本文選題：鼻咽癌 + 免疫組化��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：研究背景與目的 鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma, NPC)是我國(guó)常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤之一,好發(fā)于東南亞地區(qū)及我國(guó)南方各省市,在中國(guó)南方以及國(guó)外的中國(guó)南方移民和后裔中發(fā)病率明顯高于歐美等其他地區(qū)25至30倍。目前認(rèn)為鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段、多步驟的復(fù)雜過(guò)程,與EB病毒感染、遺傳易感性、飲食習(xí)慣、環(huán)境污染等有關(guān)。鼻咽癌多發(fā)生于鼻咽部的咽隱窩和頂后壁,解剖位置比較隱蔽,臨床表現(xiàn)復(fù)雜且不典型,容易漏診、誤診。因此,約70%的鼻咽癌患者初診時(shí)已是局部區(qū)域晚期。 由于鼻咽癌分化程度低,周?chē)馨徒M織豐富,容易發(fā)生顱內(nèi)外和頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。放射治療是鼻咽癌的首選治療手段,但在單純放療后局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率很高,放療后的五年生存率仍徘徊在50%左右。因此,為了提高鼻咽癌患者的診療水平,迫切需要尋找鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后相關(guān)的分子標(biāo)志物及新的靶點(diǎn)。 瞬時(shí)受時(shí)電位(transient receptor potential, TRP)是位于細(xì)胞膜上的一類(lèi)非電壓依賴(lài)性的陽(yáng)離子通道。在1969年Cosens和Manning在研究果蠅光感受器TRP突變體時(shí)發(fā)現(xiàn)：突變體果蠅對(duì)持續(xù)的光刺激不產(chǎn)生持續(xù)的峰電位,而是產(chǎn)生瞬時(shí)的去極化電位。與其他陽(yáng)離子通道結(jié)構(gòu)相似,TRP通道也具有6個(gè)跨膜拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)(S1～S6),其N(xiāo)末端和C末端位于細(xì)胞內(nèi),且在第5個(gè)和第6個(gè)跨膜域間有一個(gè)離子通道孔區(qū)域。根據(jù)TRP通道的氨基酸序列和結(jié)構(gòu)同源性,可將哺乳動(dòng)物的TRP超家族分為六個(gè)亞家族：TRPC(Canonical)、TRPM(Melastatin)、 TRPV(Vanilloid)、TRPA(Ankyrin transmembrane protein)、TRPP(Polycystin)、 TRPML(Mucolipin)。 TRPC1是第一個(gè)被克隆的哺乳動(dòng)物TRP通道,與果蠅TRP有34%左右的同源性,全長(zhǎng)的人TRPC1蛋白分子量約91kDa,編碼該蛋白的基因位于人3號(hào)染色體的q22-q24區(qū),位于小鼠的9號(hào)染色體上。TRPC1蛋白的氨基酸序列在人類(lèi)、大鼠、小鼠、兔和牛中具有高度保守性。TRPC1蛋白廣泛分布于平滑肌、腦、心臟、睪丸、附睪、卵巢、唾液腺、肝和腎上腺等組織中,主要參與細(xì)胞膜受體激活磷脂酶C后所介導(dǎo)的鈣離子進(jìn)入,被認(rèn)為是鈣庫(kù)操縱性鈣離子通道(SOC)的核心成分,通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài),在細(xì)胞增殖、分化、凋亡等起重要作用。 細(xì)胞內(nèi)Ca2+的變化是影響細(xì)胞生理功能的重要因素,也是多種受體激活后信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中的關(guān)鍵,而細(xì)胞內(nèi)Ca2+變化則依賴(lài)于Ca2+跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放和再攝取Ca2+等過(guò)程維持動(dòng)態(tài)平衡。Ca2+穩(wěn)態(tài)在細(xì)胞增殖和凋亡、細(xì)胞分化、細(xì)胞遷移、基因轉(zhuǎn)錄、血管生成、平滑肌收縮、唾液腺及神經(jīng)遞質(zhì)的分泌等生理功能中起重要作用。瞬時(shí)受體電位(TRP)通道可以作為細(xì)胞膜Ca2+通道調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度,也可以通過(guò)改變細(xì)胞膜極性,調(diào)節(jié)Ca2+驅(qū)動(dòng)力來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度。而且,TRP通道還可在細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)的膜上表達(dá),觸發(fā)細(xì)胞的增殖和異常分化,并抑制凋亡,從而導(dǎo)致腫瘤不可控制的擴(kuò)散和侵犯。