本文關(guān)鍵詞：人精子賴氨酸乙�；鞍踪|(zhì)組學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蛋白質(zhì)的賴氨酸乙酰化作為一種動(dòng)態(tài)的可變修飾,逐漸成為重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一。在過去的50年里,對賴氨酸乙酰化的研究主要集中在組蛋白及其在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用。而對非組蛋白乙酰化的研究,在近十多年來才開始逐漸引起人們的重視。隨著高通量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展,賴氨酸乙�；谠松铩⒔湍�、植物、崗地弓形蟲、果蠅、嚙齒類以及人類細(xì)胞等均已進(jìn)行了大量研究。正因此,一大批轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞骨架蛋白、代謝酶等非組蛋白均被鑒定到為(去)乙�；孜�,并且發(fā)現(xiàn)大量的乙酰化非組蛋白廣泛參與到中間代謝,調(diào)控糖酵解、三羧酸循環(huán)等多個(gè)代謝過程。然而,配子中非組蛋白賴氨酸乙�；慕M成及功能尚不得而知。 本實(shí)驗(yàn)室在前期的研究工作中引進(jìn)了先進(jìn)的軌道阱(Orbitrap)質(zhì)譜儀,建立了比較成熟的蛋白質(zhì)組學(xué)研究平臺,并成功構(gòu)建了人精子蛋白質(zhì)譜系。在該譜系中,有大量去乙酰化酶被鑒定到。我們通過免疫印跡及免疫熒光等方法發(fā)現(xiàn)大量賴氨酸乙酰化蛋白可能存在于獲能后的人精子中,而在生理狀態(tài)下,只有獲能后的人精子才能使卵子受孕。為能夠盡可能多的獲取獲能后人精子的賴氨酸乙酰化蛋白相關(guān)數(shù)據(jù),我們構(gòu)建了成熟的賴氨酸乙�；鞍赘患脚_。我們通過用泛賴氨酸乙�；贵w親和富集乙�；亩尾⑦M(jìn)一步用高通量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用的方法,經(jīng)過兩次生物學(xué)重復(fù),在體外獲能后的人精子中共鑒定到了1206個(gè)賴氨酸乙�；稽c(diǎn),對應(yīng)于576個(gè)賴氨酸乙酰化蛋白。生物信息學(xué)分析顯示這些乙酰化蛋白廣泛定位于線粒體(153個(gè))、核質(zhì)(25個(gè))、鞭毛(21個(gè))、胞質(zhì)(13個(gè))及質(zhì)膜(8個(gè))等,并在頂體囊泡和透明帶受體復(fù)合物亦有一定程度富集,提示乙�；赡芘c精子的運(yùn)動(dòng)、獲能、頂體反應(yīng)和精卵相互作用等多種功能相關(guān)。通過蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系網(wǎng)可發(fā)現(xiàn)多種乙�；鞍踪|(zhì)參與的復(fù)合物如呼吸鏈復(fù)合物I、ATP合成酶復(fù)合物以及蛋白酶體復(fù)合物等。用賴氨酸去乙酰化酶抑制劑(制滴菌素和尼克酰胺)處理精子后,發(fā)現(xiàn)精子活力下降,提示乙�；淖兓赡苡绊懢拥倪\(yùn)動(dòng)能力。用不同濃度泛賴氨酸乙�；贵w進(jìn)行小鼠體外受精抑制試驗(yàn),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示賴氨酸乙酰化抗體對體外受精率(2-細(xì)胞胚胎率)有濃度依賴性的抑制作用,這說明賴氨酸乙�；瘜τ谑芫赡苡兄匾饔谩Ｒ虼�,賴氨酸乙�；赡苁钦{(diào)控精子功能的一種重要機(jī)制。 綜上,我們構(gòu)建了獲能后人精子的賴氨酸乙�；鞍踪|(zhì)譜系,發(fā)現(xiàn)了大量跟精子運(yùn)動(dòng)、受精等功能相關(guān)的賴氨酸乙�；鞍住＿@為以后進(jìn)一步研究男性生育提供豐富的資源,同時(shí)也為研究男性不育的機(jī)制和診斷提供了可能的分子靶標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：乙酰化蛋白質(zhì)組 獲能 人精子 賴氨酸乙�；� 蛋白質(zhì)組學(xué)
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R321.1
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法11-39
• 一.實(shí)驗(yàn)材料11-19
• 二.實(shí)驗(yàn)方法19-39
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-57
• 一、賴氨酸乙酰化抗體制備39-40
• 二、獲能后精子的賴氨酸乙憸化蛋白的表達(dá)和定位40-43
• 三、構(gòu)建獲能后人精子賴氨酸乙憸化蛋白譜系43-45
• 四、鑒定到的賴l#酸乙酰化位點(diǎn)的驗(yàn)證45-48
• 五、人精子賴氨酸乙憸化蛋白的注釋48-52
• 六、人精子活力評估52-55
• 七、小鼠體外受精（IVF)評估55-57
• 討論57-62
• 1.結(jié)構(gòu)蛋白58-59
• 2.能量代謝相關(guān)蛋白59
• 3.獲能相關(guān)蛋白59-60
• 4.頂體反應(yīng)相關(guān)蛋白60
• 5.精卵相互作用60-62
• 參考文獻(xiàn)62-69
• 文獻(xiàn)綜述69-87
• 參考文獻(xiàn)80-87
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況87-88
• 致謝88

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  本文關(guān)鍵詞：人精子賴氨酸乙酰化蛋白質(zhì)組學(xué)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：397518