本文關(guān)鍵詞：不同消化時(shí)間對(duì)原代心肌細(xì)胞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)是一項(xiàng)重要的體外實(shí)驗(yàn)技術(shù),為建造心血管疾病相關(guān)模型提供了重要的基礎(chǔ)保障。文中旨在通過(guò)探討不同消化時(shí)間對(duì)原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)的影響,得到一套簡(jiǎn)便易行并且能獲得較高成活率、純度及活性的原代心肌細(xì)胞的培養(yǎng)方法。方法采用單消化酶多次消化心肌組織,根據(jù)消化時(shí)間分為8 min組和10 min組,差速貼壁法和5-溴-2-脫氧尿苷抑制法獲得純度較高的心肌細(xì)胞。光學(xué)顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞形態(tài),記錄鏡下不同區(qū)域心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率測(cè)定細(xì)胞活力。用臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞的存活率,橫紋肌肌動(dòng)蛋白鑒定心肌細(xì)胞。最后建立心肌細(xì)胞肥大模型,比較實(shí)驗(yàn)組(血管緊張素Ⅱ)和對(duì)照組[10%FBS DMEM(H+)培養(yǎng)基]的細(xì)胞截面平均面積。結(jié)果與8 min組比較,10 min組原代心肌細(xì)胞大部分伸出偽足相互接觸交織成網(wǎng),逐漸形成細(xì)胞簇,立體感明顯,細(xì)胞搏動(dòng)及收縮更為明顯而有力。分離純化后原代心肌細(xì)胞的平均存活率均90%,10 min組平均存活率顯著高于8 min組[(95.4±0.8)%vs(93.0±0.8)%,P0.05]。α-actin免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定,8 min組和10 min組原代心肌細(xì)胞的陽(yáng)性率均95%。血管緊張素Ⅱ作用48 h后,10 min組原代心肌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組心房鈉尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、細(xì)胞截面平均面積較對(duì)照組表達(dá)均顯著升高[(20.8±0.7)vs(15.8±0.5),(34.77±8.43)μm2vs(14.11±4.29)μm2,P0.05],而消化時(shí)間為8 min的原心肌細(xì)胞截面平均面積和ANP值未見(jiàn)顯著變化。結(jié)論采用消化時(shí)間為8 min的原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)方法具有簡(jiǎn)便、省時(shí)、易操作等特點(diǎn),最重要的是能夠獲得較高質(zhì)量的心肌細(xì)胞。
【作者單位】： 包頭醫(yī)學(xué)院研究生院;包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院心內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 原代細(xì)胞培養(yǎng) 心肌細(xì)胞 消化溫度 消化酶 消化時(shí)間
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81160033,81460068) 內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金(2014MS0888)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 0引言原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)是一項(xiàng)重要的體外實(shí)驗(yàn)技術(shù),其為建造心血管疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程的模型及探討基因、蛋白質(zhì)及信號(hào)通路的變化提供重要的基礎(chǔ)保障。此外,在體內(nèi)心肌細(xì)胞的活動(dòng)受到神經(jīng)、體液等多方因素的影響,限制對(duì)其病理變化的過(guò)程的研究。而體外培養(yǎng)的原代心肌細(xì)胞不僅具有

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本文編號(hào)：404234