本文選題：大鼠胚胎干細(xì)胞 + 視網(wǎng)膜變性疾病�。� 參考：《上海交通大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：背景介紹視網(wǎng)膜變性疾病如年齡相關(guān)性黃斑變性(Age-related macular degeneration,AMD)是主要的致盲性眼病,目前臨床上尚缺乏有效的治療措施。細(xì)胞移植治療為這類疾病的患者帶來了希望。胚胎干細(xì)胞(Embryonic stem cell,ESC)是細(xì)胞治療重要的供體細(xì)胞來源。在本研究中,我們用大鼠ESC(rESC)分化得到了視網(wǎng)膜祖細(xì)胞(Retina progenitor cell,RPC),并通過移植檢測了其對患有視網(wǎng)膜變性疾病大鼠的治療作用。方法本課題首先通過無血清懸浮快速沉降形成類胚體(quickly aggregated serum free embryonic body,SFEBq)的方法將rESC誘導(dǎo)分化為能夠向視網(wǎng)膜方向分化的神經(jīng)上皮結(jié)構(gòu)(第8天)。并通過RT-PCR、冰凍切片、全組織染色,報告基因檢測等方法對其進行了檢測和鑒定。分化第8天,開始從神經(jīng)上皮向視網(wǎng)膜方向的誘導(dǎo)分化。我們采用了兩種方法。方法一:分化第8天,在含有血清培養(yǎng)的條件下繼續(xù)懸浮培養(yǎng)到第10天。然后,消化類胚體為單細(xì)胞后進行貼壁培養(yǎng),到第16天收樣檢測,記為rESC-RPC1;方法二:分化第8天,類胚體在含有血清的條件下培養(yǎng)到第14天,然后消化成單細(xì)胞進行貼壁培養(yǎng),第16天收樣檢測,記為rESC-RPC2。我們對兩種分化方案獲得的細(xì)胞進行了RTq PCR、免疫熒光染色、流式細(xì)胞檢測以及全基因組表達譜檢測鑒定。最后,我們將rESC分化得到的RPC移植到出生后21天的RCS大鼠視網(wǎng)膜下腔,并在移植后2周、4周和6周通過視網(wǎng)膜電生理(Electroretinogram,ERG)檢測了視功能。并通過冰凍切片免疫熒光染色檢測了供體細(xì)胞在視網(wǎng)膜中的分化和整合情況以及供體細(xì)胞對視網(wǎng)膜外核層厚度的恢復(fù)作用。結(jié)果在本研究中,我們將rESC體外分化得到了兩種rESC-RPC細(xì)胞,它們都能表達神經(jīng)祖細(xì)胞和視網(wǎng)膜細(xì)胞的標(biāo)志物,是神經(jīng)祖細(xì)胞和視網(wǎng)膜各種細(xì)胞的混合群體。rESC-RPC1中膠質(zhì)細(xì)胞含量較高,而rESC-RPC2中神經(jīng)元較多。通過移植發(fā)現(xiàn)它們都能在移植后早期保護RCS大鼠視網(wǎng)膜功能。rESC-RPC2對RCS視網(wǎng)膜功能的改善更為明顯,并能夠遷移整合到視網(wǎng)膜中,保護視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)。結(jié)論我們建立了兩種rESC向視網(wǎng)膜方向分化的方法。通過分化得到的含有神經(jīng)元較多的rESC-RPC2能夠保護遺傳性視網(wǎng)膜變性大鼠模型的視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)和功能,具有一定的治療作用。這些工作為推動rESC的研究和應(yīng)用做出了一定的貢獻,并為臨床上用ESC分化來源的細(xì)胞治療人類視網(wǎng)膜疾病和其他神經(jīng)退行性疾病提供了依據(jù)。
[Abstract]:In this study , we observed the differentiation and integration of retinal progenitor cells ( RESC ) from neural epithelial cells to the retina . Methods One of these methods was : RTq PCR , immunofluorescence staining , flow cytometry and whole genome expression profiling . Conclusion We have established two methods for the differentiation of the two rESC into the retina . The rESC - RPC2 , which contains many neurons , can protect the retina structure and function of the rat model of hereditary retinal degeneration , and has certain therapeutic effect . These work have contributed to the research and application of the rESC , and provide the basis for the clinical use of ESC differentiated cells for the treatment of human retinal diseases and other neurodegenerative diseases .

【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R774.1;R-332

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本文編號：1860972