本文關(guān)鍵詞：小鼠GV期卵母細(xì)胞發(fā)育潛能評價和GDNF對牛卵母細(xì)胞體外成熟、受精和胚胎發(fā)育的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：卵母細(xì)胞作為雌性生殖細(xì)胞,為哺乳動物繁殖提供遺傳物質(zhì)基礎(chǔ),并支持著床前胚胎的發(fā)育。卵母細(xì)胞成熟質(zhì)量直接決定了早期胚胎能否正常發(fā)育。卵母細(xì)胞質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)的建立對體外胚胎發(fā)育的預(yù)測具有重要作用。在臨床上,對于有排卵障礙的病例而言,生發(fā)泡(Germinal Vesicle, GV)期卵母細(xì)胞的體外成熟、體外受精或單精注射是人類輔助生殖技術(shù)的重要組成部分,因此,篩選優(yōu)良發(fā)育潛能的GV期卵母細(xì)胞是人類輔助生殖技術(shù)成功的前提。 卵丘細(xì)胞層厚度(thickness of cumulus layers, C)、透明帶厚度(thickness of zona pellucida, Z)和帶下間隙寬度(perivitelline space,P)是卵母細(xì)胞形態(tài)學(xué)評價的三個重要參照物。然而,這三個形態(tài)學(xué)特征與GV期卵母細(xì)胞質(zhì)量之間的關(guān)系還并未被廣泛研究。本實驗以小鼠為研究對象,對卵丘細(xì)胞層厚度、透明帶厚度和帶下間隙寬度進(jìn)行分級,研究了這三個形態(tài)學(xué)特征與GV期卵母細(xì)胞質(zhì)量的關(guān)系。更進(jìn)一步,通過人為改變卵丘細(xì)胞層厚度、透明帶厚度和帶下間隙寬度,深入研究了這三個形態(tài)學(xué)指標(biāo)作為評價卵母細(xì)胞發(fā)育潛能標(biāo)準(zhǔn)的可靠性。 我們的研究結(jié)果表明：(1)帶有三層及以上卵丘(C≥50μm)的卵母細(xì)胞具有較高的成熟率、受精率和胚胎發(fā)育率,人為去除部分卵丘雖不影響卵母細(xì)胞的體外成熟率,但影響了后期的受精率和胚胎發(fā)育率。(2)透明帶厚度在5-8μm之間(5μm≤Z8μm)的卵母細(xì)胞具有較高的成熟率,透明帶厚度小于5μm(Z5μm)的卵母細(xì)胞不能夠正常成熟和受精。人為將透明帶厚度從大于或等于8μm (Z≥8μm)變薄至5-8μm(5μm≤Z8μm),雖然可以提高卵母細(xì)胞成熟率,但不能提高受精率和發(fā)育率。(3)較寬的帶下間隙(P≥5μm)有利于卵母細(xì)胞極體的排放,但不利于卵母細(xì)胞的受精和胚胎發(fā)育。帶下間隙小于1μm(P1μm)的卵母細(xì)胞不能夠成熟,即使人為擴(kuò)大帶下間隙,也不能夠改善卵母細(xì)胞的發(fā)育潛能。 我們的實驗結(jié)果證明了GV期卵母細(xì)胞的卵丘細(xì)胞層厚度、透明帶厚度和帶下間隙厚度可以作為預(yù)測卵母細(xì)胞成熟、受精和胚胎發(fā)育潛力的指標(biāo),這些結(jié)果為人類輔助生殖提供參考數(shù)據(jù),對提高人類輔助生殖成功率有重要意義。 對于大多數(shù)哺乳動物而言,繁衍后代是生命周期中除個體生存之外最重要的生命活動。后代的繁衍起始于雌性動物卵母細(xì)胞生長、成熟、受精和早期胚胎發(fā)育。對于良種家畜例如牛和羊而言,人們常采用體外受精(In Vitro Fertilization, IVF)和胚胎移植(Embryo transfer,ET)技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)繁,并且IVF-ET技術(shù)是動物轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究關(guān)鍵步驟之一。這一技術(shù)是以卵母細(xì)胞的體外成熟開始的,因此,卵母細(xì)胞成熟質(zhì)量的好壞直接影響了后代的產(chǎn)出。 卵母細(xì)胞成熟和早期胚胎發(fā)育過程中除內(nèi)源性的基因表達(dá)與調(diào)控之外,外界信號分子也是影響其能否正常發(fā)育的重要調(diào)控方式之一。