄑㄅc止血）基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展”論文摘要匯編及學(xué)習(xí)班講義[C];2011年

3 頓耀艷;熊正國;;Wnt信號通路在中腦多巴胺能神經(jīng)元發(fā)育中的作用[A];中國解剖學(xué)會2013年年會論文文摘匯編[C];2013年

4 ;經(jīng)典Wnt信號通路抑制劑[A];2012中國醫(yī)師協(xié)會中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師分會神經(jīng)病學(xué)專家委員會學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2012年

5 王文;艾厚喜;孫芳玲;張麗;蔣瑩;;缺血性腦損傷后Wnt信號通路對神經(jīng)再生的調(diào)節(jié)作用與機(jī)制[A];2013年全國老年性癡呆與相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

6 王文;艾厚喜;孫芳玲;張麗;;缺血性腦損傷后Wnt信號通路對神經(jīng)再生的調(diào)節(jié)作用與機(jī)制[A];2013年中國藥學(xué)大會暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年

7 王文;艾厚喜;孫芳玲;張麗;蔣瑩;;缺血性腦損傷后Wnt信號通路對神經(jīng)再生的調(diào)節(jié)作用與機(jī)制[A];第三屆中國藥理學(xué)會補(bǔ)益藥藥理專業(yè)委員會學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

8 戴敏;黃麗芳;劉文勵;孫漢英;;急性放射損傷后骨髓Wnt信號通路的變化及其干預(yù)研究[A];第八屆全國中西醫(yī)結(jié)合血液病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

9 李萍華;劉鈺瑜;崔燎;;骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成脂和成骨分化過程的Wnt信號通路調(diào)控初探[A];中國藥理學(xué)會第十次全國學(xué)術(shù)會議�？痆C];2009年

10 孫漢英;戴敏;黃麗芳;劉文勵;;急性放射損傷后骨髓Wnt信號通路的變化及其干預(yù)研究[A];第11次中國實驗血液學(xué)會議論文匯編[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 趙亞男;基于�？撇“傅奶悄虿冎兴幱盟幰�(guī)律研究及糖尿病潰瘍大鼠Wnt信號通路表達(dá)與中藥干預(yù)機(jī)制研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2016年

2 姚慶民;甲強(qiáng)龍對慢性淋巴細(xì)胞白血病Wnt信號通路的影響[D];山東大學(xué);2014年

3 孫志成;SFRP2通過經(jīng)典Wnt信號通路調(diào)控增生性瘢痕成纖維細(xì)胞凋亡及相關(guān)功能的機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

4 桂書彥;Wnt信號通路對NIT-1胰島β細(xì)胞的作用及機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2010年

5 袁媛;K562細(xì)胞中Wnt5a介導(dǎo)不同受體途徑激活經(jīng)典或非經(jīng)典Wnt信號通路及其機(jī)制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

6 劉娜;炎癥微環(huán)境影響下Wnt信號通路對牙周膜干細(xì)胞骨向分化的調(diào)控機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

7 徐揚(yáng);R-spondin及其受體在Wnt信號通路中相互作用的研究[D];吉林大學(xué);2013年

8 華軍益;Wnt信號通路與動脈損傷后再狹窄的關(guān)系研究[D];浙江大學(xué);2012年

9 馬力;nm23-H_1基因突變對人高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株L9981經(jīng)典Wnt信號通路調(diào)控機(jī)制的影響[D];四川大學(xué);2006年

10 張志勇;Wnt信號通路在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)調(diào)控機(jī)制的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張藝宏;經(jīng)典Wnt信號通路與產(chǎn)后子宮內(nèi)膜修復(fù)的關(guān)系[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陳劍華;姜黃素對食管癌細(xì)胞Eca-109增殖及Wnt信號通路影響的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 康婕;Wnt信號通路對大鼠腦室出血后柔腦膜纖維化的影響[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

4 馬小杰;靜壓力作用下經(jīng)典Wnt信號通路調(diào)控牙周膜干細(xì)胞骨向分化的機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 鄭權(quán);張力載荷下Wnt信號通路偶聯(lián)在終板軟骨細(xì)胞退變中的作用[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2015年

6 沈天一;沉默SET8的表達(dá)對腎細(xì)胞癌惡性表型的影響及其與Wnt信號通路相關(guān)性的機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2016年

7 侯燁;通過調(diào)控Wnt信號通路體外擴(kuò)增造血干細(xì)胞[D];上海師范大學(xué);2016年

8 王瀟麗;尿酸對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過程中Wnt信號通路的影響[D];青島大學(xué);2016年

9 郭文選;Wnt信號通路抑制劑XAV939對人小細(xì)胞肺癌H446增殖及凋亡的影響[D];青島大學(xué);2016年

10 范翊民;多花山竹子中PPBS類成分的分離與新型Wnt信號通路激活劑莪術(shù)醇的結(jié)構(gòu)優(yōu)化[D];貴州大學(xué);2016年

，

本文編號：2401211