TRPC1蛋白作為T(mén)RP蛋白一員,參與調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度。當(dāng)TRPC1基因沉默或者TRPC1蛋白低表達(dá),鈣離子內(nèi)流減少,細(xì)胞內(nèi)自由Ca2+濃度降低,反之,TRPC1蛋白過(guò)表達(dá),鈣離子內(nèi)流增加,細(xì)胞內(nèi)自由Ca2+濃度升高,鈣離子穩(wěn)態(tài)破壞,進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的異常分化和增殖。 已有研究發(fā)現(xiàn)TRPC1在哮喘和慢性阻塞性肺病中有重要作用,在增殖的氣道平滑肌細(xì)胞中TRPC1表達(dá)增加,已經(jīng)被預(yù)期成為預(yù)防周?chē)鷼獾览w維化的潛在的靶標(biāo)。TRPC1蛋白在大鼠缺血性大腦損傷中表達(dá)升高。Yassine El Hiani等發(fā)現(xiàn)：乳腺癌細(xì)胞株MCF-7表達(dá)TRPC1蛋白,高細(xì)胞外鈣離子[Ca2+]o刺激,促進(jìn)TRPC1蛋白過(guò)表達(dá),促進(jìn)Ca2+內(nèi)流,ERK1/2磷酸化,激活了依賴(lài)鈣離子感受器(CaR)的在細(xì)胞增殖途經(jīng),從而導(dǎo)致細(xì)胞的異常增殖,MCF-7細(xì)胞經(jīng)2-APB、SKF-96365和siRNA技術(shù)處理后,TRPC1表達(dá)下調(diào)或者功能抑制,CaR產(chǎn)生的細(xì)胞Ca2+內(nèi)流被抑制,細(xì)胞增殖被抑制。這個(gè)研究結(jié)果表明Ca2+內(nèi)流需要TRPC1, TRPC1在維持[Ca2+]i和細(xì)胞增殖過(guò)程中起重要作用。Benjamin Beck等認(rèn)為T(mén)RPC1和TRPC4蛋白在角化細(xì)胞的Ca2+的平衡和細(xì)胞分化中起重要作用,基底癌細(xì)胞可能缺乏這兩種蛋白而導(dǎo)致分化障礙。TRPC1蛋白及rnRNA在人前列腺癌LNCaP細(xì)胞表達(dá),參與調(diào)節(jié)Ca2+內(nèi)流。Vanden Abeele等發(fā)現(xiàn)TRPC1、TRPV6可能構(gòu)成前列腺癌細(xì)胞的SOCs,當(dāng)前列腺癌細(xì)胞向雄激素抵抗表型轉(zhuǎn)化時(shí),這兩個(gè)蛋白表達(dá)降低。Valerie C. Bomben等研究發(fā)現(xiàn)TRPC1在人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移中起重要作用。TRPC1蛋白的破壞,導(dǎo)致神經(jīng)瘤細(xì)胞不全分裂,細(xì)胞增殖減慢。 因甘前尚無(wú)TRPC1蛋白在腫瘤組織中的表達(dá)的研究,本研究擬利用組織芯片技術(shù)及免疫組化技術(shù)檢測(cè)TRPC1蛋白在人體常見(jiàn)腫瘤組織及其癌旁組織中的表達(dá)；檢測(cè)鼻咽癌組織和鼻咽慢性炎癥組織中TRPC1蛋白的表達(dá),分析其與鼻咽癌患者臨床特征的關(guān)系,同時(shí),結(jié)合臨床隨訪(fǎng)資料回顧性的分析TRPC1蛋白表達(dá)與鼻咽癌患者總生存期(OS)的關(guān)系,為鼻咽癌診斷、預(yù)后預(yù)測(cè)和腫瘤治療提供初步的理論基礎(chǔ)。 研究方法 1.TRPC1蛋白在人體常見(jiàn)惡性腫瘤組織及癌旁組織中的分布及表達(dá) 應(yīng)用組織芯片技術(shù)及免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)ITRPC1蛋白在人體常見(jiàn)腫瘤組織及癌旁正常組織中的分布及表達(dá)。 2.TRPC1蛋白在鼻咽癌和慢性炎癥組織中的表達(dá)及臨床意義 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)TRPC1蛋白在24例鼻咽慢性炎癥和138例鼻咽癌組織中的表達(dá)情況；分析TRPC1蛋白表達(dá)水平與鼻咽癌各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系；分析TRPC1蛋白表達(dá)及各臨床病理參數(shù)與鼻咽癌總生存期的關(guān)系；建立COX回歸模型,對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)與生存期的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法： 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用χ2檢驗(yàn)比較鼻咽癌組織及鼻咽慢性炎癥組織中TRPC1蛋白的表達(dá)率；采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)對(duì)鼻咽癌組織及鼻咽慢性炎癥組織間TRPC1蛋白的表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,采用χ2檢驗(yàn)對(duì)TRPC1蛋白表達(dá)與鼻咽癌患者的性別、年齡、病理類(lèi)型、血清EBV-IgG狀態(tài)、有無(wú)顱底侵犯、T分期、N分期及TNM分期等臨床病理參數(shù)的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,采用Kaplan-Meier法對(duì)TRPC1蛋白表達(dá)及各臨床病理參數(shù)與鼻咽癌患者的OS關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；建立COx回歸模型,對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)與總生存時(shí)間的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。