本文關(guān)鍵詞：miRNA138體外抑制C2C12細胞纖維化研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)誘導小鼠成肌細胞C2C12建立體外纖維化模型,觀察miRNA138含量改變對細胞纖維化指標的影響,分析miRNA138對細胞纖維化的影響是否通過其靶基因Smad4實現(xiàn)。方法設(shè)計并合成miRNA138-mimics、miRNA138-inhibitor、miRNA138-NC,經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至C2C12細胞,轉(zhuǎn)染后細胞再經(jīng)TGF-β1(10 ng/m L)誘導48 h;Real-time PCR檢測胞內(nèi)miRNA138表達,Western blotting檢測胞內(nèi)纖維化相關(guān)蛋白Smad4、vimentin、α-SMA及collagenⅠ表達變化,確認纖維化模型是否成功建立并分析胞內(nèi)miRNA138表達改變對細胞纖維化指標的影響;CCK-8法檢測miRNA138表達改變對纖維化過程中C2C12細胞增殖活性的影響;生物信息學分析miRNA138與Smad4理論結(jié)合位點并通過熒光素酶報告基因?qū)嶒炦M行驗證;構(gòu)建Smad4基因表達載體,并與miRNA138-mimics共轉(zhuǎn)染C2C12細胞,轉(zhuǎn)染后細胞再經(jīng)TGF-β1誘導發(fā)生纖維化,Western blotting檢測細胞纖維化相關(guān)蛋白變化,分析外源Smad4表達對于miRNA138抑制細胞纖維化作用的影響。結(jié)果 miRNA138-mimics轉(zhuǎn)染C2C12細胞后細胞內(nèi)miRNA138表達明顯上升;miRNA138-inhibitor轉(zhuǎn)染后,C2C12細胞內(nèi)miRNA138表達下降;轉(zhuǎn)染對照組細胞內(nèi)miRNA138表達無明顯變化;蛋白檢測結(jié)果顯示:TGF-β1誘導C2C12細胞48 h,胞內(nèi)Smad4、vimentin、α-SMA和collagenⅠ蛋白表達均明顯升高,細胞對數(shù)生長期增殖活性明顯增強,表明細胞纖維化模型成功建立;細胞內(nèi)miRNA138過表達明顯抑制了C2C12細胞纖維化;熒光素酶活性檢測數(shù)據(jù)顯示,miRNA138與Smad4的預測靶位是客觀存在的;在C2C12細胞內(nèi)高表達外源Smad4基因,可明顯減弱miRNA138-mimics對細胞纖維化相關(guān)蛋白的抑制作用。結(jié)論 miRNA138可以抑制TGF-β1誘導的C2C12細胞纖維化,是通過抑制其靶蛋白Smad4表達實現(xiàn)的。
【作者單位】： 嘉興市第二醫(yī)院骨科;
【關(guān)鍵詞】： Smad 纖維化 miRNA CC
【基金】：嘉興市科技局科技計劃項目(2012AY1071-7)~~
【分類號】：R329.2
【正文快照】： cells w ith m iRN A-m im ics.T ransfected cells w ere induced by T G F-β1 for fibrosis.T he variations of fibrosisrelated proteins w ere detected by the W estern blotting and the effects of expression of exogenous Sm ad4 on theinhibition of cell fibrosi

【參考文獻】

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1 趙凱;陳姍;龔如軍;黎松;何鳳田;;GSK3β促進TGF-β1誘導的腎小管上皮HK-2細胞纖維化[J];第三軍醫(yī)大學學報;2012年19期

【共引文獻】

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1 陳f^明;李云和;侯劍輝;劉鈺君;葉博然;黃兆琦;陳盛強;黃慶暉;黃文暉;;糖原合成酶激酶-3β與轉(zhuǎn)化生長因子-β1在慢性充血性心力衰竭中的變化[J];嶺南心血管病雜志;2013年04期

【相似文獻】

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 康耀霞;徐衛(wèi)和;王文瑞;譚雪梅;張義正;;辛伐他汀對C2C12細胞中utrophin基因表達的影響[A];中國遺傳學會第八次代表大會暨學術(shù)討論會論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

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本文編號：413142