本文關(guān)鍵詞：E3泛素連接酶FBW7對(duì)KLF10蛋白穩(wěn)定性調(diào)控及生物學(xué)功能的研究

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【摘要】：FBW7是SCF型泛素連接酶(SKP1, Cullinl, F-Box蛋白復(fù)合物)中識(shí)別底物的元件。它能夠識(shí)別底物上保守的降解信號(hào)肽(CPD)進(jìn)而促進(jìn)靶蛋白發(fā)生泛素化依賴的降解。它的腫瘤抑制因子的作用已經(jīng)被廣泛接受,越來(lái)越多的報(bào)道指出FBW7對(duì)一些原癌蛋白起重要作用,在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞內(nèi)代謝、分化和凋亡中發(fā)揮重要作用。近年來(lái)越來(lái)越多的證據(jù)表明FBW7在控制干細(xì)胞的自我更新、分化、存活和保持干性中具有重要功能,因此對(duì)FBW7新底物的發(fā)現(xiàn)是對(duì)其生物學(xué)功能和它抑制腫瘤發(fā)生機(jī)制研究至關(guān)重要。KLF10是Kruppel樣鋅指轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員,它作為一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子能通過(guò)其鋅指結(jié)構(gòu)域與DNA結(jié)合而調(diào)控一系列基因的轉(zhuǎn)錄。KLF10也被稱作TGFβ可誘導(dǎo)的早期基因I(TIEG1),已經(jīng)有報(bào)道指出KLF10可以被TGFβ,表皮生長(zhǎng)因子和骨形成蛋白快速誘導(dǎo)。之前有報(bào)道指出KLF10在T細(xì)胞中具有重要作用,KLF10可以調(diào)節(jié)FOXP3的表達(dá)并通過(guò)與TGFβ一起作用調(diào)節(jié)CD4+CD25-T細(xì)胞和調(diào)節(jié)T細(xì)胞。KLF10在先天免疫細(xì)胞如巨噬細(xì)胞中的功能也有一些研究,它可以調(diào)節(jié)一些炎癥因子的產(chǎn)生。由于KLF10在細(xì)胞分化和許多信號(hào)通路中都具有重要的作用,并且KLF10是一些疾病發(fā)生的一個(gè)標(biāo)志,因此對(duì)KLF10的生物學(xué)功能的研究是目前生物領(lǐng)域的一個(gè)研究熱點(diǎn)。在本課題的研究中,我們利用生物信息學(xué)的方法預(yù)測(cè)出KLF10含有FBW7的CPD,推測(cè)KLF10可能是FBW7的新的底物,進(jìn)一步通過(guò)外源過(guò)表達(dá)和內(nèi)源的一些實(shí)驗(yàn)確定了FBW7對(duì)KLF10蛋白穩(wěn)定性的調(diào)控。通過(guò)實(shí)驗(yàn)清楚了FBW7調(diào)控KLF10蛋白穩(wěn)定性的分子機(jī)制,即FBW7通過(guò)促進(jìn)KLF10的泛素化水平進(jìn)而調(diào)控KLF10的蛋白酶體途徑的降解。通過(guò)體內(nèi)體外的實(shí)驗(yàn)均能證明FBW7與KLF10可以相互作用,通過(guò)一系列的點(diǎn)突變證明了KLF10的CPD在FBW7對(duì)其降解過(guò)程中發(fā)揮重要作用,并更明確地指出了CPD中對(duì)磷酸化具有重要作用的氨基酸,提出了FBW7降解底物的具體分子機(jī)制。由于KLF1 和KLF10有很強(qiáng)的同源性,同時(shí)預(yù)測(cè)KLF11也含有CPD,因此我們對(duì)FBW7降解KLF11的分子機(jī)制也做過(guò)一些研究,但是具體的功能還沒(méi)完成。本研究提出了KLF10和KLF11蛋白穩(wěn)定性調(diào)控的新的機(jī)制,同時(shí)也為FBW7功能的研究提供了新的思路。揭示了FBW7通過(guò)調(diào)控其底物KLF10和KLF11的穩(wěn)定性進(jìn)而可能在免疫細(xì)胞中或一些疾病發(fā)生中發(fā)揮重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：FBW7 KLF10 KLF11 泛素化 蛋白降解
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R3411
【目錄】：

• 論文摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 研究背景及文獻(xiàn)綜述12-22
• 一、泛素-蛋白酶體途徑的蛋白質(zhì)降解12-13
• 二、泛素連接酶FBW713-19
• 三、轉(zhuǎn)錄因子KLF1019-21
• 四、轉(zhuǎn)錄因子KLF1121-22
• 第二章 材料與方法22-45
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)常用試劑23-33
• 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)儀器33
• 第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法33-45
• 第三章 結(jié)果與分析45-68
• 第一部分 FBW7對(duì)KLF10蛋白穩(wěn)定性的影響及其機(jī)制研究45-64
• 第一節(jié)、通過(guò)生物信息學(xué)的方法預(yù)測(cè)KLFs家族的CPD45-47
• 第二節(jié)、FBW7可以特異性調(diào)控KLF10的蛋白穩(wěn)定性并且需要形成一個(gè)有效的降解復(fù)合物發(fā)揮作用47-51
• 第三節(jié)、通過(guò)體內(nèi)體外的實(shí)驗(yàn)證明FBW7與KLF10之間的相互作用51-54
• 第四節(jié)、通過(guò)點(diǎn)突變找到FBW7降解KLF10的CPD54-59
• 第五節(jié)、FBW7與磷酸化的KLF10相互作用59-61
• 第六節(jié)、FBW7可以促進(jìn)KLF10發(fā)生泛素化61-64
• 第二部分 FBW7對(duì)KLF11的蛋白穩(wěn)定性的影響64-68
• 第一節(jié)、FBW7對(duì)KLF11的降解作用64-65
• 第二節(jié)、FBW7與KLF11相互作用65
• 第三節(jié)、KLF11中含有FBW7的CPD65-66
• 第四節(jié)、FBW7能促進(jìn)KLF11發(fā)生泛素化66-68
• 第四章 論文總結(jié)與討論68-72
• 參考文獻(xiàn)72-76
• 附錄76-77
• 致謝77-78

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1 何洪智;趙曉航;張立勇;吳e，

本文編號(hào)：543186