本文關(guān)鍵詞：Notch信號(hào)參與骨形態(tài)發(fā)生蛋白9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化及其機(jī)制的初步探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）具有定向分化和自我更新的潛能，現(xiàn)已成為骨疾病治療中的熱點(diǎn)。骨形態(tài)發(fā)生蛋白9（bone morphogeneticprotein9，BMP9）對(duì)MSCs的成骨作用強(qiáng)于家族其他成員，且對(duì)其知之甚少。Notch信號(hào)調(diào)控著細(xì)胞的增長(zhǎng)分化，并且協(xié)同BMP9誘導(dǎo)MSCs的早期成骨作用。本研究旨在明確BMP9對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過程中的影響（第一部分），系統(tǒng)研究Notch信號(hào)在BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化中的作用（第二部分）以及其調(diào)節(jié)機(jī)制的初步探討（第三部分）。 第一部分骨形態(tài)發(fā)生蛋白9對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響 目的：研究驗(yàn)證BMP9對(duì)MSCs成骨分化過程的影響。方法：利用腺病毒過表達(dá)載體（AdBMP9/AdGFP）分別處理C2C12細(xì)胞，用活性定量和細(xì)胞化學(xué)染色測(cè)定早期成骨指標(biāo)堿性磷酸酶（Alkalinephosphatase，ALP），利用茜素紅S染色、免疫組化和RT-PCR檢測(cè)方法測(cè)定晚期成骨指標(biāo)骨橋蛋白（Osteopontin，OPN）、骨鈣素（Osteocalcin，OCN）和鈣鹽沉積。通過WB方法檢測(cè)BMP9經(jīng)典信號(hào)通路BMPs-Smad和非經(jīng)典信號(hào)通路BMPs-MAPK中主要胞漿蛋白的表達(dá)。結(jié)果：AdBMP9處理細(xì)胞后，3、5、7天ALP活性以及7、14天鈣鹽沉積持續(xù)增加（P＜0.05），并與AdBMP9呈劑量依賴性；同樣，7、9、11天OPN和OCN表達(dá)量持續(xù)上調(diào)（P＜0.05）。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，BMPs經(jīng)典和非經(jīng)典通路中Smad1/5/8、P38、Erk1/2、JNK的磷酸化蛋白表達(dá)水平均有上調(diào)（P＜0.05），而總蛋白量則沒有明顯變化。結(jié)論：BMP9可以同時(shí)激活BMPs經(jīng)典和非經(jīng)典信號(hào)通路，，參與間充質(zhì)干細(xì)胞C2C12的成骨過程。 第二部分Notch信號(hào)在BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化中的作用 目的：研究明確Notch信號(hào)在BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過程中的作用。方法：通過細(xì)胞密度激活實(shí)驗(yàn)和使用Notch信號(hào)抑制劑DAPT阻斷Notch信號(hào)探討Notch信號(hào)在BMP9誘導(dǎo)MSCs成骨分化過程中的作用；用細(xì)胞化學(xué)染色和活性測(cè)定早期成骨標(biāo)志物ALP的表達(dá)；通過RT-PCR檢測(cè)晚期成骨標(biāo)志物OCN的表達(dá)情況。結(jié)果：AdBMP9處理C2C12細(xì)胞后，40%和80%細(xì)胞密度組ALP和Hey1表達(dá)量均高于20%組（P＜0.05）；而后期檢OCN和Hey1表達(dá)量與20%組相比，無(wú)明顯變化；早期檢測(cè)DAPT抑制組中ALP活性以及Hey1表達(dá)量明顯降低（P＜0.05），晚期檢測(cè)DAPT組7、9、11天OCN的表達(dá)量與BMP9組相比均有所下調(diào)（P＜0.05），而9、11天Hey1表達(dá)則無(wú)明顯變化。結(jié)論：Notch信號(hào)能促進(jìn)BMP9誘導(dǎo)的MSCs的成骨分化。 第三部分Notch信號(hào)調(diào)節(jié)骨形態(tài)發(fā)生蛋白9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化機(jī)制的初步探討 目的：初步探討Notch信號(hào)參與BMP9誘導(dǎo)MSCs成骨分化過程的作用機(jī)制。方法：使用DAPT5d后，通過檢測(cè)胞膜上BMPs信號(hào)受體、胞漿中蛋白以及轉(zhuǎn)錄子，從胞膜、胞漿、胞核三方面研究其作用機(jī)制。結(jié)果：AdBMP9處理C2C12細(xì)胞后，DAPT抑制組中ALK2受體下調(diào)，而其他受體無(wú)明顯變化；經(jīng)典通路中Smad1/5/8以及非經(jīng)典通路中Erk1/2、P38的磷酸化水平都有所降低（P＜0.05）。轉(zhuǎn)錄子Runx2、Colla-1以及BMPs靶基因Id1、Id2、Id3表達(dá)均有降低（P＜0.05）。結(jié)論：Notch信號(hào)通過影響B(tài)MPs信號(hào)經(jīng)典和非經(jīng)典信號(hào)通路，從而啟動(dòng)與成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄子（如Runx2、Colla-1等）來(lái)控制MSCs的成骨分化過程的。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 骨形態(tài)發(fā)生蛋白9 Notch信號(hào) 成骨分化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照6-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-16
• 參考文獻(xiàn)15-16
• 第一部分 骨形態(tài)發(fā)生蛋白 9 誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化影響的研究16-24
• 1 材料與方法16-18
• 2 結(jié)果18-22
• 3 討論22-24
• 第二部分 Notch 信號(hào)在骨形態(tài)發(fā)生蛋白 9 誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的作用研究24-31
• 1 材料與方法24-26
• 2 結(jié)果26-29
• 3 討論29-31
• 第三部分 Notch 信號(hào)調(diào)節(jié)骨形態(tài)發(fā)生蛋白 9 誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化機(jī)制的初步探討31-40
• 1 材料與方法31-34
• 2 結(jié)果34-37
• 3 討論37-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 全文總結(jié)43-45
• 文獻(xiàn)綜述45-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文53-54

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 王秋實(shí);楊孝勤;朱曉文;胡靜;鄒淑娟;;動(dòng)靜態(tài)不同牽張條件下大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖與分化[J];中國(guó)組織工程研究;2013年36期

2 劉偉;陳劍;宋佳;宋滇文;;兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2013年08期

3 張凱;艾文兵;柳長(zhǎng)柏;吳江鋒;;Notch信號(hào)通路與HSC活化關(guān)系的研究進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2013年33期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 齊義營(yíng);干細(xì)胞片/富含血小板血漿/磷酸鈣顆粒用于骨修復(fù)的研究[D];浙江大學(xué);2013年

2 歷志;Notch信號(hào)調(diào)控巨噬細(xì)胞參與心梗重塑的作用和分子機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 秦濤;人骨肉瘤細(xì)胞中點(diǎn)突變對(duì)NOV基因功能的影響敲低蛋白酶體亞基PSMA7抑制K562細(xì)胞增殖[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

2 李麗娜;體外長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞造血支持能力的影響[D];暨南大學(xué);2013年

3 徐夢(mèng)遙;組蛋白乙�；瘜�(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞微環(huán)境適應(yīng)性的調(diào)控作用及機(jī)制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

4 張凱;低氧環(huán)境下靜態(tài)構(gòu)建組織工程化肌腱的初步研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：Notch信號(hào)參與骨形態(tài)發(fā)生蛋白9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化及其機(jī)制的初步探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：404500