鵝膏菌屬(Amanita)毒蕈原漿汁毒素根據(jù)其結(jié)構(gòu)、性質(zhì)主要分為鵝膏毒肽(amatoxins)、鬼筆毒肽(phallotoxins)和毒傘素(virotoxins)三類。這些毒肽都是環(huán)化小分子，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，具有極高的應(yīng)用與研究價值，α-amanitin是其中含量最高的有毒多肽之一。它們在真核生物mRNA合成的專一性抑制、基因的組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞定位、基因的表達(dá)與調(diào)控、細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運系統(tǒng)、細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能、腫瘤和病毒的研究等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。但是毒蕈資源有限，都是從野生子實體中分離獲得，且不易分離純化，所以現(xiàn)今的各類毒肽產(chǎn)品全部來自于歐美，價格昂貴。這大大限制了國內(nèi)科研人員對毒肽的研究和利用。 利用反相HPLC和紫外吸收光譜分析從四川三江地區(qū)采集到的鱗柄白毒鵝膏菌(Amanita virosa)。鱗柄白毒鵝膏菌子實體H₂O抽提液在以0.02mol/L醋酸銨—乙腈為流動項的梯度洗脫模式下的RP-HPLC條件下，α-amanitin出峰時間約為12.22min，比較洗脫峰與α-amanitin標(biāo)樣濃度制成標(biāo)準(zhǔn)曲線(線性回歸方程是Y=5159X+1097.4)，發(fā)現(xiàn)...

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2.4加端PCR反應(yīng)兩次加端PCR的擴(kuò)增產(chǎn)物的凝膠電泳結(jié)果顯示，在約950bp處可見一條清晰的核酸區(qū)帶，與預(yù)期結(jié)果相一致(圖1.7)。圖1.7加端PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果.Lanel:DL2000;LaneZ:第1次加端PCR的產(chǎn)物;Lane3:第2次加端PCR的產(chǎn)物2.5融合基因的構(gòu)....

加端pCR終產(chǎn)物與載體pMD18一T相連，轉(zhuǎn)化丑eoliJMlog，在含X一gal的LA平板中篩選后，提取質(zhì)粒經(jīng)Accm作用，產(chǎn)生一條約3.7bP的條帶，約比pMD18一T載體長o.95kb(圖1.8)。因pMD18一T載體上沒有Acelll識別位點，這說明該質(zhì)粒即為陽性重組子p....

圖1.8重組子pMAT一1鑒定結(jié)果Lanel:人DNA/H辦記111;LaneZ:pMD18一T自連;Lane3:pMAT一1;Lane4:PMAT一l/Aee111;Lanes:PMAT一1乙雙湯al+Ban王Hl;Lane6:DMAT一1/BalnHI十尸‘tl圖1.9重組子....

了凝血酶的識別和作用位點(圖1.10、1.多克隆位點區(qū)序列圖1.11重組子pGA達(dá)條件的研究不同受體菌中的表達(dá)比較T一l分別轉(zhuǎn)化受體菌EeoliBLZI、DH5a(pH7.0)中，于37℃，1SOrpm培養(yǎng)到導(dǎo)4小時，結(jié)果顯示重組質(zhì)粒pGAT一同，在E.coliBLZI中表達(dá)量略....

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