1.靶向性腺病毒介導(dǎo)的腫瘤自殺基因治療的應(yīng)用 自殺基因療法是將病毒或細(xì)菌的基因引入腫瘤細(xì)胞，利用該自殺基因編碼的特異性酶將無毒性藥物轉(zhuǎn)化為對細(xì)胞有毒性的藥物，殺死腫瘤細(xì)胞，這是一種有效的腫瘤基因治療的方式。 影響自殺基因療效的最關(guān)鍵問題就是選擇一個合適的載體將自殺基因轉(zhuǎn)導(dǎo)至靶細(xì)胞。復(fù)制缺陷型腺病毒血清型5(Ad5)是目前腫瘤基因治療中應(yīng)用最多的病毒載體。雖然Ad5載體顯示了很好的基因轉(zhuǎn)移能力，但細(xì)胞表面柯薩奇病毒-腺病毒受體(coxsackie-adenovirus receptor, CAR)表達(dá)量的差異將嚴(yán)重影響病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，因?yàn)镃AR是Ad5與細(xì)胞結(jié)合的關(guān)鍵位點(diǎn)，它介導(dǎo)病毒與細(xì)胞的結(jié)合及細(xì)胞對病毒的內(nèi)吞作用。研究表明很多腫瘤細(xì)胞缺乏CAR，因此這將是以Ad5為載體的腫瘤基因治療面臨的一個重要問題。大量研究表明基因改造的方法可提高Ad5在缺乏CAR的腫瘤細(xì)胞中的病毒嗜向性，因此這也是一個有潛力的可提高腫瘤自殺基因治療的策略。 研究表明暴露在knob外表面的HI-loop是一個加入外源氨基酸序列的良好位點(diǎn)，但是Ad5全基因組約36kb，很難直接向其中加入只編碼幾十個氨基酸的堿基序列...

