本文關鍵詞：烏拉坦誘導小鼠肺癌模型的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肺癌是嚴重威脅人類生命健康的惡性腫瘤，近年來發(fā)病率及死亡率逐年上升。肺癌動物模型對肺癌的發(fā)病機理研究及治療藥物篩選非常重要，但目前常用的肺癌模型中移植性腫瘤長勢過快，與臨床腫瘤差異很大；自發(fā)性與誘導性腫瘤發(fā)病率和成瘤時間很不穩(wěn)定。因此，建立一種與臨床肺癌生物學特征相似、致瘤穩(wěn)定均一、重現(xiàn)性好、發(fā)病率高的肺癌動物模型對于研究肺癌的病因及篩選肺癌治療藥物，尤其是篩選十分有特色的肺癌治療傳統(tǒng)中藥是腫瘤領域的迫切需要。 本研究采用不同劑量烏拉坦、不同品系小鼠及不同致癌方案比較肺致癌率及平均肺結節(jié)數(shù)以確定最佳肺癌造模方法；通過生化指標檢測及病理組織分析比較烏拉坦誘導的肺癌模型與臨床人體肺癌發(fā)病的相似性；并通過寒熱2種性質的中藥對建立的肺癌模型進行佐證，提出肺癌新的發(fā)病機制，以期為臨床肺癌的治療提供新理念、新方法。 在本研究中，烏拉坦800mg/kg腹腔注射、每周兩次、連續(xù)5周的造模方式可在C57BL/6小鼠中4個月誘導出穩(wěn)定均一、致癌率100%的肺腺癌，并能克服C57BL/6小鼠對烏拉坦誘導肺癌的基因抵抗。肺癌小鼠體內生化指標檢測表明，該模型建立后荷瘤小鼠ColI、MMP-9、TIMP-1、NGF、TrkA、BDNF、TrkB、TGF-β1、bFGF、Ins、Glut-4水平均顯著升高，肺組織LN、血清TC水平顯著降低，且隨著時間的延長與正常小鼠差異越顯著。病理及免疫組化檢測表明，該模型中誘導的小鼠肺癌符合臨床中分化肺腺癌特征，表現(xiàn)為完整的腺囊結構、侵潤性較低、部分瘤細胞充滿囊腔，免疫組化TTF-1（+）、CEA（+）、P63（-）。在模型建立過程中，小鼠逐漸畏寒喜暖、蜷縮少動、尾部及耳廓血管暗紫、體溫下降、ATP酶及LDH活性降低、全血粘度及紅細胞聚集指數(shù)升高、微循環(huán)障礙等，表現(xiàn)出寒凝血瘀的中醫(yī)學體征。溫熱藥附子可減弱寒凝血瘀體征及不同程度改善肺組織中ColI、MMP-9、TIMP-1、NGF、BDNF、TGF-β1、LN異常水平，阻止腫瘤進程；寒涼藥蒲公英加重寒凝血瘀體征，有促進腫瘤進展的趨勢。 為了驗證拓展腫瘤的惡熱喜寒特性，我們用烏拉坦400μg/ml處理人正常肝L02細胞建立轉化細胞系，該轉化細胞能在軟瓊脂上形成集落，線粒體數(shù)量增多，具有腫瘤細胞的一些惡性特質。明膠電泳及western blot結果顯示轉化細胞內MMP-9及TGF-β1表達明顯多于正常細胞。另外，我們發(fā)現(xiàn)，與37℃比較，，32℃培養(yǎng)能提高烏拉坦對L02細胞的轉化率。 綜上所述，烏拉坦800mg/kg腹腔注射、每周兩次、連續(xù)5周的造模方式可建立致瘤穩(wěn)定均一、重現(xiàn)性好的小鼠肺癌模型。該模型與臨床肺腺癌有較高的一致性，并伴有寒凝血瘀中醫(yī)學體征，適合抗腫瘤中藥的篩選與評價，也有利于研究肺癌的發(fā)病原因和制定合理的中藥治療方案。
【關鍵詞】：烏拉坦 致癌劑 肺癌模型 寒凝血瘀
【學位授予單位】：河南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R734.2;R965
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-15
• 第一部分 肺癌動物模型研究現(xiàn)狀15-17
• 第二部分 肺癌模型的建立方法研究17-23
• 2.1 前言17
• 2.2 實驗材料17-18
• 2.2.1 試劑與藥品17-18
• 2.2.2 實驗動物18
• 2.3 實驗方法18-19
• 2.3.1 烏拉坦最佳造模方式18
• 2.3.2 不同品系小鼠對烏拉坦誘導肺癌的敏感性18-19
• 2.4 實驗結果19-21
• 2.4.1 不同造模方式對烏拉坦誘導小鼠肺癌的影響19-20
• 2.4.2 不同品系小鼠對烏拉坦誘導肺癌敏感性的影響20-21
• 2.5 實驗小結21-23
• 第三部分 烏拉坦誘導小鼠肺癌模型的病理及生化特征研究23-37
• 3.1 前言23
• 3.2 實驗材料23-25
• 3.2.1 試劑與藥品23-24
• 3.2.2 試劑配制24
• 3.2.3 實驗動物24
• 3.2.4 主要儀器24-25
• 3.3 實驗方法25-28
• 3.3.1 肺癌模型建立25
• 3.3.2 烏拉坦誘導肺癌的病理特征25-28
