本文關(guān)鍵詞：抑制內(nèi)皮祖細(xì)胞自噬對在血栓機(jī)化再通的實(shí)驗(yàn)研究（二），由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：應(yīng)用適量自噬抑制劑3-MA（3-甲基腺嘌呤）作用于內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelialprogenitor cells，EPCs）后，移植到大鼠深靜脈血栓模型體內(nèi)，探討干預(yù)后的EPCs在血栓機(jī)化再通中的作用，進(jìn)而為下肢深靜脈血栓治療提供一種新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：1.Ficoll密度梯度離心法獲取SD大鼠來源的骨髓單個核細(xì)胞（bonemarrow-derived mononuclear cells，BMMNCs），經(jīng)內(nèi)皮祖細(xì)胞培養(yǎng)基（EGM-2MV）體外誘導(dǎo)、培養(yǎng)、擴(kuò)增EPCs，在倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征，MTT法檢測EPCs增殖情況。采用內(nèi)皮細(xì)胞系列標(biāo)志：CD133、CD34免疫熒光技術(shù)及VEGFR-2、vWF免疫組化對其進(jìn)行鑒定。利用三維培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)EPC具有形成血管能力。采用MTT比色法測定各濃度3-MA及對照組EPCs增殖的作用。 2.血栓模型建立：采用縮窄腎下段下腔靜脈結(jié)合三氯化鐵浸潤破壞血管內(nèi)膜方法建立大鼠深靜脈血栓模型，并飼養(yǎng)至10天，備移植用。動物隨機(jī)分四組，經(jīng)大鼠股靜脈穿刺注射移植液體。A組(n=15)：空白對照組，注射生理鹽水；B組（n=15）EPCs移植組，移植lml含有106個EPCs的細(xì)胞懸液；C組(n=15)：注射3-MA稀釋液（5mmol/l）；D組(n=15)：移植1ml含有經(jīng)5mol/l3-MA處理后的EPCs的細(xì)胞懸液。3．移植后分四個時間段（0天、7天、14天、28天）取出血栓段下腔靜脈及血栓，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測各組血栓中新生血管及機(jī)化再通的情況。實(shí)時熒光定量PCR檢測各組標(biāo)本中VEGF，bFGF，MCP-1，Ang-1mRNA表達(dá)情況。4．采用SPSSl7．0軟件進(jìn)行分析。 結(jié)果：1.剛分離的骨髓單個核細(xì)胞(BMMNCs)大小不一，呈圓形，第3天左右細(xì)胞逐漸貼壁，細(xì)胞形態(tài)多樣，呈梭形、卵圓形、紡錘形、三角形或不規(guī)則形，一周左右可見細(xì)胞集落、細(xì)胞呈線狀排列，第10天左右細(xì)胞呈典型鵝卵石樣外觀。細(xì)胞生長曲線呈“S”形，EPCs在培養(yǎng)的5~11天時增殖較快，13天后進(jìn)入平臺期，生長曲線呈典型“S’’形外觀。貼壁細(xì)胞的CD34、VEGF、vWF、CD133均表達(dá)陽性。成血管實(shí)驗(yàn)顯示：EPCs細(xì)胞間首尾相連，形成管腔樣結(jié)構(gòu)。MTT顯示，與對照組相比較，3-MA在濃度5mmol/l對于EPCs的增殖有明顯的促進(jìn)作用。 2.體外成功誘導(dǎo)培養(yǎng)了大鼠骨髓源性EPCs；vWF免疫組化顯示D組的血栓再通毛細(xì)血管密度明顯高于其他三組，D、B之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A、C組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；RT-PCR結(jié)果顯示A、B、C、D組VEGF，bFGF，，MCP-1，Ang-1基因均有表達(dá)，D組較A、B、C組明顯上調(diào)(P0．05)；B組較A、C組表達(dá)上調(diào)（P0.05）；A組與C組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：通過適度的自噬抑制，可促進(jìn)EPCs增殖，移植后血栓內(nèi)血管的新生能力明顯增強(qiáng)，加快了血栓的機(jī)化和再通。
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)皮祖細(xì)胞 自噬 血栓 機(jī)化再通
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-14
• 參考文獻(xiàn)12-14
• 第一部分 大鼠骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定14-23
• 材料與方法14-18
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-19
• 附圖19-23
• 第二部分 探討內(nèi)皮祖細(xì)胞在血栓機(jī)化再通中的實(shí)驗(yàn)研究23-36
• 材料與方法23-29
• 結(jié)果29-31
• 附圖31-36
• 討論36-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 綜述53-63
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 中英文縮略詞表63-64
• 致謝64-65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 顏新 ,千英信 ,衛(wèi)洪昌 ,孫平龍;下肢深靜脈血栓形成的中醫(yī)藥治療進(jìn)展[J];上海中醫(yī)藥雜志;2003年03期

2 李傳勇;李曉強(qiáng);姜坤;孟慶友;于小濱;雷鋒銳;;綠色熒光蛋白基因體外轉(zhuǎn)染骨髓源性血管內(nèi)皮祖細(xì)胞[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年14期

3 ;Molecular mechanism and regulation of autophagy[J];Acta Pharmacologica Sinica;2005年12期

4 李曉強(qiáng);孟慶友;于小濱;;VEGF165基因轉(zhuǎn)染骨髓源性血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)研究[J];中華普通外科雜志;2007年12期

  本文關(guān)鍵詞：抑制內(nèi)皮祖細(xì)胞自噬對在血栓機(jī)化再通的實(shí)驗(yàn)研究（二），由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：431597