本文選題：CRISPR-Cas　切入點(diǎn)：黑色素瘤細(xì)胞　出處：《中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志》2017年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的利用CRISPR/Cas9系統(tǒng),敲除小鼠黑色素瘤細(xì)胞系的MATP基因,為MATP基因的功能研究奠定基礎(chǔ)。方法利用http://crispr.mit.edu/網(wǎng)站,設(shè)計(jì)針對(duì)MATP的特異性引物,并將引物鏈接到pCAS9/gRNA1載體。將陽(yáng)性載體轉(zhuǎn)染小鼠黑色素瘤細(xì)胞系B16F10,利用無(wú)限稀釋的方法獲得轉(zhuǎn)染后的單克隆細(xì)胞株。提取不同細(xì)胞株的基因組,通過(guò)測(cè)序的方法進(jìn)一步篩選出發(fā)生MATP基因切割的細(xì)胞株,并利用Western-blot的方法驗(yàn)證MATP的表達(dá)情況。結(jié)果成功獲得了3株MATP基因敲除的細(xì)胞株,Western-blot結(jié)果表明,該細(xì)胞株不表達(dá)MATP蛋白。結(jié)論利用pCAS9/gRNA1載體,可以實(shí)現(xiàn)B16F10細(xì)胞系MATP基因的敲除。
[Abstract]:Objective to knockout the MATP gene of murine melanoma cell line by CRISPR/Cas9 system, and to lay a foundation for the study of the function of MATP gene. Methods using http://crispr.mit.edu/ website, specific primers for MATP were designed. The primer was linked to the pCAS9/gRNA1 vector. The positive vector was transfected into mouse melanoma cell line B16F10. The transfected monoclonal cell line was obtained by infinite dilution method. The genome of different cell lines was extracted. The MATP gene cleavage cell lines were further screened by sequencing, and the expression of MATP was verified by Western-blot. Results three MATP gene knockout cell lines were successfully obtained by Western-blot. Conclusion the MATP gene knockout of B16F10 cell line can be realized by using pCAS9/gRNA1 vector.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金31272387 全軍實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專項(xiàng)課題SYDW[2014]006
【分類號(hào)】：R77

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蔣鐵男,司靜懿,趙維敏,李昆,鮑家駒,張衛(wèi),盛齊,韓銳,徐承熊,戰(zhàn)洪生;揚(yáng)州光卟啉作用于小鼠黑色素瘤細(xì)胞療效原理的超微結(jié)構(gòu)研究[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);1984年06期

2 于智勇;沈維干;薛慶於;武輝;;AdH1-siRNA-Survivin抗小鼠黑色素瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2008年18期

3 李恒,劉廣超,石淵淵;小鼠黑色素瘤凝集的分離純化[J];開(kāi)封醫(yī)專學(xué)報(bào);1999年03期

4 段昕;張紅;邱嶸;高清祥;閔鳳玲;郝冀芳;劉兵;周清明;李小達(dá);王燕玲;周光明;;重離子輻射提高腺病毒介導(dǎo)小鼠黑色素瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染率的研究[J];原子核物理評(píng)論;2007年01期

5 馬顯光;蔣洪;孫麗麗;鄧渝;劉俊康;熊繼堯;;中藥和激光對(duì)小鼠黑色素瘤的影響[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2011年02期

6 李衛(wèi)泊;尹昱;張峻嶺;謝紹建;周保軍;宋偉慶;蔡建輝;;低劑量循環(huán)應(yīng)用環(huán)磷酰胺聯(lián)合樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗對(duì)小鼠黑色素瘤的治療效果[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2012年06期

7 劉廣超;小鼠黑色素瘤凝集素的制備和特性分析[J];河南醫(yī)學(xué)研究;1999年04期

8 趙萬(wàn)洲,劉紅巖,徐少鋒,Frank Entschladen,Bernd Niggemann,KurtS.Zaenker,韓銳;小鼠黑色素瘤某些生物學(xué)特性與其侵襲潛能的相關(guān)性研究[J];中華腫瘤雜志;2001年04期

9 房東亮;馬躍美;趙秀蘭;孫濤;劉艷榮;王倩;田原;;慢性炎癥對(duì)小鼠黑色素瘤血管生成的影響[J];天津醫(yī)藥;2013年03期

10 成秉辰;;千里光總堿對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖的影響[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2009年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 趙萬(wàn)洲;劉紅巖;徐少峰;Frank Entschladen;Bernd Niggemann;Kurt S．Zanker;韓銳;;小鼠黑色素瘤生物學(xué)特性與其侵襲潛能的相關(guān)性研究[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

