本文關(guān)鍵詞：兔脂肪干細(xì)胞與軟骨細(xì)胞體外共培養(yǎng)最適誘導(dǎo)配比的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康模航④浌羌?xì)胞（ACs）和脂肪干細(xì)胞(ADSCs)間接共培養(yǎng)體系，通過(guò)定量分析誘導(dǎo)后ADSCs成軟骨分化相關(guān)基因（Col2a1，ACAN, Sox-9）及老化相關(guān)基因(Col10a1，Runx-2)的表達(dá)水平，研究該體系中兩類(lèi)細(xì)胞的比例變化對(duì)誘導(dǎo)結(jié)果的影響，進(jìn)而探究軟骨組織工程中共培養(yǎng)模式的誘導(dǎo)機(jī)制，從而為今后構(gòu)建組織工程軟骨的方法改進(jìn)提供線(xiàn)索； 實(shí)驗(yàn)方法：本實(shí)驗(yàn)采用間接共培養(yǎng)模式，在Transwell孔板中依據(jù)ACs-ADSCs構(gòu)成比的逐級(jí)增加設(shè)置6個(gè)共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)組，即組A（0.5：1），組B（1：1），組C（2：1），組D（3：1），組E（5：1），組F（7：1）；另設(shè)3個(gè)對(duì)照組，即ADSCs陰性對(duì)照組、 ADSCs生長(zhǎng)因子（TGFβ+BMP6）誘導(dǎo)對(duì)照組以及ACs陽(yáng)性對(duì)照組。除ADSCs生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)對(duì)照組外，其余各組均在不含生長(zhǎng)因子及血清的不完全軟骨誘導(dǎo)液中進(jìn)行誘導(dǎo)，培養(yǎng)周期為28天。培養(yǎng)結(jié)束后收集ADSCs微球進(jìn)行時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)，分析誘導(dǎo)后ADSCs成軟骨分化相關(guān)基因（Col2a1，ACAN, Sox-9）及老化相關(guān)基因(Col10a1，Runx-2)的表達(dá)情況； 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：共培養(yǎng)各組的Col2a1和ACAN基因表達(dá)水平均出現(xiàn)不同程度的上調(diào)，且在A(yíng)Cs-ADSCs比到達(dá)5：1之前，有隨體系中ACs比例增加而上調(diào)的趨勢(shì)。Col2a1在組E（5：1）和組F（7：1）中的表達(dá)水平顯著高于其余共培養(yǎng)組（P0.01），而E，，F(xiàn)兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；ACAN在組E（5：1）中的表達(dá)水平達(dá)到最高，且顯著高于組F（7：1）和組D（3：1），P0.05；與Col2a1和ACAN不同，Sox-9在各個(gè)共培養(yǎng)組均有和緩上調(diào)且在組D（3：1）中顯著高于陰性對(duì)照組（P0.05）。另外值得注意的是，與生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)組不同，共培養(yǎng)各組成軟骨相關(guān)基因的陽(yáng)性表達(dá)并沒(méi)有伴隨老化相關(guān)基因的顯著表達(dá)。具體來(lái)講，Col10a1在共培養(yǎng)各組中的表達(dá)水平僅存在輕微上調(diào)且與基線(xiàn)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而在生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)組中該基因的表達(dá)水平則顯著高于基線(xiàn)水平（P0.001）,達(dá)到組C的85倍；與Col10a1相似，Runx-2在生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)組中的表達(dá)高于所有共培養(yǎng)組，且與共培養(yǎng)組A,B,C及E存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.01）； 結(jié)論：間接共培養(yǎng)可以在不添加外源性生長(zhǎng)因子的條件下，通過(guò)細(xì)胞分泌可溶性因子的形式將ADSCs向軟骨組織誘導(dǎo)，與此同時(shí)顯著抑制老化相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)。然而，為了獲得這種較為理想的誘導(dǎo)結(jié)果，該體系所需的ACs比例較同條件下直接共培養(yǎng)體系高，所以我們認(rèn)為在共培養(yǎng)體系中，釋放于誘導(dǎo)環(huán)境中的可溶性因子雖然發(fā)揮誘導(dǎo)作用，但卻不能取代直接共培養(yǎng)體系中細(xì)胞-細(xì)胞以及細(xì)胞-ECM間的相互作用。
【關(guān)鍵詞】：兔脂肪干細(xì)胞 軟骨細(xì)胞 組織工程軟骨 間接共培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R329
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 第1章 引言11-16
• 1.1 骨關(guān)節(jié)炎的治療現(xiàn)狀11-12
• 1.2 成體 MSCs 簡(jiǎn)介12-13
• 1.3 脂肪干細(xì)胞在組織工程軟骨中的應(yīng)用13-14
• 1.4 共培養(yǎng)誘導(dǎo)體系的應(yīng)用14
• 1.5 本實(shí)驗(yàn)的研究目的14-16
• 第2章 正文16-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16
• 2.1.2 主要儀器與設(shè)備16-17
• 2.1.3 主要試劑17-18
• 2.1.4 主要試劑配制18
• 2.2 試驗(yàn)方法18-23
• 2.2.1 兔膝關(guān)節(jié) ACs 的分離，提取和培養(yǎng)18-20
• 2.2.2 兔膝腎周脂肪干細(xì)胞的分離，提取和培養(yǎng)20
• 2.2.3 兔脂肪干細(xì)胞多能分化性的鑒定20-21
• 2.2.4 ADSCs 和 ACs 共培養(yǎng)21
• 2.2.5 Transwell 共培養(yǎng)體系21-22
• 2.2.6 在 Transwell 共培養(yǎng)體系中誘導(dǎo) ADSCs 微球向軟骨組織分1222
• 2.2.7 實(shí)時(shí)定量 RT-PCR22-23
• 2.2.8 數(shù)據(jù)處理23
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-29
• 2.3.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀(guān)察23-24
• 2.3.2 ADSCs 多向分化性的驗(yàn)證24
• 2.3.3 共培養(yǎng) 28 天后形態(tài)學(xué)結(jié)果24
• 2.3.4 實(shí)時(shí)定量 RT-PCR24-29
• 2.4 討論29
• 第3章 結(jié)論29-30
• 附圖30-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 作者簡(jiǎn)介35-36
• 致謝36-37