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

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中文摘要
Abstract
第一章 靶向性腺病毒介導(dǎo)的腫瘤自殺基因治療的應(yīng)用
    第一節(jié) 前言
        1.1 腫瘤的基因治療
        1.2 自殺基因療法
            1.2.1 自殺基因療法
            1.2.2 自殺基因系統(tǒng)
            1.2.3 雙自殺基因聯(lián)合應(yīng)用
        1.3 自殺基因治療的載體
            1.3.1 基因治療的載體
            1.3.2 腺病毒作為基因治療載體
            1.3.3 腺病毒載體的靶向性改造
        1.4. 自殺基因表達(dá)的調(diào)控
            1.4.1 腫瘤特異性啟動子
            1.4.2 端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動子(hTERT)
    第二節(jié) 論文設(shè)計(jì)
        2.1 論文思路
            2.1.1 靶向性腺病毒載體
            2.1.2 雙自殺基因聯(lián)合應(yīng)用
            2.1.3 腫瘤特異性啟動子 hTERT 調(diào)控自殺基因的表達(dá)
        2.2 論文目的
        2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.3.1 實(shí)驗(yàn)方案
            2.3.2 實(shí)驗(yàn)流程
    第三節(jié) 材料與方法
        3.1 實(shí)驗(yàn)材料
            3.1.1 細(xì)胞、質(zhì)粒、病毒和動物
            3.1.2 主要試劑及抗體
            3.1.3 主要儀器
        3.2 實(shí)驗(yàn)方法
            3.2.1 靶向性腺病毒載體平臺的構(gòu)建及鑒定
            3.2.2 重組腺病毒的包裝、擴(kuò)增、純化、定量及鑒定
        3.3 流式細(xì)胞儀檢測 CAR 及整合素αvβ3 和αvβ5
        3.4 熒光素酶活性的檢測
        3.5 靶向性雙自殺基因及其前藥在體外對腫瘤細(xì)胞生長的作用
        3.6 靶向性雙自殺基因及其前藥對于荷瘤鼠腫瘤生長的影響
        3.7 靶向性雙自殺基因及其前藥對于荷瘤裸鼠肝組織的影響
    第四節(jié) 結(jié)果與討論
        4.1 靶向性 Ad5 載體平臺的建立及靶向性腺病毒的獲得
            4.1.1 Ad5 載體平臺的建立
            4.1.2 穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建
            4.1.3 腺病毒質(zhì)粒 pAd-RGD-Luc 的構(gòu)建及鑒定
            4.1.4 重組腺病毒的 Ad-Luc 和 Ad-RGD-Luc 的獲得及鑒定
        4.2 靶向性腺病毒 AD-RGD-LUC 在 CAR-缺陷的腫瘤細(xì)胞中的作用
        4.3 攜帶雙自殺基因的靶向腺病毒在腫瘤自殺基因治療中的作用
            4.3.1 攜帶雙自殺基因的靶向腺病毒的獲得及鑒定
            4.3.2 攜帶雙自殺基因的靶向性腺病毒在體外對腫瘤生長的抑制作用
            4.3.3 攜帶雙自殺基因的靶向性腺病毒在體內(nèi)抑制腫瘤生長
            4.3.4 攜帶雙自殺基因的腺病毒對肝臟的影響
        4.4 小結(jié)
第二章 甲基硒醇前藥與 MDV3100 在去勢抵抗型前列腺癌中的聯(lián)合應(yīng)用
    第一節(jié) 背景知識
        1.1 前列腺癌
        1.1.1 前列腺癌的發(fā)病率
        1.1.2 前列腺癌的診斷
    1.2 雄激素與雄激素受體
        1.2.1 雄激素
        1.2.2 AR 的結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.3 雄激素信號通路
        1.2.4 非雄激素依賴的 AR 信號通路
        1.3 前列腺癌的激素治療
        1.4 去勢抵抗型前列腺癌(CRPC)
            1.4.1 CRPC 的發(fā)生及產(chǎn)生機(jī)制
            1.4.2 CRPC 的治療
            1.4.3 靶向 AR 信號通路的新藥
    第二節(jié) 論文設(shè)計(jì)
        2.1 論文思路
            2.1.1 MDV3100 對 CRPC 患者的治療
            2.1.2 AR-Vs 對 MDV3100 的耐藥性的產(chǎn)生
            2.1.3 甲基硒醇前藥對前列腺癌的治療作用
            2.1.4 甲基硒醇前藥與 MDV3100 聯(lián)合用藥的可能性
        2.2 論文目的
        2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.3.1 實(shí)驗(yàn)方案
            2.3.2 實(shí)驗(yàn)流程
    第三節(jié) 材料與方法
        3.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及器材
            3.1.1 細(xì)胞和質(zhì)粒
            3.1.2 主要試劑
            3.1.3 主要儀器
        3.2 實(shí)驗(yàn)方法
            3.2.1 實(shí)時定量 PCR (RT-PCR)
            3.2.2 核連綴轉(zhuǎn)錄檢測 (Nuclear Run-on)
            3.2.3 報(bào)告基因檢測
            3.2.4 細(xì)胞生長檢測
            3.2.5 藥物相互作用聯(lián)合指數(shù)
            3.2.6 裸鼠 22Rv1 腫瘤模型及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
            3.2.7 定量 ELISA 檢測血清中 PSA
            3.2.8 薄層色譜
            3.2.9 基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜 (MALDI-TOF MS)
            3.2.10 AR N-末端和 C-末端二聚作用檢測
            3.2.11 統(tǒng)計(jì)分析
    第四節(jié) 結(jié)果與討論
        4.1 MSA 對 AR-FL 和 AR-Vs 的表達(dá)及活性的作用
            4.1.1 MSA 抑制 AR 基因的轉(zhuǎn)錄
            4.1.2 MSA 抑制 AR-Vs 蛋白和 mRNA 的表達(dá)
            4.1.3 MSA 對非雄激素依賴的 AR 活性的抑制作用
        4.2 MSA 和 MDV3100 在體外的聯(lián)合作用
            4.2.1 MSA 增強(qiáng) MDV3100 對 AR 信號通路的抑制作用
            4.2.2 MSA 增強(qiáng) MDV3100 對腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用
            4.2.3 下調(diào) AR-FL 和 AR-VS 是聯(lián)合給藥抑制腫瘤細(xì)胞生長的重要作用機(jī)制
        4.3 MSC 和 MDV3100 在荷瘤裸鼠體內(nèi)的聯(lián)合作用
            4.3.1 聯(lián)合給藥抑制腫瘤細(xì)胞生長
            4.3.2 聯(lián)合給藥抑制血清中 PSA 濃度
            4.3.3 聯(lián)合給藥抑制瘤內(nèi) AR-FL 及 AR-Vs 蛋白的表達(dá)
            4.3.4 MDV3100 與 MSA 的化合反應(yīng)
        4.4 MDV3100 對 AR 二聚作用的影響
            4.4.1 MDV3100 在體內(nèi)和體外均下調(diào) AR-FL 的表達(dá)
            4.4.2 MDV3100 抑制 AR 的二聚作用
        4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡歷
致謝



本文編號：3984372