發(fā)布時間：2017-05-29 05:12

  本文關鍵詞：不同消化時間對原代心肌細胞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的原代心肌細胞培養(yǎng)是一項重要的體外實驗技術,為建造心血管疾病相關模型提供了重要的基礎保障。文中旨在通過探討不同消化時間對原代心肌細胞培養(yǎng)的影響,得到一套簡便易行并且能獲得較高成活率、純度及活性的原代心肌細胞的培養(yǎng)方法。方法采用單消化酶多次消化心肌組織,根據(jù)消化時間分為8 min組和10 min組,差速貼壁法和5-溴-2-脫氧尿苷抑制法獲得純度較高的心肌細胞。光學顯微鏡下觀察心肌細胞形態(tài),記錄鏡下不同區(qū)域心肌細胞搏動頻率測定細胞活力。用臺盼藍染色法檢測培養(yǎng)細胞的存活率,橫紋肌肌動蛋白鑒定心肌細胞。最后建立心肌細胞肥大模型,比較實驗組(血管緊張素Ⅱ)和對照組[10%FBS DMEM(H+)培養(yǎng)基]的細胞截面平均面積。結果與8 min組比較,10 min組原代心肌細胞大部分伸出偽足相互接觸交織成網(wǎng),逐漸形成細胞簇,立體感明顯,細胞搏動及收縮更為明顯而有力。分離純化后原代心肌細胞的平均存活率均90%,10 min組平均存活率顯著高于8 min組[(95.4±0.8)%vs(93.0±0.8)%,P0.05]。α-actin免疫細胞化學染色鑒定,8 min組和10 min組原代心肌細胞的陽性率均95%。血管緊張素Ⅱ作用48 h后,10 min組原代心肌細胞實驗組心房鈉尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、細胞截面平均面積較對照組表達均顯著升高[(20.8±0.7)vs(15.8±0.5),(34.77±8.43)μm2vs(14.11±4.29)μm2,P0.05],而消化時間為8 min的原心肌細胞截面平均面積和ANP值未見顯著變化。結論采用消化時間為8 min的原代心肌細胞培養(yǎng)方法具有簡便、省時、易操作等特點,最重要的是能夠獲得較高質(zhì)量的心肌細胞。
【作者單位】： 包頭醫(yī)學院研究生院;包頭醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院心內(nèi)科;
【關鍵詞】： 原代細胞培養(yǎng) 心肌細胞 消化溫度 消化酶 消化時間
【基金】：國家自然科學基金(81160033,81460068) 內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學基金(2014MS0888)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 0引言原代心肌細胞培養(yǎng)是一項重要的體外實驗技術,其為建造心血管疾病發(fā)生發(fā)展過程的模型及探討基因、蛋白質(zhì)及信號通路的變化提供重要的基礎保障。此外,在體內(nèi)心肌細胞的活動受到神經(jīng)、體液等多方因素的影響,限制對其病理變化的過程的研究。而體外培養(yǎng)的原代心肌細胞不僅具有

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本文編號：404234