• 3.3.3 烏拉坦誘導肺癌的生化指標檢測28
• 3.4 實驗結果28-35
• 3.4.1 烏拉坦誘導肺癌的病理特征28-30
• 3.4.2 烏拉坦誘導肺癌的生化指標檢測30-35
• 3.5 實驗小結35-37
• 第四部分 烏拉坦誘導小鼠肺癌模型中醫(yī)體征與藥物佐證37-51
• 4.1 前言37-38
• 4.2 實驗材料38-39
• 4.2.1 藥品38
• 4.2.2 試劑38
• 4.2.3 試劑配制38-39
• 4.2.4 實驗動物39
• 4.2.5 主要儀器39
• 4.3 實驗方法39-42
• 4.3.1 造模及給藥39
• 4.3.2 指標檢測39-40
• 4.3.3 能量代謝的檢測40-41
• 4.3.4 外耳微循環(huán)的檢測41
• 4.3.5 血液流變學檢測41
• 4.3.6 BrdU 免疫熒光檢測41
• 4.3.7 腫瘤進展及存活分析41-42
• 4.3.8 統(tǒng)計方法42
• 4.4 實驗結果42-50
• 4.4.1 附子和蒲公英對烏拉坦誘導肺癌小鼠體溫和自主活動的影響42
• 4.4.2 附子和蒲公英對烏拉坦誘導肺癌小鼠能量代謝的影響42-43
• 4.4.3 附子和蒲公英對烏拉坦誘導肺癌過程中小鼠外耳微循環(huán)變化43-44
• 4.4.4 附子和蒲公英對烏拉坦誘導肺癌過程中小鼠血液流變學變化44-45
• 4.4.5 附子和蒲公英對烏拉坦誘導肺癌小鼠腫瘤細胞增殖的影響45-46
• 4.4.6 附子和蒲公英對烏拉坦誘導肺癌小鼠腫瘤進展變化的影響46-48
• 4.4.7 附子和蒲公英對烏拉坦誘導肺癌小鼠生化指標的影響48-50
• 4.5 實驗小結50-51
• 第五部分 烏拉坦致癌細胞機制的研究51-67
• 5.1 前言51
• 5.2 實驗材料51-56
• 5.2.1 試劑51-52
• 5.2.2 試劑配制52-55
• 5.2.3 細胞株55
• 5.2.4 儀器55-56
• 5.3 實驗方法56-61
• 5.3.1 烏拉坦對人正常肝 L02 細胞增殖的影響實驗56
• 5.3.2 烏拉坦轉化正常肝細胞實驗56-57
• 5.3.3 烏拉坦轉化細胞健那綠染色實驗57
• 5.3.4 烏拉坦轉化細胞明膠電泳57-58
• 5.3.5 烏拉坦轉化細胞 Western blot 實驗58-60
• 5.3.6 烏拉坦在不同溫度下轉化細胞的軟瓊脂克隆形成實驗60-61
• 5.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計61
• 5.4 實驗結果61-64
• 5.4.1 烏拉坦對正常肝細胞增殖的影響61
• 5.4.2 烏拉坦轉化細胞健那綠染色結果61-62
• 5.4.3 正常肝細胞和烏拉坦轉化細胞明膠電泳結果比較62
• 5.4.4 正常肝細胞和烏拉坦轉化細胞 Western blot 結果比較62-63
• 5.4.5 烏拉坦不同溫度轉化細胞的軟瓊脂克隆比較63-64
• 5.5 實驗小結64-67
• 第六部分 C57BL/6 小鼠對不同化學致癌劑誘導肺癌的敏感性67-71
• 6.1 前言67
• 6.2 實驗材料67-68
• 6.2.1 試劑與藥品67
• 6.2.2 實驗動物67-68
• 6.3 實驗方法68
• 6.4 實驗結果68-70
• 6.5 實驗小結70-71
• 第七部分 討論71-77
• 第八部分 結論77-79
• 參考文獻79-87
• 致謝87-88
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄88-89

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 尚濤;張建新;李蘭芳;;提取分離肺臟線粒體的方法研究[J];河北醫(yī)藥;2006年04期

2 李鳳和,俞光巖;細胞外基質與腫瘤轉移[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學雜志;2000年03期

3 曹雪濤;;炎癥、微環(huán)境對腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用[J];醫(yī)學研究雜志;2008年12期

4 羅波;袁靜萍;孔慶志;;P63TTF-1及CD56聯(lián)合相關免疫組化在肺癌診斷中的意義[J];西部醫(yī)學;2013年01期

  本文關鍵詞：烏拉坦誘導小鼠肺癌模型的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：405042