本文關(guān)鍵詞：柯薩奇病毒A組16型分離鑒定及感染C57乳鼠致病模型的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：手足口�。℉and-foot-mouthDisease,HFMD）是嬰幼兒時(shí)期常見的傳染病，，以發(fā)熱和手足口部出現(xiàn)皰疹為主要特征，輕者可以自愈，重者可合并腦炎、無菌性腦膜炎、肺水腫等，甚至死亡。1957年首例HFMD在多倫多被報(bào)道，第2年從HFMD患兒標(biāo)本中分離出CVA16病毒，1972年，美國(guó)加利福尼亞州爆發(fā)的HFMD疫情，分離出了EV71病毒。自此以來，世界范圍內(nèi)每年都會(huì)發(fā)生該病的流行，常以大范圍散發(fā)、局部爆發(fā)的形式存在，發(fā)病率和死亡人數(shù)逐年攀升。我國(guó)1981年自上海首次發(fā)現(xiàn)HFMD病例[1,2]，HFMD在全國(guó)范圍內(nèi)迅速蔓延，其中天津于1983年、1986年兩次發(fā)生HFMD爆發(fā)流行，1998年中國(guó)臺(tái)灣省爆發(fā)的HFMD共監(jiān)測(cè)到129106病例，死亡78例，2011年全國(guó)累計(jì)報(bào)告手足口病病例1496048例，其中重癥17775例，死亡467人。據(jù)統(tǒng)計(jì)每隔2～3年就有一次大流行，每年的感染病例在100萬以上[3]。2008年5月2日衛(wèi)生部將HFMD納入丙類法定傳染病[4]，HFMD已成為危害我國(guó)社會(huì)安全的重大公共衛(wèi)生問題。 引起HFMD的病原體有20多種，CVA16和EV71是主要的病原體。EV71感染常常并發(fā)病毒性腦膜炎、腦炎、肺水腫、肺出血等嚴(yán)重并發(fā)癥，可導(dǎo)致嬰幼兒的快速死亡，故對(duì)于EV71的相關(guān)報(bào)道較多。且據(jù)往年的資料顯示，EV71在中國(guó)大部分地區(qū)的重癥發(fā)病率大于CVA16。因此，中國(guó)對(duì)于HFMD的研究主要集中于EV71，包括藥物及疫苗的研究。相對(duì)EV71而言，CVA16所致的HFMD癥狀較溫和，且較少發(fā)生并發(fā)癥，在以往的研究中常作為HFMD的輔助檢測(cè)項(xiàng)目。但近年有報(bào)道，CVA16可能與心肌炎、難治性休克等致死性并發(fā)癥相關(guān)。在中國(guó)近年的HFMD流行中，CVA16的發(fā)病率有升高的趨勢(shì)，在某些地區(qū)甚至超過EV71成為優(yōu)勢(shì)血清型。從發(fā)病時(shí)間和地區(qū)來看，形成CVA16和EV71交替或混合共流行的局面。且在臨床中二者的感染不易區(qū)分。因此，加強(qiáng)對(duì)我國(guó)不同地區(qū)CVA16的病毒分離鑒定、致病機(jī)制及疫苗研究對(duì)防控HFMD具有重要意義。 目的分離鑒定我國(guó)不同地區(qū)引起HFMD流行的柯薩奇病毒A組16型(CoxsackievirusA16,CVA16)病毒株，建立流行株感染乳鼠動(dòng)物模型，為深入探索CVA16病毒致病機(jī)制，以加速預(yù)防疫苗研制、藥物篩選進(jìn)程奠定基礎(chǔ)。 方法（1）從我國(guó)北京、天津、山東、福建等地收集147份HFMD臨床樣本，用Vero細(xì)胞分離病毒，并進(jìn)行RT-PCR鑒定，對(duì)CVA16的基因及毒力特點(diǎn)做出分析；（2）將CVA16分離株經(jīng)過蝕斑純化、乳鼠適應(yīng)后，獲得一株能致死11日齡C57乳鼠的CVA16毒株，命名為TS10/08（GenBankJX068829）。隨后將TS10/08感染11日齡C57乳鼠，觀察并記錄感染乳鼠體重變化、臨床得分及死亡率變化，并通過實(shí)時(shí)定量RT-PCR測(cè)定腦、骨骼肌、肺、心肌的病毒載量，檢測(cè)組織病理、炎癥分子變化，建立CVA16感染乳鼠模型。 結(jié)果（1）從我國(guó)不同地區(qū)來源的147份HFMD臨床樣本中，成功分離出16株CVA16、20株EV71、5株CVA16和EV71混合感染株，測(cè)定CVA16滴度是10-5～10-9，進(jìn)一步測(cè)定7株CVA16的全基因組序列，并提交至GenBank，基于VP1核苷酸序列構(gòu)建進(jìn)化樹，結(jié)果顯示全部分離株都屬于C1亞型，均為我國(guó)主要流行株；（2）將TS10/08CVA16病毒株腹腔注射感染1～14日齡C57乳鼠，結(jié)果顯示，該TS10/08CVA16病毒株可致死11日齡內(nèi)C57乳鼠，測(cè)定病毒毒力為50LD50/mL。對(duì)TS10/08CVA16感染乳鼠測(cè)定病毒載量，顯示感染后骨骼肌中病毒載量持續(xù)高于心肌、肺、腦中，而心肌、肺、腦中病毒載量差別不大。6天發(fā)病高峰時(shí)做病理檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)骨骼肌、心肌、腦、肺中都有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，但骨骼肌中最為嚴(yán)重，且CVA16病毒感染期間MCP-1，MIP-1alpha，CSF3和MIP-1beta炎性分子顯著升高，推測(cè)炎性分子在CVA16感染HFMD中發(fā)揮著重要作用。 結(jié)論從147份HFMD臨床樣本中分離得到了16株CVA16流行病毒株，并完成了7株全基因組序列測(cè)定和13株VP1序列測(cè)定，闡明了CVA16基因的特征；篩選出一株乳鼠適應(yīng)株TS10/08，建立了CVA16感染乳鼠模型，為進(jìn)一步深入闡明免疫致病機(jī)制、研發(fā)預(yù)防疫苗和治療藥物奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：手足口病 CVA16 C57乳鼠 感染模型
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R373.23;R-332
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-9
• 中英文縮略詞表9-11
• 前言11-16
• 第一章 CVA16的分離鑒定16-36
• 材料與方法16-25
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-34
• 討論34-35
• 小結(jié)35-36
• 第二章 CVA16感染C57乳鼠致病模型的研究36-56
• 材料和方法36-49
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-54
• 討論54-55
• 小結(jié)55-56
• 總結(jié)56-57
• 附件57-61
• 參考文獻(xiàn)61-67
• 綜述67-78
• 參考文獻(xiàn)74-78
• 致謝78-79
• 攻讀碩士研究生期間發(fā)表的文章79-80
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷80

