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可溶性IL-36受體抑制IL-17和IL-36γ誘導(dǎo)的REG3A延緩傷口愈合

發(fā)布時(shí)間:2017-04-09 07:25

  本文關(guān)鍵詞:可溶性IL-36受體抑制IL-17和IL-36γ誘導(dǎo)的REG3A延緩傷口愈合,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


【摘要】:角質(zhì)形成細(xì)胞位于皮膚的最外層,占表皮細(xì)胞總數(shù)的90%,對(duì)皮膚發(fā)揮正常功能起到關(guān)鍵的作用。在與皮膚相關(guān)的疾病當(dāng)中,例如銀屑病和傷口中,角質(zhì)形成細(xì)胞都扮演著重要的角色。已知IL-17可以促進(jìn)傷口愈合,并誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)IL-36y和REG3A(胰島再生源蛋白3A),但其具體機(jī)制尚未研究清楚。本研究通過基因沉默技術(shù)發(fā)現(xiàn)IL-17通過激活I(lǐng)L-17RA和Actl來誘導(dǎo)IL-36γ的表達(dá);而敲低角質(zhì)形成細(xì)胞中IL-36y的表達(dá),使得IL-17誘導(dǎo)的REG3A表達(dá)也降低,表明IL-17誘導(dǎo)REG3A的表達(dá)部分依賴于IL-36γ;進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)IL-36y通過與其受體IL-36R結(jié)合,進(jìn)而激活下游p38-Akt-β-catenin信號(hào)通路,來誘導(dǎo)REG3A的表達(dá),最終促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖。在小鼠體內(nèi),我們發(fā)現(xiàn):IL-17基因敲除小鼠的傷口愈合速度明顯比野生型小鼠慢,皮膚傷口中IL-36γ和RegⅢγ的表達(dá)量也比野生型小鼠低。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn):當(dāng)向IL-17基因敲除的小鼠皮間注射IL-36γ時(shí),IL-36γ可以促進(jìn)皮膚傷口處RegⅢγ的表達(dá),從而加快皮膚傷口的愈合。另外,我們發(fā)現(xiàn)了一種可溶性的IL-36受體,我們稱之為sIL-36R。在角質(zhì)形成細(xì)胞中超表達(dá)sIL-36R,它可以抑制IL-17和IL-36γ誘導(dǎo)的REG3A,從而抑制由IL-17和IL-36γ促進(jìn)的細(xì)胞傷口愈合。根據(jù)IL-1家族中其他可溶性受體的功能,我們推測(cè)sIL-36R可能是通過與膜上受體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合IL-36γ,從而抑制其下游信號(hào)通路,來抑制傷口愈合。綜上所述,本課題闡明了IL-17在角質(zhì)形成細(xì)胞中通過誘導(dǎo)IL-36y來誘導(dǎo)REG3A表達(dá),從而促進(jìn)小鼠皮膚傷口愈合的分子機(jī)制,同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)SIL-36R可以抑制IL-36γ的功能。因此,本研究為治療皮膚傷口提供新的理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】:角質(zhì)形成細(xì)胞 白介素36 白介素17 可溶性白介素36受體 傷口愈合
【學(xué)位授予單位】:華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號(hào)】:R641
【目錄】:
  • 摘要6-7
  • Abstract7-11
  • 第一章 綜述11-27
  • 一、角質(zhì)形成細(xì)胞的功能11-15
  • 1、角質(zhì)形成細(xì)胞在傷口愈合中的功能11-13
  • 2、角質(zhì)形成細(xì)胞在皮膚過度炎癥性疾病中的功能13-15
  • 3、角質(zhì)形成細(xì)胞與其他皮膚疾病15
  • 二、IL-1家族可溶性受體的發(fā)現(xiàn)及功能15-23
  • 1、IL-1亞家族可溶性受體的發(fā)現(xiàn)及功能17-21
  • 2、IL-18亞家族可溶性受體的發(fā)現(xiàn)及功能21-22
  • 3、IL-1家族可溶性受體對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞功能的影響22-23
  • 三、IL-36亞家族及其對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞功能的影響23-26
  • 1、IL-36亞家族成員23
  • 2、IL-36受體23-24
  • 3、IL-36家族對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞功能的影響24-26
  • 四、總結(jié)與展望26-27
  • 第二章 可溶性IL-36受體抑制IL-17和IL-36γ誘導(dǎo)的REG3A延緩皮膚傷口愈合的分子機(jī)制27-72
  • 一、引言27-29
  • 二、實(shí)驗(yàn)材料29-41
  • 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器和耗材29
  • 2.2 主要試劑的配制29-36
  • 2.3 反應(yīng)體系36-37
  • 2.5 抗體37-38
  • 2.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物38
  • 2.7 細(xì)胞株38
  • 2.8 菌株38
  • 2.9 引物38-39
  • 2.10 shRNA序列39-41
  • 2.11 質(zhì)粒41
  • 三、實(shí)驗(yàn)方法41-52
  • 3.1 細(xì)菌感受態(tài)的制備41-42
  • 3.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建42-43
  • 3.3 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化43-44
  • 3.4 陽性克隆的篩選44
  • 3.5 細(xì)胞培養(yǎng)44-45
  • 3.6 細(xì)胞蛋白的提取45
  • 3.7 細(xì)胞RNA的抽提45
  • 3.8 小鼠基因型的鑒定45-46
  • 3.9 小鼠傷口模型的構(gòu)建46
  • 3.10 組織蛋白的提取46-47
  • 3.11 組織RNA的提取47
  • 3.12 熒光定量PCR47
  • 3.13 慢病毒質(zhì)粒的構(gòu)建與包被47-48
  • 3.14 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染和感染48-49
  • 3.15 蛋白質(zhì)免疫印跡49-50
  • 3.16 細(xì)胞劃痕傷口愈合實(shí)驗(yàn)50
  • 3.17 重組蛋白的表達(dá)純化50-51
  • 3.18 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與分析51-52
  • 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析52-69
  • 4.1 IL-17在角質(zhì)形成細(xì)胞中誘導(dǎo)IL-36γ表達(dá)的分子機(jī)制52-54
  • 4.2 IL-36γ在角質(zhì)形成細(xì)胞中誘導(dǎo)REG3A表達(dá)的分子機(jī)制54-58
  • 4.3 IL-36γ介導(dǎo)IL-17誘導(dǎo)REG3A58
  • 4.4 IL-17和IL-36γ對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)作用58-61
  • 4.5 IL-17和IL-36γ在小鼠傷口中的作用61-63
  • 4.6 sIL-36R在IL-17、IL-36γ誘導(dǎo)的REG3A中所起到的作用63-66
  • 4.7 sIL-36R抑制IL-17、IL-36γ促進(jìn)的傷口愈合66-69
  • 五、討論69-72
  • 第三章 總結(jié)72-74
  • 參考文獻(xiàn)74-80
  • 附錄Ⅰ 縮略詞表80-82
  • 碩士期間參與申請(qǐng)的專利82-83
  • 致謝83-84

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