本文關(guān)鍵詞：人精子賴氨酸乙�；鞍踪|(zhì)組學研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蛋白質(zhì)的賴氨酸乙�；鳛橐环N動態(tài)的可變修飾,逐漸成為重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一。在過去的50年里,對賴氨酸乙酰化的研究主要集中在組蛋白及其在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用。而對非組蛋白乙�；难芯�,在近十多年來才開始逐漸引起人們的重視。隨著高通量蛋白質(zhì)組學技術(shù)的發(fā)展,賴氨酸乙�；谠松�、酵母、植物、崗地弓形蟲、果蠅、嚙齒類以及人類細胞等均已進行了大量研究。正因此,一大批轉(zhuǎn)錄因子、細胞骨架蛋白、代謝酶等非組蛋白均被鑒定到為(去)乙酰化底物,并且發(fā)現(xiàn)大量的乙�；墙M蛋白廣泛參與到中間代謝,調(diào)控糖酵解、三羧酸循環(huán)等多個代謝過程。然而,配子中非組蛋白賴氨酸乙�；慕M成及功能尚不得而知。 本實驗室在前期的研究工作中引進了先進的軌道阱(Orbitrap)質(zhì)譜儀,建立了比較成熟的蛋白質(zhì)組學研究平臺,并成功構(gòu)建了人精子蛋白質(zhì)譜系。在該譜系中,有大量去乙�；副昏b定到。我們通過免疫印跡及免疫熒光等方法發(fā)現(xiàn)大量賴氨酸乙酰化蛋白可能存在于獲能后的人精子中,而在生理狀態(tài)下,只有獲能后的人精子才能使卵子受孕。為能夠盡可能多的獲取獲能后人精子的賴氨酸乙�；鞍紫嚓P(guān)數(shù)據(jù),我們構(gòu)建了成熟的賴氨酸乙酰化蛋白富集平臺。我們通過用泛賴氨酸乙�；贵w親和富集乙酰化肽段并進一步用高通量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用的方法,經(jīng)過兩次生物學重復,在體外獲能后的人精子中共鑒定到了1206個賴氨酸乙�；稽c,對應于576個賴氨酸乙�；鞍�。生物信息學分析顯示這些乙酰化蛋白廣泛定位于線粒體(153個)、核質(zhì)(25個)、鞭毛(21個)、胞質(zhì)(13個)及質(zhì)膜(8個)等,并在頂體囊泡和透明帶受體復合物亦有一定程度富集,提示乙�；赡芘c精子的運動、獲能、頂體反應和精卵相互作用等多種功能相關(guān)。通過蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系網(wǎng)可發(fā)現(xiàn)多種乙�；鞍踪|(zhì)參與的復合物如呼吸鏈復合物I、ATP合成酶復合物以及蛋白酶體復合物等。用賴氨酸去乙�；敢种苿�(制滴菌素和尼克酰胺)處理精子后,發(fā)現(xiàn)精子活力下降,提示乙酰化的變化可能影響精子的運動能力。用不同濃度泛賴氨酸乙�；贵w進行小鼠體外受精抑制試驗,統(tǒng)計學分析顯示賴氨酸乙酰化抗體對體外受精率(2-細胞胚胎率)有濃度依賴性的抑制作用,這說明賴氨酸乙�；瘜τ谑芫赡苡兄匾饔�。因此,賴氨酸乙酰化可能是調(diào)控精子功能的一種重要機制。 綜上,我們構(gòu)建了獲能后人精子的賴氨酸乙�；鞍踪|(zhì)譜系,發(fā)現(xiàn)了大量跟精子運動、受精等功能相關(guān)的賴氨酸乙�；鞍�。這為以后進一步研究男性生育提供豐富的資源,同時也為研究男性不育的機制和診斷提供了可能的分子靶標。
【關(guān)鍵詞】：乙酰化蛋白質(zhì)組 獲能 人精子 賴氨酸乙�；� 蛋白質(zhì)組學
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R321.1
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 實驗材料與方法11-39
• 一.實驗材料11-19
• 二.實驗方法19-39
• 實驗結(jié)果39-57
• 一、賴氨酸乙酰化抗體制備39-40
• 二、獲能后精子的賴氨酸乙憸化蛋白的表達和定位40-43
• 三、構(gòu)建獲能后人精子賴氨酸乙憸化蛋白譜系43-45
• 四、鑒定到的賴l#酸乙�；稽c的驗證45-48
• 五、人精子賴氨酸乙憸化蛋白的注釋48-52
• 六、人精子活力評估52-55
• 七、小鼠體外受精（IVF)評估55-57
• 討論57-62
• 1.結(jié)構(gòu)蛋白58-59
• 2.能量代謝相關(guān)蛋白59
• 3.獲能相關(guān)蛋白59-60
• 4.頂體反應相關(guān)蛋白60
• 5.精卵相互作用60-62
• 參考文獻62-69
• 文獻綜述69-87
• 參考文獻80-87
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況87-88
• 致謝88

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