2 黃亞渝;馬加海;董海龍;葉菁;陳廣生;張秀敏;隋延仿;;增強(qiáng)型綠色熒光蛋白與MAGE-n共表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2005年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

3 杜麗娜;付杰;劉洋樸;鄒云彭;金義光;;姜黃素及其包和物原位凝膠對(duì)小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16的抑制作用[A];第十一屆全國(guó)青年藥學(xué)工作者最新科研成果交流會(huì)論文集[C];2012年

4 方麗娟;錢(qián)關(guān)祥;;基因修飾小鼠黑色素瘤細(xì)胞誘導(dǎo)抗腫瘤免疫效應(yīng)的研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2006年

5 王青青;余海;鞠佃文;潘建平;何龍;夏大靜;張立煌;曹雪濤;;腺病毒介導(dǎo)的Lymphotactin基因療法對(duì)單抗導(dǎo)向的超抗原治療小鼠黑色素瘤的增強(qiáng)效應(yīng)[A];第七屆全國(guó)腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2001年

6 劉月彩;單保恩;張超;王欣榮;;促紅細(xì)胞生成素通過(guò)調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白表達(dá)影響小鼠黑色素瘤細(xì)胞株B16的生長(zhǎng)[A];河北省免疫學(xué)會(huì)第六次免疫學(xué)大會(huì)資料匯編[C];2010年

7 胡巍;張超;方蕓;;霧化吸入羥基喜樹(shù)堿對(duì)小鼠黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移的藥效學(xué)及體外作用機(jī)制研究[A];2010施慧達(dá)杯第十屆全國(guó)青年藥學(xué)工作者最新科研成果交流會(huì)論文集[C];2010年

8 黃丹;丁巖;陳曉光;;3—7—1的抗腫瘤作用及其作用機(jī)制研究[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第八次全國(guó)代表大會(huì)暨全國(guó)藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2002年

9 孫寶勝;劉士新;趙玲;;Taurolidine聯(lián)合X射線通過(guò)誘導(dǎo)小鼠黑色素瘤細(xì)胞G2/M期阻滯去除提高輻射敏感性[A];2007第六屆全國(guó)放射腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

10 紀(jì)超;康健;陳文琦;楊波;萬(wàn)寅生;畢志剛;;核黃素削弱EGF誘導(dǎo)的小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞株AQP3上調(diào)以及細(xì)胞遷移增加[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 劉燕玲;吲哚胺2，3-雙加氧酶2對(duì)小鼠黑色素瘤生長(zhǎng)的影響及其在腫瘤治療中的應(yīng)用研究[D];南昌大學(xué);2016年

2 楊明;CpG ODN-MF59輔佐腫瘤抗原誘導(dǎo)抗小鼠黑色素瘤及肺癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2012年

3 鄧燕杰;人RI基因在臍血干細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染表達(dá)及對(duì)小鼠黑色素瘤基因治療的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2005年

4 盛敏佳;PDPN與CLEC-2促進(jìn)血小板介導(dǎo)的小鼠黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2015年

5 傅攀峰;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的人核糖核酸酶抑制因子對(duì)小鼠黑色素瘤基因治療的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2003年

6 陳海輝;中頻交變電場(chǎng)對(duì)小鼠黑色素瘤離體細(xì)胞和皮下移植瘤的作用研究[D];中南大學(xué);2012年

7 Samuel Essien-Baidoo;[D];江蘇大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 周慧容;吲哚胺2,3-雙加氧酶2（IDO2）在小鼠黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移中的作用研究[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2015年

2 李歡;高強(qiáng)度聚焦超聲輻照抑制小鼠黑色素瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

3 時(shí)春風(fēng);人工合成基因重組肽rLj-RGD4對(duì)小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞的抑制作用[D];遼寧師范大學(xué);2016年

4 翟國(guó)勤;仙臺(tái)病毒囊膜抗小鼠黑色素瘤的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2011年

5 許靈會(huì);多基因聯(lián)合治療小鼠黑色素瘤的實(shí)驗(yàn)研究[D];延邊大學(xué);2014年

6 彭細(xì)毛;口服重組沙門(mén)菌SL7207/mtHSP70/HSV-TK靶向抗小鼠黑色素瘤實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

7 楊善花;IL-24基因治療小鼠黑色素瘤的實(shí)驗(yàn)研究[D];延邊大學(xué);2012年

8 孫淑娟;大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)小鼠黑色素瘤影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

9 曹卉;小鼠黑色素瘤B16移植瘤模型的建立[D];延邊大學(xué);2008年

10 康斯斯;白藜蘆醇對(duì)小鼠黑色素瘤RUNX3基因的作用及機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：1620141