本文選題：干細(xì)胞 + 角膜緣��； 參考：《山西醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：在不添加血清(2%B27代替血清)的條件下對(duì)新西蘭大白兔(New-Zealand Rabbit)角膜緣干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),觀察所培養(yǎng)的干細(xì)胞的生物學(xué)特性,并與傳統(tǒng)添加血清(濃度為10%)培養(yǎng)的兔角膜緣干細(xì)胞進(jìn)行比較,進(jìn)而探討兔角膜緣干細(xì)胞體外無血清培養(yǎng)方法,為構(gòu)建組織工程化角膜及角膜基礎(chǔ)研究積累實(shí)驗(yàn)資料。 方法：(1)無菌條件下獲取兔角膜緣組織,采用酶消化法(DispaseⅡ)制成單細(xì)胞懸液,然后分別用含2%B27(無血清組)及10%胎牛血清(10%血清組)的DMEM/F12(1:1)培養(yǎng)液稀釋成等密度的細(xì)胞懸液。(2)將兩組細(xì)胞懸液直接接種于培養(yǎng)瓶(倒置顯微鏡下觀察兩組細(xì)胞的生長(zhǎng)情況)或96孔板(CCK-8檢測(cè)其克隆增殖能力)。(3)原代培養(yǎng)至第3天、第5天行ΔNp63及角蛋白K3(AE5)免疫熒光染色,分別對(duì)培養(yǎng)的兩組細(xì)胞進(jìn)行干細(xì)胞鑒定并進(jìn)一步進(jìn)行比較。 結(jié)果：(1)于倒置顯微鏡下觀察可見含2%B27的無血清組培養(yǎng)的兔角膜緣干細(xì)胞表現(xiàn)出與傳統(tǒng)含10%胎牛血清的10%血清組培養(yǎng)的角膜緣干細(xì)胞相似的生長(zhǎng)特性。(2)CCK-8細(xì)胞增殖能力檢測(cè)所得細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示兩組細(xì)胞表現(xiàn)出相似的增殖能力：對(duì)數(shù)增殖期大約在第3-5天,之后增殖緩慢進(jìn)入生長(zhǎng)平臺(tái)期。(3)細(xì)胞免疫熒光染色顯示含2%B27的無血清組培養(yǎng)的兔角膜緣干細(xì)胞中大多數(shù)細(xì)胞ΔNp63表達(dá)陽(yáng)性而角蛋白K3(AE5)表達(dá)陰性,且與傳統(tǒng)10%血清組培養(yǎng)的角膜緣干細(xì)胞相比,原代培養(yǎng)第3天ΔNp63表達(dá)陽(yáng)性率相似(P0.05),原代培養(yǎng)第5天ΔNp63陽(yáng)性率略高(P0.001)。 結(jié)論：(1)采用酶消化法可以成功分離獲得兔角膜緣干細(xì)胞；(2)使用成分明確的B27代替血清可培養(yǎng)獲得兔角膜緣干細(xì)胞,這大大減少了血清中不明成分對(duì)干細(xì)胞的影響,為角膜緣干細(xì)胞的體外培養(yǎng)、擴(kuò)增及純化提供了新的選擇。
[Abstract]:Objective: to culture limbal stem cells of New Zealand Rabbit (New Zealand Rabbit) without adding serum (27 instead of serum) and observe the biological characteristics of cultured stem cells. The method of serum-free culture of rabbit limbal stem cells (limbal stem cells) in vitro was discussed, and the experimental data were accumulated for the construction of tissue engineered cornea and the basic research of cornea. Methods: (1) rabbit limbal tissue was obtained under aseptic condition, and single cell suspension was prepared by enzyme digestion method (Dispase 鈪，

本文編號(hào)：2050181