本文關鍵詞：P2X7受體拮抗劑BBG對阿爾茨海默病模型鼠海馬神經元突觸發(fā)育和認知功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的1、研究P2X7受體對可溶性寡聚體β淀粉樣蛋白42（SOAβ42）誘導的大鼠海馬神經元突觸發(fā)育的影響，包括寡聚體Aβ42處理、P2X7受體拮抗劑BBG(Brilliant BlueG)處理對神經元樹突絲的長度、密度，樹突棘的密度及樹突樹的發(fā)育情況的影響。2、研究APPPS1轉基因小鼠海馬區(qū)P2X7受體的表達相對于正常小鼠是否上調，隨著AD（Alzheimer’s disease,AD）病理過程的改變P2X7受體在小鼠海馬區(qū)表達情況的變化。3、研究P2X7受體拮抗劑BBG腹腔注射對AD小鼠學習記憶的影響。研究P2X7受體與AD的關系，為AD病理機制的研究提供實驗依據(jù)，為AD的治療尋找新的潛在的藥物靶點。 方法1、采用第1天出生的Wistar大鼠的海馬回做原代神經元培養(yǎng)。在體外培養(yǎng)第5天（day5invitro, DIV5），用定位在膜上的綠色熒光蛋白（F-GFP）和GFP標記的肌動蛋白（GFP-actin）對神經元進行共轉染，以顯示神經元樹突、軸突整個形態(tài)學細節(jié)；在DIV7和DIV14，實驗組給予神經元SO Aβ42孵育3h，干預組在給予SOAβ42孵育前對神經元給予BBG預孵育24h。通過活細胞成像方法對各試驗組DIV7神經元樹突絲的密度、長度、樹突樹的發(fā)育以及DIV14神經元樹突棘密度的情況進行成像分析。2、PCR方法對APPPS1轉基因小鼠進行鑒定；提取total RNA，反轉錄成cDNA，Real-time PCR方法檢測海馬組織P2X7受體的相對表達量。3、ICR小鼠海馬CA1區(qū)腦立體定位注射Aβ42，制作AD模型，腹腔注射BBG，新物體識別、水迷宮、強迫游泳行為學實驗檢測對學習記憶以及抑郁的影響。 結果1、SOAβ42處理對大鼠海馬神經元對樹突樹總長度、分支個數(shù)及各級分支均沒有影響；SOAβ42處理對大鼠海馬神經元樹突絲長度沒有影響，但能夠顯著降低樹突絲的密度，而BBG處理之后能夠逆轉SO Aβ42引起的樹突絲密度降低。SO Aβ42處理顯著的降低大鼠海馬神經元樹突棘的密度，SOAβ42處理之前孵育BBG24小時能夠逆轉SO Aβ42引起的樹突棘密度降低。2、P2X7受體在APPPS1轉基因鼠海馬中隨著年齡增大表達呈先上調后下調趨勢，并且和同齡小鼠比較表達無差異。3、BBG腹腔注射顯著改善小鼠的學習記憶能力，并且對緩解抑郁有一定的作用。 結論SO Aβ42處理對大鼠海馬神經元突觸發(fā)育造成損傷，，導致樹突絲、樹突棘密度的下降，P2X7拮抗劑BBG處理能夠逆轉SO Aβ42介導的突觸損傷，這可能與抑制P2X7受體的表達有關，P2X7受體的表達在AD病理過程中表現(xiàn)出峰值現(xiàn)象，P2X7受體參與了AD的病理過程。
【關鍵詞】：P2X7 β淀粉樣蛋白 海馬 阿爾茨海默病
【學位授予單位】：寧波大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R749.16;R-332
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-13
• 1 實驗材料13-17
• 1.1 質粒提取材料13
• 1.1.1 質粒提取用試劑13
• 1.1.2 質粒提取用培養(yǎng)基13
• 1.2 細胞培養(yǎng)用試劑13-14
• 1.3 分子生物學試劑14
• 1.4 藥物14
• 1.5 試劑盒14
• 1.6 常用溶液配方14-15
• 1.7 實驗動物15
• 1.8 實驗用儀器設備15-17
• 2 實驗方法17-23
• 2.1 細胞培養(yǎng)實驗方法17-19
• 2.1.1 SO Aβ_(42)的配制和檢測17
• 2.1.2 原代海馬神經元的培養(yǎng)17-18
• 2.1.3 神經元轉染18
• 2.1.4 藥物處理18-19
• 2.2 APP&PS1 轉基因鼠的鑒定19-20
• 2.2.1 DNA 提取19
• 2.2.2 PCR 反應19-20
• 2.2.3 瓊脂糖凝膠電泳20
• 2.3 RNA 提取、轉錄及 RT-PCR20-21
• 2.3.1 RNA 提取20
• 2.3.2 RNA 轉錄20
• 2.3.3 RT-PCR20-21
• 2.3.4 統(tǒng)計分析21
• 2.4 行為學實驗方法21-23
• 2.4.1 新物體識別21
• 2.4.2 強迫游泳21
• 2.4.3 水迷宮實驗21-23
• 3 實驗結果23-39
• 3.1 SO Aβ_(42)、BBG 對海馬神經元樹突樹的影響23-25
• 3.1.1 SO Aβ_(42)的鑒定23
• 3.1.2 SO Aβ_(42)、BBG 處理對神經元樹突樹長度、分支的影響23-25
• 3.2 SO Aβ_(42)、BBG 對海馬神經元樹突絲的影響25-27
• 3.2.1 SO Aβ_(42)、BBG 對海馬神經元樹突絲長度的影響25-26
• 3.2.2 SO Aβ_(42)、BBG 對海馬神經元樹突絲密度的影響26-27
• 3.3 SO Aβ_(42)、BBG 對海馬神經元樹突棘的影響27-28
• 3.4 APP&PS1 轉基因鼠鑒定結果28-29
• 3.5 P2X7 受體在 APP&PS1 轉基因鼠海馬中的表達變化29-32
• 3.5.1 P2X7 受體在 APP&PS1 轉基因鼠表達定性檢測29-30
• 3.5.2 RT-PCR 實驗的 GAPDH 和 P2X7 標準曲線30-31
• 3.5.3 P2X7 受體在 3 個時間點的表達31-32
• 3.6 新物體識別實驗結果32-33
• 3.6.1 APP&PS1 轉基因鼠新物體識別結果32-33
• 3.6.2 ICR 小鼠新物體識別結果33
• 3.7 強迫游泳實驗結果33-34
• 3.8 水迷宮實驗結果34-39
• 3.8.1 實驗過程34-35
• 3.8.2 訓練期軌跡圖35
• 3.8.3 訓練期小鼠逃避潛伏期35-36
• 3.8.4 探索期小鼠穿越目標象限的路程百分比36-37
• 3.8.5 探索期小鼠穿越原有平臺位置的次數(shù)37-39
• 4 討論39-42
• 5 結論42-43
• 參考文獻43-46
• 綜述46-57
• 參考文獻53-57
• 在學研究成果57-58
• 致謝58

【共引文獻】

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  本文關鍵詞：P2X7受體拮抗劑BBG對阿爾茨海默病模型鼠海馬神經元突觸發(fā)育和認知功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：397771