目的:觀察丙泊酚對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的組織蛋白酶K(CathepsinK,CatK)和Notch1蛋白表達(dá)的影響,探討丙泊酚對CatK和Notch1蛋白表達(dá)的意義。方法:選用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs),分為正常組(CON)和丙泊酚組(PF),當(dāng)細(xì)胞長滿80%左右時進(jìn)行給藥,以20μM丙泊酚濃度處理24h。收集上清采用ELISA法檢測VEGF含量、收集部分細(xì)胞用Western Blot檢測Cat K、c-Notch1和t-Notch1表達(dá),若觀察到CatK表達(dá)具有顯著性變化,則進(jìn)一步進(jìn)行蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)。采用TMT定量蛋白組學(xué)方法鑒定差異表達(dá)蛋白。應(yīng)用Mascot軟件對二級質(zhì)譜圖信息進(jìn)行定性定量計(jì)算。對差異蛋白進(jìn)行GO注釋、亞基分類、GO富集分析、KEGG富集分析和結(jié)構(gòu)域富集分析。結(jié)果:(1)丙泊酚介導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中CatK表達(dá)增強(qiáng)和Notch1活化。(2)丙泊酚對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的VEGF分泌無明顯變化。(3)經(jīng)過TmT定量蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn),共篩選出115個差異表達(dá)蛋白,其中上調(diào)蛋白71個,下調(diào)蛋白44個。(4)差異表達(dá)蛋白GO分析結(jié)果,上調(diào)蛋白主要參與的生物過程,包括細(xì)胞、單生物及代...

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１？丙泊酌對ＣａｔＫ、ｃ－Ｎｏｔｃｈｌ和ｔ－Ｎｏｔｃｈｌ的表達(dá)??注．？與對照組相比，＊＊表示Ｐ＜０．０１??

３．?１兩泊齡對Ｃａｔ?Ｋ和Ｎｏｔｃｈｌ表達(dá)的影響??丙泊酌促進(jìn)人臍靜脈細(xì)胞中ＣａｔＫ、ｃ－Ｎｏｔｃｈｌ的表達(dá)，對ｔ－Ｎｏｔｃｈｌ表達(dá)無明??顯變化，見圖１。??ＣＯＮ?ＰＦ?ＣＯＮ?ＰＦ??ＣａｔＫ?ｃ－Ｎｏｔｄｉｌ?祀?＿??＼?＊??ｌ－Ｎ—ｌ?一一??ｌｅｃｔｉｎ?ｍｍ?....

圖３．差異表達(dá)蛋白數(shù)目??

本研宄中鑒定到的蛋白質(zhì)一共為６０９４個，其中含有定量信息的蛋白質(zhì)為??５３４３個。按照１．３倍差異倍數(shù)，ｐ＜０．０５為標(biāo)準(zhǔn)，共篩選出１１５個差異表達(dá)蛋白，??其中上調(diào)蛋白７１個，下調(diào)蛋白４４個，見圖３。??？（）??■■■■??６０??＾?１?，??Ｉ?－??■，．．：?：■■Ｉ....

圖２．丙泊酚對ＶＥＧＦ分泌的影響??

３．?２丙泊酚對ＶＥＧＦ分泌的影響??丙泊酚組ＶＥＧＦ分泌量為１１２９±１０７ｐｇ／ｍｌ，對照組ＶＥＧＦ分泌量為??１１８１±９６ｐｇ／ｍｌ，丙泊酚組與對照組相比，Ｐ＞０．０５，沒有顯著性差異，見圖２。??１１??

圖４．上調(diào)蛋白ＧＯ分析結(jié)果??

能為結(jié)合（ＨＥＣＴＤ１等４２個）、催化活性（ＡＢＣＦ２等２９個）、核酸結(jié)合轉(zhuǎn)錄??因子活性（ＵＨＲＦ１）、轉(zhuǎn)錄因子活性、蛋白結(jié)合（ＮＡＣＡ）、轉(zhuǎn)運(yùn)（ＡＢＣＦ２），??圖４和圖５。??１３??

本文編號：3980872