目的:近年來,人脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hASCs)在組織修復(fù)重建領(lǐng)域應(yīng)用廣泛,并且大量研究表明hASCs發(fā)揮的療效主要?dú)w功于其旁分泌產(chǎn)生的細(xì)胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)。隨著進(jìn)一步的深入研究,發(fā)現(xiàn)EVs的功能受hASCs所處的微環(huán)境影響。因此,本研究旨在模擬生理性低氧環(huán)境來培養(yǎng)hASCs,從而獲得低氧hASC-EVs,隨后對低氧hASC-EVs能否促進(jìn)皮瓣移植的修復(fù)進(jìn)行評估,并進(jìn)一步探討其機(jī)制。方法:實(shí)驗(yàn)方案主要分為兩大部分:(1)在體外,分別將常氧hASC-EVs和低氧hASC-EVs(低氧預(yù)處理的hASC所釋放的EVs)與人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共培養(yǎng),通過CCK-8、劃痕試驗(yàn)、Matrigel成管實(shí)驗(yàn)來評估它們的促增殖、遷移和管樣分化能力;并通過超氧化物歧化酶、丙二醛試劑盒及流式細(xì)胞術(shù)檢測其改善氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的能力。(2)將SD大鼠隨機(jī)分為3組,背部制作一個(gè)9×3c...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 前言
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)動物
    2.2 主要試劑及儀器
    2.3 方法
        2.3.1 人脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定
        2.3.2 hASC-EVs的收集、分離及鑒定
        2.3.3 PKH26 示蹤hASC-Evs的轉(zhuǎn)移
        2.3.4 體外檢測hASC-Evs能否促進(jìn)血管新生
        2.3.5 體外檢測hASC-Evs能否改善氧化應(yīng)激
        2.3.6 體外檢測hASC-Evs能否改善細(xì)胞凋亡
        2.3.7 動物模型制備及分組
        2.3.8 動物模型檢測指標(biāo)
        2.3.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 hASCs的細(xì)胞形態(tài)及鑒定
    3.2 常氧hASCs-EVs與低氧hASCs-EVs的鑒定及差異分析
    3.3 觀察hASC-EVs能否被HUVECs攝取
    3.4 體外檢測hASC-Evs能否促進(jìn)血管新生
        3.4.1 CCK-8 增殖實(shí)驗(yàn)
        3.4.2劃痕實(shí)驗(yàn)
        3.4.3 Matrigel成管實(shí)驗(yàn)
    3.5 體外檢測hASC-Evs能否改善氧化應(yīng)激的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.6 體外檢測hASC-Evs能否改善細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.7 動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.7.1 術(shù)后第7 天皮瓣大體觀察
        3.7.2 組織HE和免疫組化結(jié)果
        3.7.3 PCR檢測大鼠皮瓣HIF-1α和VEGF mRNA水平的結(jié)果
第4章 討論
第5章 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性自我評價(jià)
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：4023733