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 曲梅;李潔;賈蕾;檀曉娟;高志勇;嚴(yán)寒秋;郭婧;李錫太;黎新宇;王全意;許文波;黃芳;;北京市2009年手足口病的病原構(gòu)成及柯薩奇A組16型病毒基因特征分析[J];病毒學(xué)報(bào);2010年06期

2 楊文升;;104例兒童重癥手足口病的臨床特征分析[J];重慶醫(yī)學(xué);2011年17期

3 賈蕾;趙成松;張莉;李爽;張代濤;劉白薇;王全意;黎新宇;;腸道病毒71型和柯薩奇病毒A組16型感染的手足口病患兒的相關(guān)特征對(duì)比研究[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2011年08期

4 何家鑫;王碧錦;;福建省手足口病病原分離初步結(jié)果[J];福建醫(yī)藥雜志;1984年03期

5 任旭芝;;腸道病毒71型感染流行(該感染被列為丙類傳染病)[J];中國(guó)感染控制雜志;2008年03期

6 呂元聰;;手足口病研究新進(jìn)展[J];應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2008年03期

7 武珊;王文瑞;海巖;;柯薩奇病毒A組16型研究進(jìn)展[J];疾病監(jiān)測(cè)與控制;2011年08期

8 程獻(xiàn);徐詠書;;手足口病EV71的實(shí)驗(yàn)室診斷[J];實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2008年03期

9 李忠;張華寧;裴耀文;劉倜;王宇路;劉靜;;不同分子生物學(xué)方法檢測(cè)手足口病標(biāo)本的應(yīng)用研究[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2009年04期

10 董曉楠;應(yīng)劍;陳應(yīng)華;;1970～2004年全球腸道病毒71型分離株的分子流行病學(xué)分析[J];科學(xué)通報(bào);2007年09期

  本文關(guān)鍵詞：柯薩奇病毒A組16型分離鑒定及感染C57乳鼠致病模型的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：407147