【目的】脊髓損傷（Spinal Cord Injury,SCI）是一種嚴重的創(chuàng)傷性疾病,修復(fù)手段主要有手術(shù)治療、藥物治療、細胞移植等。神經(jīng)干細胞移植能夠有效促進SCI后神經(jīng)功能的恢復(fù),是當(dāng)前研究的熱點。iPSCs誘導(dǎo)的神經(jīng)干細胞（induced Pluripotent Stem Cells-Neural Stem Cells,iPS-NSCs）是一種具有自我更新和多向分化潛能的多能干細胞,自體取材避免了倫理學(xué)爭議和免疫排斥,應(yīng)用于細胞移植治療脊髓損傷具有顯著的優(yōu)勢。然而干細胞在體內(nèi)存活率低、向神經(jīng)方向分化較難,因此如何更好的促進其增殖、定向分化是眾多研究者關(guān)注的焦點。國內(nèi)外研究表明低強度脈沖超聲（Low Intensity Pulsed Ultrasound,LIPUS）是一種可以促進多種細胞增殖、分化的物理刺激手段,本研究旨在明確LIPUS對iPS-NSCs細胞特性的影響以及LIPUS介導(dǎo)的iPS-NSCs對脊髓損傷的修復(fù)作用,為干細胞的優(yōu)化和SCI的治療提供一種新的策略。本研究通過:1)體外培養(yǎng)iPS-NSCs,將自主研制的LIPUS激勵系統(tǒng)作用于iPS-NSCs細胞,觀察細胞的形態(tài)...

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、LIPUS激勵iPS-NSCs最佳物理參數(shù)的研究
    1.1 對象和方法
        1.1.1 實驗器械
        1.1.2 實驗試劑
        1.1.3 低強度脈沖超聲系統(tǒng)的搭建
        1.1.4 iPS-NSCs傳代培養(yǎng)及細胞鑒定
        1.1.5 低強度脈沖超聲激勵細胞模型的建立
        1.1.6 CCK-8 檢測iPS-NSCs增殖活性
        1.1.7 統(tǒng)計學(xué)分析
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 成功搭建低強度脈沖超聲激勵系統(tǒng)
        1.2.2 iPS-NSCs細胞的形態(tài)學(xué)觀察及細胞鑒定
        1.2.3 LIPUS對 iPS-NSCs增殖活性的影響以及最佳激勵條件的確定
    1.3 討論
        1.3.1 LIPUS在生物組織中的理學(xué)效應(yīng)及其在骨科學(xué)中的應(yīng)用
        1.3.2 神經(jīng)干細胞在神經(jīng)系統(tǒng)中的起源、特點和作用
        1.3.3 誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞的來源及誘導(dǎo)體系
        1.3.4 LIPUS對細胞增殖的作用
    1.4 小結(jié)
二、在最佳生物學(xué)參數(shù)下,LIPUS優(yōu)化iPS-NSCs細胞特性的研究
    2.1 對象和方法
        2.1.1 實驗器械
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 低強度脈沖超聲系統(tǒng)的搭建
        2.1.4 iPS-NSCs傳代培養(yǎng)及細胞鑒定
        2.1.5 低強度脈沖超聲激勵細胞模型的建立
        2.1.6 TUNEL檢測iPS-NSCs細胞凋亡的情況
        2.1.7 ELISA檢測iPS-NSCs細胞上清液中神經(jīng)營養(yǎng)因子的含量
        2.1.8 Western Blot檢測Notch信號通路及細胞分化情況
        2.1.9 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 LIPUS激勵iPS-NSCs后細胞凋亡率的變化
        2.2.2 LIPUS激勵iPS-NSCs后細胞中NTFs含量的變化
        2.2.3 LIPUS激勵iPS-NSCs后細胞分化的情況
        2.2.4 LIPUS激勵iPS-NSCs后 Notch信號通路相關(guān)蛋白含量的變化
    2.3 討論
        2.3.1 LIPUS對 iPS-NSCs細胞生物特性的影響
        2.3.2 LIPUS激勵iPS-NSCs可能的作用機制
        2.3.3 LIPUS修復(fù)神經(jīng)損傷的潛力
    2.4 小結(jié)
三、LIPUS介導(dǎo)iPS-NSCs細胞移植修復(fù)脊髓損傷的研究
    3.1 對象和方法
        3.1.1 實驗器械
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 脊髓損傷動物模型建立
        3.1.4 細胞移植
        3.1.5 BBB運動功能評分
        3.1.6 脊髓標本取出及制作切片
        3.1.7 石蠟切片的制備
        3.1.8 HE染色
        3.1.9 免疫熒光觀察移植細胞在體內(nèi)分化情況
        3.1.10 ELISA檢測測定脊髓組織內(nèi)的營養(yǎng)因子的表達情況
        3.1.11 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 HE染色結(jié)果
        3.2.2 GFAP、NF200 免疫熒光染色結(jié)果
        3.2.3 脊髓組織內(nèi)的營養(yǎng)因子的表達情況
        3.2.4 BBB評分結(jié)果
    3.3 討論
        3.3.1 脊髓損傷動物模型的制備及運動功能評價指標的選擇
        3.3.2 NSCs在脊髓損傷修復(fù)中的作用及應(yīng)用
        3.3.3 多潛能干細胞在神經(jīng)損傷等再生醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用
        3.3.4 LIPUS介導(dǎo)的iPSc-NSCs修復(fù)脊髓損傷可能的作用機制
    3.4 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
附錄
綜述 低強度脈沖超聲在神經(jīng)修復(fù)中的應(yīng)用
    參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：4007416