本文關(guān)鍵詞：miRNA138體外抑制C2C12細(xì)胞纖維化研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)誘導(dǎo)小鼠成肌細(xì)胞C2C12建立體外纖維化模型,觀察miRNA138含量改變對(duì)細(xì)胞纖維化指標(biāo)的影響,分析miRNA138對(duì)細(xì)胞纖維化的影響是否通過其靶基因Smad4實(shí)現(xiàn)。方法設(shè)計(jì)并合成miRNA138-mimics、miRNA138-inhibitor、miRNA138-NC,經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至C2C12細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后細(xì)胞再經(jīng)TGF-β1(10 ng/m L)誘導(dǎo)48 h;Real-time PCR檢測胞內(nèi)miRNA138表達(dá),Western blotting檢測胞內(nèi)纖維化相關(guān)蛋白Smad4、vimentin、α-SMA及collagenⅠ表達(dá)變化,確認(rèn)纖維化模型是否成功建立并分析胞內(nèi)miRNA138表達(dá)改變對(duì)細(xì)胞纖維化指標(biāo)的影響;CCK-8法檢測miRNA138表達(dá)改變對(duì)纖維化過程中C2C12細(xì)胞增殖活性的影響;生物信息學(xué)分析miRNA138與Smad4理論結(jié)合位點(diǎn)并通過熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)進(jìn)行驗(yàn)證;構(gòu)建Smad4基因表達(dá)載體,并與miRNA138-mimics共轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后細(xì)胞再經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)發(fā)生纖維化,Western blotting檢測細(xì)胞纖維化相關(guān)蛋白變化,分析外源Smad4表達(dá)對(duì)于miRNA138抑制細(xì)胞纖維化作用的影響。結(jié)果 miRNA138-mimics轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)miRNA138表達(dá)明顯上升;miRNA138-inhibitor轉(zhuǎn)染后,C2C12細(xì)胞內(nèi)miRNA138表達(dá)下降;轉(zhuǎn)染對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)miRNA138表達(dá)無明顯變化;蛋白檢測結(jié)果顯示:TGF-β1誘導(dǎo)C2C12細(xì)胞48 h,胞內(nèi)Smad4、vimentin、α-SMA和collagenⅠ蛋白表達(dá)均明顯升高,細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期增殖活性明顯增強(qiáng),表明細(xì)胞纖維化模型成功建立;細(xì)胞內(nèi)miRNA138過表達(dá)明顯抑制了C2C12細(xì)胞纖維化;熒光素酶活性檢測數(shù)據(jù)顯示,miRNA138與Smad4的預(yù)測靶位是客觀存在的;在C2C12細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)外源Smad4基因,可明顯減弱miRNA138-mimics對(duì)細(xì)胞纖維化相關(guān)蛋白的抑制作用。結(jié)論 miRNA138可以抑制TGF-β1誘導(dǎo)的C2C12細(xì)胞纖維化,是通過抑制其靶蛋白Smad4表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。
【作者單位】： 嘉興市第二醫(yī)院骨科;
【關(guān)鍵詞】： Smad 纖維化 miRNA CC
【基金】：嘉興市科技局科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012AY1071-7)~~
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： cells w ith m iRN A-m im ics.T ransfected cells w ere induced by T G F-β1 for fibrosis.T he variations of fibrosisrelated proteins w ere detected by the W estern blotting and the effects of expression of exogenous Sm ad4 on theinhibition of cell fibrosi

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙凱;陳姍;龔如軍;黎松;何鳳田;;GSK3β促進(jìn)TGF-β1誘導(dǎo)的腎小管上皮HK-2細(xì)胞纖維化[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年19期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳f^明;李云和;侯劍輝;劉鈺君;葉博然;黃兆琦;陳盛強(qiáng);黃慶暉;黃文暉;;糖原合成酶激酶-3β與轉(zhuǎn)化生長因子-β1在慢性充血性心力衰竭中的變化[J];嶺南心血管病雜志;2013年04期

【相似文獻(xiàn)】

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 康耀霞;徐衛(wèi)和;王文瑞;譚雪梅;張義正;;辛伐他汀對(duì)C2C12細(xì)胞中utrophin基因表達(dá)的影響[A];中國遺傳學(xué)會(huì)第八次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

  本文關(guān)鍵詞：miRNA138體外抑制C2C12細(xì)胞纖維化研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：413142