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 Brian E. Grottkau;Xingmei Yang;Liang Zhang;Ling Ye;Yunfeng Lin;;Comparison of Effects of Mechanical Stretching on Osteogenic Potential of ASCs and BMSCs[J];Bone Research;2013年03期

2 劉真真;李海洋;鄧彥飛;喬樹(shù)葉;朱鵬;楊素芳;石德順;;家畜脂肪干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2014年01期

3 黃俏瑩;胡艷玲;蘇素勤;龐鳳;鄭立;;不同支架材料培養(yǎng)前列腺癌PC3細(xì)胞的比較[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年01期

4 康健;侯洋;周許輝;楊立利;陳華江;唐先業(yè);袁文;;全骨髓貼壁法獲取組織工程髓核種子細(xì)胞的相關(guān)研究[J];生物骨科材料與臨床研究;2014年01期

5 劉少鵬;俞小芳;鐘一紅;郭佳;丁小強(qiáng);;脂肪干細(xì)胞(ASCs)在急性腎損傷(AKI)動(dòng)物模型治療中的作用研究進(jìn)展[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年03期

6 陳亮;何少茹;莊建;鄭曼利;孫云霞;梁穗新;劉玉梅;孫新;陳曉博;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞的分化[J];中國(guó)組織工程研究;2013年27期

7 趙佳佳;胡麗;劉加榮;宮妮雅;陳莉莉;;脂肪干細(xì)胞來(lái)源的生長(zhǎng)因子與口腔黏膜成纖維細(xì)胞增殖[J];中國(guó)組織工程研究;2013年32期

8 孫安科;李萬(wàn)同;劉松波;張賀;孫偉;陳偉;史春海;唐維維;;聚羥基烷酸酯聚合物負(fù)載軟骨細(xì)胞修復(fù)同種異體喉軟骨缺損[J];中國(guó)組織工程研究;2013年41期

9 劉奕;謝林;;組織工程技術(shù)修復(fù)損傷關(guān)節(jié)軟骨的研究與應(yīng)用[J];中國(guó)組織工程研究;2013年41期

10 梁敏烈;謝良地;李宏亮;鄭蘇梨;王華軍;;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞延遲干預(yù)對(duì)野百合堿誘發(fā)的肺動(dòng)脈高壓大鼠肺小動(dòng)脈功能的影響[J];中華高血壓雜志;2013年09期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王魏;聚L-谷氨酸/殼聚糖材料在脂肪組織工程以及膽管癌三維培養(yǎng)模型中應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2013年

2 王慶;聯(lián)合基因轉(zhuǎn)染大鼠脂肪來(lái)源干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

3 吳小程;CBD-PTHrP膠原靶向結(jié)合和促BM-MSCs軟骨形成的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

4 轉(zhuǎn)黎;PDE5-siRNA和iNOS基因修飾的脂肪干細(xì)胞在勃起功能障礙治療中的體外研究[D];華中科技大學(xué);2013年

5 左偉;脂聯(lián)素對(duì)骨關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞及軟骨干細(xì)胞作用的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

6 李娜;NF-кB信號(hào)通路在間充質(zhì)干細(xì)胞調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞治療燒傷膿毒癥的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

7 楊志高;脂肪干細(xì)胞聯(lián)合TGF-β3負(fù)載的PLGA支架修復(fù)軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];浙江大學(xué);2013年

8 張雪琴;細(xì)胞治療生長(zhǎng)板損傷的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

9 劉歐勝;異體牙周膜干細(xì)胞移植與機(jī)體體液（B細(xì)胞）免疫應(yīng)答研究[D];中南大學(xué);2012年

10 康健;TGF-β3和BMP-7基因共轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程髓核的相關(guān)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐飛岳;基于海藻酸凝膠微球的動(dòng)態(tài)培養(yǎng)體系的建立及其應(yīng)用于軟骨組織工程的研究[D];華東理工大學(xué);2013年

2 徐揚(yáng)陽(yáng);重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)脂肪干細(xì)胞分化的影響[D];鄭州大學(xué);2013年

3 魏波;BMSCs來(lái)源細(xì)胞外基質(zhì)支架對(duì)微骨折骨髓刺激術(shù)后血凝塊體外軟骨化分化的作用研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

4 惠學(xué)玲;人羊膜治療家兔皮膚Ⅲ度燒傷的作用與抗炎機(jī)制研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2013年

5 劉星;菟絲子含藥血清對(duì)大鼠胚胎肢芽發(fā)育的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2013年

6 趙金;人脂肪干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為角膜內(nèi)皮樣細(xì)胞的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

7 徐巧瑜;不同代次角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚的比較研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

8 羅二梅;共培養(yǎng)對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化的影響[D];暨南大學(xué);2013年

9 楊濤;兔異體脂肪干細(xì)胞增強(qiáng)脂肪移植效果的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

10 李建忠;兔組織工程氣管支架的制備及再血管化研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：兔脂肪干細(xì)胞與軟骨細(xì)胞體外共培養(yǎng)最適誘導(dǎo)配比的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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