目的： 1.構(gòu)建帶有雌激素受體編碼區(qū)的KLF4真核表達(dá)載體,并篩選出對小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7形成穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株,觀察經(jīng)Tamoxifen誘導(dǎo)的重組載體是否可入胞核內(nèi)表達(dá)。 2.觀察KLF4基因?qū)π∈缶奘杉?xì)胞系Raw264.7細(xì)胞向破骨分化及其功能的影響,并對其機(jī)制進(jìn)行初步探討。 3.探討使用CD11b-Cre小鼠和KLF4loxp小鼠雜交后得到在破骨前體細(xì)胞及破骨細(xì)胞中特異性敲除KLF4轉(zhuǎn)基因小鼠模型的可行性,了解KLF4敲除后的破骨前體細(xì)胞對破骨分化及其功能的影響。 方法： 1.擴(kuò)增KLF4全長片段,將改良型小鼠雌激素受體(oestrogen receptor, ER)的激素鏈接區(qū)(hormone binding domain, HBD)(MOR G525R)序列與之融合后插入pCGF5-IEGZ載體中,轉(zhuǎn)染并篩選穩(wěn)定表達(dá)的RAW264.7細(xì)胞株,流式細(xì)胞儀檢測篩選的轉(zhuǎn)染效率,Q-PCR及Western blot檢測KLF4的表達(dá)；DAPI核染色觀察經(jīng)Tamoxifen誘導(dǎo)后重組載體轉(zhuǎn)運胞核中的表達(dá)情況。 2. Realtime-PCR及Western blot檢測正常RA...

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一部分
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄一
附錄二
致謝



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