發(fā)布時(shí)間：2017-05-28 19:08

  本文關(guān)鍵詞：人類腸道病毒68型3A蛋白可溶區(qū)的表達(dá)及其結(jié)構(gòu)初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為了解人類腸道病毒68型3A蛋白可溶區(qū)的結(jié)構(gòu),本研究構(gòu)建了EV-D68 3A蛋白可溶區(qū)的原核表達(dá)載體,在大腸桿菌中表達(dá)、純化并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步研究。首先,采用PCR的方法擴(kuò)增EV-D68 3A(1~61)基因片段,克隆至原核表達(dá)載體pET-28a-His-SUMO中,轉(zhuǎn)化進(jìn)入BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,誘導(dǎo)表達(dá)出His-SUMO-3A(1~61)融合蛋白。經(jīng)Ni-NTA樹脂親和層析初步純化后得到大量融合蛋白,利用ULP酶酶切去除His-SUMO標(biāo)簽,通過(guò)Ni-NTA樹脂親和層析、陰離子交換層析柱、分子篩層析等方法分離標(biāo)簽并進(jìn)一步純化目的蛋白。最后通過(guò)化學(xué)交聯(lián)反應(yīng)檢測(cè)目的蛋白的多聚化狀態(tài)。結(jié)果顯示,利用pET28a-His-SUMO-3A(1~61)原核表達(dá)載體能夠在大腸桿菌中成功表達(dá)出大量可溶性的融合蛋白;經(jīng)過(guò)多步純化方法得到了大量高純度的目的蛋白,平均每升大腸桿菌可得到約5mg目的蛋白,純度達(dá)95%以上;通過(guò)化學(xué)交聯(lián)反應(yīng)證明了該蛋白的多聚化存在形式。本研究成功建立了EV-D68 3A蛋白可溶區(qū)的表達(dá)和純化系統(tǒng),為進(jìn)一步獲得3A蛋白晶體、研究3A蛋白功能以及設(shè)計(jì)以3A為靶點(diǎn)的抗病毒藥物奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 天津大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 腸道病毒型 非結(jié)構(gòu)蛋白 A蛋白 蛋白表達(dá)與純化 交聯(lián)反應(yīng)
【基金】：國(guó)家科技重大專項(xiàng)資助項(xiàng)目2013ZX10001-005
【分類號(hào)】：R373.2
【正文快照】： 腸道病毒68型(Enterovirus 68,EV-D68)自1962年首次被發(fā)現(xiàn)[1]以后僅引起過(guò)較為罕見的病例。然而,2000年以后出現(xiàn)了增加的趨勢(shì),到2014年全球多個(gè)國(guó)家如美國(guó)、加拿大、中國(guó)等地出現(xiàn)了腸道病毒68型的暴發(fā)性感染,引起了人們對(duì)這一病毒的關(guān)注[2-9]。EV-D68屬于小RNA病毒科,腸道病毒

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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1 陸儉;李萍;馬亞茹;李剛;陳勇;蔣琳;;惡性瘧原蟲環(huán)子孢子蛋白四肽重復(fù)序列單克隆抗體的制備[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2015年10期

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【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 葉予;;研究獲得腸道病毒71型精確結(jié)構(gòu)[J];前沿科學(xué);2013年01期

2 陳姝蒙;丁崢嶸;趙智嫻;羅梅;田炳均;湯晶晶;張杰;陸林;;云南省2012年邊境地區(qū)健康兒童腸道病毒監(jiān)測(cè)及基因特征分析[J];中國(guó)病毒病雜志;2013年03期

3 馬子行;沈美s，

本文編號(hào)：403266