本文選題：大鼠胚胎干細胞 + 視網膜變性疾病��； 參考：《上海交通大學》2015年博士論文

【摘要】：背景介紹視網膜變性疾病如年齡相關性黃斑變性(Age-related macular degeneration,AMD)是主要的致盲性眼病,目前臨床上尚缺乏有效的治療措施。細胞移植治療為這類疾病的患者帶來了希望。胚胎干細胞(Embryonic stem cell,ESC)是細胞治療重要的供體細胞來源。在本研究中,我們用大鼠ESC(rESC)分化得到了視網膜祖細胞(Retina progenitor cell,RPC),并通過移植檢測了其對患有視網膜變性疾病大鼠的治療作用。方法本課題首先通過無血清懸浮快速沉降形成類胚體(quickly aggregated serum free embryonic body,SFEBq)的方法將rESC誘導分化為能夠向視網膜方向分化的神經上皮結構(第8天)。并通過RT-PCR、冰凍切片、全組織染色,報告基因檢測等方法對其進行了檢測和鑒定。分化第8天,開始從神經上皮向視網膜方向的誘導分化。我們采用了兩種方法。方法一:分化第8天,在含有血清培養(yǎng)的條件下繼續(xù)懸浮培養(yǎng)到第10天。然后,消化類胚體為單細胞后進行貼壁培養(yǎng),到第16天收樣檢測,記為rESC-RPC1;方法二:分化第8天,類胚體在含有血清的條件下培養(yǎng)到第14天,然后消化成單細胞進行貼壁培養(yǎng),第16天收樣檢測,記為rESC-RPC2。我們對兩種分化方案獲得的細胞進行了RTq PCR、免疫熒光染色、流式細胞檢測以及全基因組表達譜檢測鑒定。最后,我們將rESC分化得到的RPC移植到出生后21天的RCS大鼠視網膜下腔,并在移植后2周、4周和6周通過視網膜電生理(Electroretinogram,ERG)檢測了視功能。并通過冰凍切片免疫熒光染色檢測了供體細胞在視網膜中的分化和整合情況以及供體細胞對視網膜外核層厚度的恢復作用。結果在本研究中,我們將rESC體外分化得到了兩種rESC-RPC細胞,它們都能表達神經祖細胞和視網膜細胞的標志物,是神經祖細胞和視網膜各種細胞的混合群體。rESC-RPC1中膠質細胞含量較高,而rESC-RPC2中神經元較多。通過移植發(fā)現(xiàn)它們都能在移植后早期保護RCS大鼠視網膜功能。rESC-RPC2對RCS視網膜功能的改善更為明顯,并能夠遷移整合到視網膜中,保護視網膜結構。結論我們建立了兩種rESC向視網膜方向分化的方法。通過分化得到的含有神經元較多的rESC-RPC2能夠保護遺傳性視網膜變性大鼠模型的視網膜結構和功能,具有一定的治療作用。這些工作為推動rESC的研究和應用做出了一定的貢獻,并為臨床上用ESC分化來源的細胞治療人類視網膜疾病和其他神經退行性疾病提供了依據。
[Abstract]:In this study , we observed the differentiation and integration of retinal progenitor cells ( RESC ) from neural epithelial cells to the retina . Methods One of these methods was : RTq PCR , immunofluorescence staining , flow cytometry and whole genome expression profiling . Conclusion We have established two methods for the differentiation of the two rESC into the retina . The rESC - RPC2 , which contains many neurons , can protect the retina structure and function of the rat model of hereditary retinal degeneration , and has certain therapeutic effect . These work have contributed to the research and application of the rESC , and provide the basis for the clinical use of ESC differentiated cells for the treatment of human retinal diseases and other neurodegenerative diseases .

【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R774.1;R-332

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