脊髓損傷為脊柱外科較為嚴重的疾病之一,多因物理損傷導致,患者傷后常出現(xiàn)損傷部位以遠的肢體感覺、運動,甚至二便功能障礙。脊髓損傷可分為不完全性或完全性神經(jīng)損傷,依據(jù)損傷的類型和輕重程度,神經(jīng)功能恢復所需時間長短不一。因神經(jīng)損傷后難以自行修復,所以損傷嚴重者往往終生殘留肢體功能障礙。這不僅降低了患者自身的生活質(zhì)量,而且護理和治療相關(guān)費用也給患者家庭帶來較大的經(jīng)濟壓力。目前脊髓損傷的發(fā)病率在逐漸升高,關(guān)于脊髓損傷后的神經(jīng)修復和再生已成為所有研究人員面臨的嚴峻挑戰(zhàn)。伴隨現(xiàn)代生物技術(shù)的日新月異,人們逐漸認識到神經(jīng)細胞可通過干細胞的移植而再生,使損傷的神經(jīng)功能得到修復。神經(jīng)干細胞是干細胞成員之一,具有增殖、自我更新和分化為多種神經(jīng)組織細胞的特點。神經(jīng)干細胞可分為內(nèi)源性和外源性神經(jīng)干細胞。內(nèi)源性神經(jīng)干細胞在成體中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)數(shù)量較少,再生能力較低,依靠刺激內(nèi)源性神經(jīng)干細胞,不足以補償損失的神經(jīng)細胞與組織,目前通過神經(jīng)干細胞移植來補償神經(jīng)細胞與組織的缺失已經(jīng)成為脊髓損傷的治療方法之一。但是,神經(jīng)干細胞在不斷受到學術(shù)界關(guān)注的同時,也面臨著諸多問題。如干細胞移植治療的安全性問題(致瘤性)以及干細胞移植后分...

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :基于基因芯片及實驗驗證選取目的microRNA
    1 前言
    2 實驗材料與方法
        2.1 實驗細胞、主要試劑和儀器
            2.1.1 實驗細胞
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 CCK-8 法繪制細胞生長曲線
            2.2.3 神經(jīng)干細胞分化培養(yǎng)
            2.2.4 提取細胞RNA
            2.2.5 microRNA RT-qPCR檢測
            2.2.6 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)與分化
        3.2 神經(jīng)干細胞的生長曲線
        3.3 大鼠神經(jīng)干細胞與神經(jīng)元中microRNA的差異表達
        3.4 miR-329 的莖環(huán)結(jié)構(gòu)與miR-329-3p堿基序列
        3.5 miR-329-3p在神經(jīng)干細胞分化過程中的表達變化
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :miR-329-3p調(diào)控NSCs增殖與分化的實驗研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗細胞、主要試劑和儀器
            2.1.1 實驗細胞
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 CCK-8 法繪制細胞生長曲線
            2.2.3 神經(jīng)干細胞轉(zhuǎn)染
            2.2.4 提取細胞RNA
            2.2.5 神經(jīng)干細胞轉(zhuǎn)染后相關(guān)基因RT-qPCR檢測
            2.2.6 CCK-8 法檢測細胞增殖
            2.2.7 EdU法檢測細胞增殖
            2.2.8 熒光素酶實驗
            2.2.9 Western blot檢測相關(guān)蛋白表達
            2.2.10 免疫熒光檢測
            2.2.11 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 檢測miR-329-3p mimic于神經(jīng)干細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)染情況
            3.1.1 轉(zhuǎn)染效率檢測
            3.1.2 RT-qPCR法檢測神經(jīng)干細胞轉(zhuǎn)染miR-329-3p mimic后 miR-329-3p表達情況
        3.2 miR-329-3p調(diào)節(jié)神經(jīng)干細胞增殖的功能研究
            3.2.1 miR-329-3p過表達抑制了神經(jīng)干細胞的增殖
            3.2.2 通過生物信息學預測E2F1是miR-329-3p的一個作用靶點
            3.2.3 熒光素酶實驗檢測miR-329-3p靶向調(diào)控E2F
            3.2.4 miR-329-3p在神經(jīng)干細胞內(nèi)靶向調(diào)控E2F1 的表達
            3.2.5 干擾E2F1 抑制神經(jīng)干細胞增殖
        3.3 miR-329-3p調(diào)節(jié)神經(jīng)干細胞分化的功能研究
            3.3.1 miR-329-3p過表達促進了神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元的分化
            3.3.2 E2F1 在神經(jīng)干細胞分化過程中的表達變化
            3.3.3 miR-329-3p靶向E2F1 調(diào)控神經(jīng)干細胞的分化
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：4000714