【摘要】：目的:研制細胞氧艙,建立間歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)細胞模型并進行驗證。方法:定制細胞實驗艙和空氣模擬對照艙,根據(jù)氧分壓-時間曲線設(shè)計間歇低氧模式。將人肺腺癌細胞A549隨機分為正常對照(Con)組、間歇低氧6 h(6IH)組、間歇低氧9 h(9IH)組、空氣模擬對照6 h(6AC)組、空氣模擬對照9 h(9AC)組、持續(xù)低氧4 h(4SH)組、持續(xù)低氧6 h(6SH)組。暴露結(jié)束后光鏡下觀察細胞形態(tài)改變,real-time PCR、免疫組化法檢測缺氧誘導因子1α(HIF-1α)的mRNA和蛋白表達變化。結(jié)果:該模型間歇低氧模式為5%O_260 min-20%O_230 min,6個循環(huán)。與Con組比較,6AC、9AC組為原本細胞形態(tài),6IH、9IH和6SH組部分細胞出現(xiàn)突起、變圓,胞質(zhì)中出現(xiàn)較多黑色顆粒,細胞邊界模糊,而4SH組未見明顯異常。與6IH組比較,9IH組HIF-1α的mRNA和蛋白表達量明顯增加(P0.05);6IH和9IH組HIF-1α的mRNA和蛋白分別高于4SH和6SH組(P0.05);6AC、9AC組與Con組比較差異不顯著。結(jié)論:5%O_260 min-20%O_230 min的間歇性低氧-復氧細胞模式能模擬阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征病理生理過程,是研究該疾病較理想的細胞模型。
[Abstract]:Objective: to develop cell oxygen chamber and establish intermittent hypoxia (intermittent hypoxia,IH) cell model. Methods: the intermittent hypoxia model was designed according to the oxygen partial pressure-time curve. Human lung adenocarcinoma cell A549 was randomly divided into normal control (Con) group, intermittent hypoxia group for 6 h (6IH), intermittent hypoxia group for 9 h (9IH), air simulated control group for 6 h (6AC), air simulated control group for 9 h (9AC), continuous hypoxia group for 4 h (4SH) and continuous hypoxia group for 6 h (6SH). The changes of cell morphology were observed under light microscope and the expression of mRNA and protein of hypoxia inducible factor-1 偽 (HIF-1 偽) were detected by real-time PCR, immunohistochemical method. Results: the intermittent hypoxia model consisted of 6 cycles of 5%O_260 min-20%O_230 min,. Compared with the Con group, 6AC9AC group had the original cell morphology, and some cells in 6IHH9IH and 6SH group had processes, became round, more black granules appeared in the cytoplasm, and the boundary of the cells was blurred, but no obvious abnormality was found in the 4SH group. Compared with 6IH group, the expression of mRNA and protein of HIF-1 偽 in 9IH group was significantly increased (P0.05); mRNA and protein of HIF-1 偽 in 6IH and 9IH group were higher than those in 4SH and 6SH group (P0.05); 6AC9AC group had no significant difference with Con group. Conclusion: the intermittent hypoxia / reoxygenation cell model of 5%O_260 min-20%O_230 min can simulate the pathophysiological process of obstructive sleep apnea hypopnea syndrome and is an ideal cell model to study the disease.
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院育英兒童醫(yī)院兒童呼吸科;焦作市人民醫(yī)院;
【基金】：浙江省科技廳項目(No.2013C33174) 浙江省自然科學基金資助項目(No.Y2110277) 溫州市科技合作項目(No.H20130001) 浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計劃(No.2014ZDA014) 國家衛(wèi)計委國家重點臨床�？崎_放課題(No.20130201)
【分類號】：R766

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本文編號：2293198