本文選題：IL-33 + 視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞　； 參考：《中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院》2012年博士論文

【摘要】：目的： 1.本課題以IL-33作為主要研究對(duì)象，研究其在β-淀粉樣蛋白（Aβ）刺激人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中的表達(dá)特性。 2.初步探明IL-33在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中的作用及機(jī)制。 方法： 1. IL-33在β-淀粉樣蛋白刺激人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中的表達(dá)特性研究 采用MTT法檢測(cè)不同濃度Aβ1-40刺激D407細(xì)胞后不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞存活率，觀察其對(duì)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞損傷的影響。提取不同濃度Aβ1-40刺激D407細(xì)胞24h后細(xì)胞RNA，采用定量PCR檢測(cè)IL-33mRNA水平；收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，ELISA檢測(cè)IL-33蛋白表達(dá)；加入NF-κB，ERK1/2，JNK，p38MAPK信號(hào)通路抑制劑后，采用定量PCR及ELISA檢測(cè)0.3μMAβ1-40刺激D407細(xì)胞24h后IL-33mRNA及蛋白水平表達(dá)，鑒定β-淀粉樣蛋白刺激視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞后調(diào)控產(chǎn)生IL-33的信號(hào)通路。 2. IL-33在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中的作用及機(jī)制研究 采用定量PCR檢測(cè)不同濃度的IL-33刺激D407細(xì)胞16h后其受體ST2LmRNA表達(dá)情況，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)100ng/ml IL-33刺激D407細(xì)胞16h后細(xì)胞表面受體ST2L表達(dá)；不同濃度的IL-33刺激D407細(xì)胞16h后，收集細(xì)胞及培養(yǎng)上清，定量PCR和ELISA檢測(cè)炎癥因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α mRNA和蛋白表達(dá)，探討IL-33因子對(duì)D407細(xì)胞的作用機(jī)制；加入NF-κB，ERK1/2，JNK，p38MAPK信號(hào)通路抑制劑后，采用定量PCR及ELISA檢測(cè)100ng/ml IL-33刺激D407細(xì)胞16h后上述炎癥因子的表達(dá)，鑒定調(diào)控產(chǎn)生炎癥因子的信號(hào)通路。 結(jié)果： 1. IL-33在β-淀粉樣蛋白刺激人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中的表達(dá)特性研究 1.10.3μM Aβ1-40刺激組較正常組細(xì)胞形態(tài)變圓，胞體腫脹，細(xì)胞排列數(shù)量減少，細(xì)胞間間隙增加，且隨Aβ1-40刺激濃度增加變化明顯，而小于0.3μM Aβ1-40刺激組細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯變化。MTT檢測(cè)結(jié)果表明：隨著Aβ1-40刺激濃度的增加，細(xì)胞存活率逐漸下降，除了0.001μMAβ1-40刺激組外，其余各刺激組與正常對(duì)照組相比細(xì)胞存活率均顯著降低(P 0.05)。隨著0.3μM和1μM Aβ1-40刺激D407細(xì)胞時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞存活率也逐漸下降，且與對(duì)照組相比均有顯著性差異(P 0.05)。 1.2不同濃度Aβ1-40刺激D407細(xì)胞后，IL-33mRNA及蛋白表達(dá)水平均增加，且在0.3μM刺激濃度時(shí)表達(dá)顯著增加(P 0.05)。結(jié)果提示：Aβ1-40刺激D407細(xì)胞后能夠引起IL-33表達(dá)上調(diào)。 1.3加入ERK1/2和p38MAPK信號(hào)通路抑制劑，0.3μM Aβ1-40刺激D407細(xì)胞24h后，IL-33mRNA表達(dá)水平顯著降低(P 0.05)，但只有加入ERK1/2信號(hào)通路抑制劑后，細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-33蛋白水平才有明顯下降(P 0.05)。結(jié)果提示：Aβ1-40刺激D407細(xì)胞后，IL-33的產(chǎn)生主要是通過(guò)ERK1/2信號(hào)通路調(diào)控，而p38MAPK信號(hào)通路僅參與了IL-33轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。 2. IL-33在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中的作用及機(jī)制研究 2.1IL-33因子刺激D407細(xì)胞后，ST2L mRNA表達(dá)顯著增加(P 0.05)，并隨著IL-33刺激濃度的增加而增加，且在100ng/ml IL-33刺激時(shí)表達(dá)量最高。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)D407細(xì)胞表面受體表達(dá)結(jié)果顯示：D407細(xì)胞表面ST2L表達(dá)陽(yáng)性，且在100ng/ml IL-33因子刺激細(xì)胞16h后表達(dá)上調(diào)。 2.2采用定量PCR及ELISA檢測(cè)IL-33因子刺激D407細(xì)胞后炎癥因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α mRNA及蛋白水平表達(dá)。結(jié)果顯示：20，50，100ng/ml IL-33刺激D407細(xì)胞16h后，炎癥因子mRNA及蛋白水平表達(dá)均顯著增加(P 0.05)，且隨著IL-33因子刺激濃度的增加，炎癥因子表達(dá)均逐漸增加，并在100ng/mlIL-33刺激時(shí)表達(dá)量最高。結(jié)果提示：IL-33刺激D407細(xì)胞后IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α因子表達(dá)上調(diào)。 2.3加入NF-κB，ERK1/2，JNK，，p38MAPK信號(hào)通路抑制劑，100ng/ml IL-33刺激D407細(xì)胞16h后，定量PCR和ELISA檢測(cè)炎癥因子mRNA及蛋白水平表達(dá)，結(jié)果顯示：加入p38MAPK信號(hào)通路抑制劑后，IL-6表達(dá)顯著下降；加入ERK1/2信號(hào)通路抑制劑后，IL-8表達(dá)顯著下降；加入NF-κB信號(hào)通路抑制劑后，IL-1β表達(dá)顯著下降；而加入JNK信號(hào)通路抑制劑后，TNF-α表達(dá)顯著下降(P 0.05)。結(jié)果表明：IL-33因子刺激D407細(xì)胞后炎癥因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α的產(chǎn)生是分別通過(guò)p38MAPK，ERK1/2，NF-κB以及JNK信號(hào)通路調(diào)控。 結(jié)論： 1.隨著Aβ1-40刺激濃度的增加和時(shí)間的延長(zhǎng)，人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞存活率逐漸下降。 2. β-淀粉樣蛋白1-40刺激人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞后能夠誘導(dǎo)IL-33因子轉(zhuǎn)錄及蛋白水平表達(dá)上調(diào)，且IL-33的產(chǎn)生主要是通過(guò)ERK1/2信號(hào)通路調(diào)控，而p38MAPK信號(hào)通路僅參與了IL-33轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。 3.人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞表面表達(dá)ST2L受體且隨著IL-33因子刺激濃度的增加ST2L表達(dá)量增加。 4. IL-33刺激人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞后能夠上調(diào)炎癥因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α的表達(dá)。 5.在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中，IL-33因子分別通過(guò)p38MAPK，ERK1/2，NF-κB，JNK信號(hào)通路調(diào)控炎癥因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α的表達(dá)。
[Abstract]:Objective:
1. in this study, IL-33 was used as the main research object to study its expression characteristics in human retinal pigment epithelial cells stimulated by beta amyloid (A beta).
2. preliminarily ascertain the role and mechanism of IL-33 in human retinal pigment epithelial cells.
Method錛

本文編號(hào)：1862693