本文關(guān)鍵詞：可溶性IL-36受體抑制IL-17和IL-36γ誘導的REG3A延緩傷口愈合，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：角質(zhì)形成細胞位于皮膚的最外層,占表皮細胞總數(shù)的90%,對皮膚發(fā)揮正常功能起到關(guān)鍵的作用。在與皮膚相關(guān)的疾病當中,例如銀屑病和傷口中,角質(zhì)形成細胞都扮演著重要的角色。已知IL-17可以促進傷口愈合,并誘導角質(zhì)形成細胞表達IL-36y和REG3A(胰島再生源蛋白3A),但其具體機制尚未研究清楚。本研究通過基因沉默技術(shù)發(fā)現(xiàn)IL-17通過激活I(lǐng)L-17RA和Actl來誘導IL-36γ的表達；而敲低角質(zhì)形成細胞中IL-36y的表達,使得IL-17誘導的REG3A表達也降低,表明IL-17誘導REG3A的表達部分依賴于IL-36γ；進一步研究發(fā)現(xiàn)IL-36y通過與其受體IL-36R結(jié)合,進而激活下游p38-Akt-β-catenin信號通路,來誘導REG3A的表達,最終促進角質(zhì)形成細胞的增殖。在小鼠體內(nèi),我們發(fā)現(xiàn)：IL-17基因敲除小鼠的傷口愈合速度明顯比野生型小鼠慢,皮膚傷口中IL-36γ和RegⅢγ的表達量也比野生型小鼠低。進一步研究發(fā)現(xiàn)：當向IL-17基因敲除的小鼠皮間注射IL-36γ時,IL-36γ可以促進皮膚傷口處RegⅢγ的表達,從而加快皮膚傷口的愈合。另外,我們發(fā)現(xiàn)了一種可溶性的IL-36受體,我們稱之為sIL-36R。在角質(zhì)形成細胞中超表達sIL-36R,它可以抑制IL-17和IL-36γ誘導的REG3A,從而抑制由IL-17和IL-36γ促進的細胞傷口愈合。根據(jù)IL-1家族中其他可溶性受體的功能,我們推測sIL-36R可能是通過與膜上受體競爭性結(jié)合IL-36γ,從而抑制其下游信號通路,來抑制傷口愈合。綜上所述,本課題闡明了IL-17在角質(zhì)形成細胞中通過誘導IL-36y來誘導REG3A表達,從而促進小鼠皮膚傷口愈合的分子機制,同時我們發(fā)現(xiàn)SIL-36R可以抑制IL-36γ的功能。因此,本研究為治療皮膚傷口提供新的理論基礎。
【關(guān)鍵詞】：角質(zhì)形成細胞 白介素36 白介素17 可溶性白介素36受體 傷口愈合
【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R641
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 第一章 綜述11-27
• 一、角質(zhì)形成細胞的功能11-15
• 1、角質(zhì)形成細胞在傷口愈合中的功能11-13
• 2、角質(zhì)形成細胞在皮膚過度炎癥性疾病中的功能13-15
• 3、角質(zhì)形成細胞與其他皮膚疾病15
• 二、IL-1家族可溶性受體的發(fā)現(xiàn)及功能15-23
• 1、IL-1亞家族可溶性受體的發(fā)現(xiàn)及功能17-21
• 2、IL-18亞家族可溶性受體的發(fā)現(xiàn)及功能21-22
• 3、IL-1家族可溶性受體對角質(zhì)形成細胞功能的影響22-23
• 三、IL-36亞家族及其對角質(zhì)形成細胞功能的影響23-26
• 1、IL-36亞家族成員23
• 2、IL-36受體23-24
• 3、IL-36家族對角質(zhì)形成細胞功能的影響24-26
• 四、總結(jié)與展望26-27
• 第二章 可溶性IL-36受體抑制IL-17和IL-36γ誘導的REG3A延緩皮膚傷口愈合的分子機制27-72
• 一、引言27-29
• 二、實驗材料29-41
• 2.1 實驗儀器和耗材29
• 2.2 主要試劑的配制29-36
• 2.3 反應體系36-37
• 2.5 抗體37-38
• 2.6 實驗動物38
• 2.7 細胞株38
• 2.8 菌株38
• 2.9 引物38-39
• 2.10 shRNA序列39-41
• 2.11 質(zhì)粒41
• 三、實驗方法41-52
• 3.1 細菌感受態(tài)的制備41-42
• 3.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建42-43
• 3.3 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化43-44
• 3.4 陽性克隆的篩選44
• 3.5 細胞培養(yǎng)44-45
• 3.6 細胞蛋白的提取45
• 3.7 細胞RNA的抽提45
• 3.8 小鼠基因型的鑒定45-46
• 3.9 小鼠傷口模型的構(gòu)建46
• 3.10 組織蛋白的提取46-47
• 3.11 組織RNA的提取47
• 3.12 熒光定量PCR47
• 3.13 慢病毒質(zhì)粒的構(gòu)建與包被47-48
• 3.14 細胞的轉(zhuǎn)染和感染48-49
• 3.15 蛋白質(zhì)免疫印跡49-50
• 3.16 細胞劃痕傷口愈合實驗50
• 3.17 重組蛋白的表達純化50-51
• 3.18 實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與分析51-52
• 四、實驗結(jié)果與分析52-69
• 4.1 IL-17在角質(zhì)形成細胞中誘導IL-36γ表達的分子機制52-54
• 4.2 IL-36γ在角質(zhì)形成細胞中誘導REG3A表達的分子機制54-58
• 4.3 IL-36γ介導IL-17誘導REG3A58
• 4.4 IL-17和IL-36γ對角質(zhì)形成細胞增殖的調(diào)節(jié)作用58-61
• 4.5 IL-17和IL-36γ在小鼠傷口中的作用61-63
• 4.6 sIL-36R在IL-17、IL-36γ誘導的REG3A中所起到的作用63-66
• 4.7 sIL-36R抑制IL-17、IL-36γ促進的傷口愈合66-69
• 五、討論69-72
• 第三章 總結(jié)72-74
• 參考文獻74-80
• 附錄Ⅰ 縮略詞表80-82
• 碩士期間參與申請的專利82-83
• 致謝83-84

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