本文選題：集落細胞刺激因子 + 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞��； 參考：《吉林大學》2012年博士論文

【摘要】：本文通過試驗研究了粒細胞集落刺激因子（G-CSF）對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞（retinalganglion cells, RGCs）體外存活的影響，以及對損傷后RGCs的保護作用，并探討其可能的作用機制。 實驗中我們首先體外培養(yǎng)了RGC-5細胞系，，觀察其形態(tài)及性狀，應用MTT法、流式細胞術、Western Blot方法檢測rhG-CSF干預后RGC-5活性和增殖的變化及其機制。結果表明G-CSF能夠增強體外培養(yǎng)RGC-5的活性、促進RGC-5的增殖、誘導RGC-5中STAT3的磷酸化，并且G-CSF-R參與STAT3的活化過程。提示G-CSF可以通過G-CSFR途徑誘導RGC-5中STAT3的活化來達到促進其活性和增殖的目的。 為了更加明確的說明G-CSF對視神經(jīng)的保護作用，本實驗選用了特異性的Thy1.1單克隆抗體聯(lián)合無血清的神經(jīng)基質培養(yǎng)基（NEUROBASALTMMedium）純化培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞，得到細胞純度可高達95%。隨后我們應用無血清的神經(jīng)基質培養(yǎng)基與含血清的DMEM同時培養(yǎng)RGCs，進行對比觀察RGCs形態(tài)學變化，應用MTT法、流式細胞術檢測兩組細胞的存活率及凋亡率，結果顯示無血清的神經(jīng)基質培養(yǎng)基可明顯提高RGCs體外存活率及存活時間，降低RGCs體外凋亡率。這提示我們Thy-1.1單克隆抗體與NEUROBASALTMMedium聯(lián)合應用于RGCs的體外純化與培養(yǎng)，可明顯維持體外RGCs的活性并延長其在體外的存活時間。 因此利用以上方法體外培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞，在Cocl2誘導的缺氧情況下加入rhG-CSF，應用rt-PCR及Wetern Blot方法檢測RGCs上GAP-43、MAP-2、RhoA、Rock、Bcl-2、Caspase3和Bax蛋白及mRNA表達量的變化，同時應用流式細胞術檢測RGCs的凋亡率，結果顯示G-CSF可能通過下調(diào)RhoA、Rock表達來增加GAP-43、MAP-2蛋白及mRNA的表達量，從而促進細胞突起的生長與修復，通過上調(diào)Bcl-2的表達，下調(diào)Caspase3和Bax的表達來明顯減低RGCs的凋亡率。說明G-CSF通過抗凋亡途徑及增加細胞生長發(fā)育相關蛋白表達量來保護損傷后的RGCs。 本文的創(chuàng)新點如下： 1證明了G-CSF可以通過G-CSFR途徑誘導RGC-5中STAT3的活化來達到促進RGC-5活性和增殖的目的。 2G-CSF可能通過下調(diào)RhoA、Rock表達量及增加GAP-43、MAP-2的表達量來促進RGCs突起的再生與修復。
[Abstract]:The effects of granulocyte colony stimulating factor ( G - CSF ) on the in vitro survival of retinal ganglion cells ( RGCs ) and the protective effects of granulocyte colony stimulating factor ( G - CSF ) on retinal ganglion cells ( RGCs ) were studied .

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本文編號：1861334