以雙側(cè)P0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 研究結(jié)果 1.TRPC1蛋白在人體常見(jiàn)腫瘤組織及癌旁正常組織中的分布和表達(dá)情況 TRPC1蛋白廣泛表達(dá)于乳腺、食管、胃腸、肝、肺臟、咽、喉、胰腺等癌旁正常組織中,并在相應(yīng)的腫瘤組織中也有表達(dá)。其中,TRPC1蛋白在乳腺非浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、食管鱗癌、直腸腺癌、肝細(xì)胞肝癌、腎透明細(xì)胞癌、卵巢漿液性囊腺癌、咽鱗癌、喉鱗癌、鼻咽癌等腫瘤組織中高表達(dá),在結(jié)腸腺癌、肺鱗癌、胃癌、前列腺癌組織中中度表達(dá),在宮頸癌和胰腺癌中低表達(dá)。 2.TRPC1蛋白在鼻咽癌及鼻咽組織慢性炎癥中的表達(dá) TRPC1蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞的胞漿。在138例鼻咽癌組織中,TRPC1蛋白表達(dá)總的陽(yáng)性表達(dá)率為84.1%(116/138)。在116例陽(yáng)性表達(dá)癌組織中,(+)44例,(++)44例,(+++)28例,高表達(dá)率為52.2%。而在24例鼻咽慢性炎癥組織中,6例無(wú)TRPC1蛋白表達(dá),TRPC1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為75.0%(18/24),其中(+)13例,(++)3例,(+++)2例,高表達(dá)率為20.8%。鼻咽癌組織TRPC1蛋白的高表達(dá)率(52.2%)顯著高于鼻咽慢性炎癥組織(20.8%)(P0.05)。鼻咽癌組織TRPC1蛋白的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于鼻咽慢性炎癥組織。 3.TRPC1蛋白在鼻咽癌組織中的臨床意義 TRPC1蛋白表達(dá)與鼻咽癌患者的性別、年齡、組織病理學(xué)類(lèi)型、血清EBV-IgG狀態(tài)無(wú)關(guān)(P值分別為：0.155,0.423,0.647,0.811),與患者有無(wú)顱底侵犯、T分期、N分期、TNM分期有關(guān)(P值分別為：0.001,0.004,0.049,0.013)隨訪(fǎng)發(fā)現(xiàn)TRPC1蛋白高表達(dá)的鼻咽癌患者中位生存時(shí)間為50.0個(gè)月,而TRPC1蛋白低表達(dá)者中位生存時(shí)間為86.0月。TRPC1蛋白高表達(dá)的鼻咽癌患者中位生存期顯著低于TRPC1蛋白低表達(dá)者(P=0.000)。將TRPC1蛋白表達(dá)及鼻咽癌患者各臨床病理參數(shù)與鼻咽癌患者總生存期的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,結(jié)果顯示性別、年齡、血清EBV-IgG狀態(tài)、組織病理學(xué)分型不影響鼻咽癌患者的總生存時(shí)間(P值分別為：0.417,0.401,0.785,0.837),而TRPC1蛋白表達(dá)、顱底侵犯、T分期、N分期和TNM分期是影響鼻咽癌患者生存的因素(P值均0.05)。COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析發(fā)現(xiàn)TRPC1蛋白表達(dá)、N分期、顱底侵犯是影響鼻咽癌患者總生存時(shí)間的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P值均小于0.05) 結(jié)論 1.TRPC1蛋白人體常見(jiàn)腫瘤及癌旁正常組織中廣泛表達(dá),并在多種類(lèi)型腫瘤組織中表達(dá)上調(diào),提示TRPC1腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有特殊的意義,值得進(jìn)一步探討; 2.TRPC1蛋白在鼻咽癌組織中高表達(dá),而在鼻咽慢性炎癥組織中低表達(dá),提示TRPC1有可能作為對(duì)鼻咽癌診斷及鑒別診斷有參考價(jià)值的生物標(biāo)志物； 3.TRPC1蛋白在與顱底侵犯、T分期、N分期、TNM分期相關(guān),TRPC1氏表達(dá)的鼻咽癌患者中位生存時(shí)間明顯長(zhǎng)于TRPC1蛋白高表達(dá)者,提示TRPC1蛋白是鼻咽癌不良預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物,為鼻咽癌的治療提供潛在靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1738805