這種調(diào)控最常見也是最直接的方式之一就是通過旁分泌因子來發(fā)揮作用。GDNF是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子,最早是從大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞系上清液中分離出來的。研究發(fā)現(xiàn)它對小鼠、豬卵母細(xì)胞成熟、受精和早期階段胚胎的發(fā)育起重要作用。因此,我們利用牛卵母細(xì)胞作為實驗材料,研究了GDNF對成熟、受精和胚胎發(fā)育的作用。 我們采用了免疫組化和免疫熒光方法,研究了GDNF在成熟卵泡、GV期卵母細(xì)胞、MII期卵母細(xì)胞和早期胚胎中的定位。卵母細(xì)胞成熟液和早期胚胎發(fā)育液中添加適量的GDNF因子對牛卵母細(xì)胞成熟和早期胚胎發(fā)育的影響。用特異性的siRNA干擾受體GFRA1的表達(dá)量,統(tǒng)計牛卵母細(xì)胞成熟率。 我們的結(jié)果表明,(1)牛GV期卵母細(xì)胞中未發(fā)現(xiàn)GDNF因子,只檢測到它的受體；而卵母細(xì)胞成熟的其他時期和胚胎發(fā)育的各個時期中均檢測到GDNF及它的受體信號。(2)添加適量的GDNF對卵母細(xì)胞成熟和早期胚胎發(fā)育具有促進(jìn)作用。(3)干擾GFRA1的表達(dá),導(dǎo)致牛卵母細(xì)胞成熟率顯著低于對照組。我們的實驗結(jié)果表明了GDNF促進(jìn)卵母細(xì)胞成熟、受精和早期胚胎發(fā)育。
【關(guān)鍵詞】：卵母細(xì)胞 卵丘細(xì)胞 透明帶 帶下間隙 卵母細(xì)胞成熟 胚胎發(fā)育 神經(jīng)營養(yǎng)因子 神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α1
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R321;Q492
【目錄】：

• 目錄4-5
• 第一部分 實驗研究5-74
• 第一章 小鼠GV期卵母細(xì)胞發(fā)育潛能評價5-40
• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 縮略詞表10-11
• 第一節(jié) 引言11-14
• 第二節(jié) 實驗材料14-15
• 第三節(jié) 實驗方法15-18
• 第四節(jié) 實驗結(jié)果及分析18-33
• 第五節(jié) 討論33-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 第二章 GDNF對牛卵母細(xì)胞成熟、受精和早期胚胎發(fā)育的影響40-74
• 摘要40-42
• Abstract42-45
• 縮略詞表45-46
• 第一節(jié) 引言46-48
• 第二節(jié) 實驗材料48-50
• 第三節(jié) 實驗方法50-55
• 第四節(jié) 實驗結(jié)果與分析55-67
• 第五節(jié) 討論67-71
• 參考文獻(xiàn)71-74
• 第二部分 文獻(xiàn)綜述74-92
• 第一章 篩選優(yōu)良發(fā)育前能的小鼠GV期卵母細(xì)胞的研究74-80
• 1. 人類輔助生殖技術(shù)74
• 2. GV期卵母細(xì)胞分子水平的鑒定74-75
• 3. GV期卵母細(xì)胞分子水平的鑒定75-76
• 4. 潛在的臨床意義76-78
• 參考文獻(xiàn)78-80
• 第二章 卵巢旁分泌因子GDNF對卵母細(xì)胞成熟和早期胚胎發(fā)育的研究80-92
• 1. GDNF的發(fā)現(xiàn)80
• 2. GDNF的介紹80-81
• 3. GDNF的受體81-82
• 4. GDNF對卵巢功能調(diào)節(jié)的影響研究82-85
• 5. GDNF與卵巢腫瘤發(fā)生的關(guān)系85-86
• 6. 潛在的臨床意義86-87
• 7. 未來的研究方向87-88
• 參考文獻(xiàn)88-92
• 致謝92-93
• 攻讀學(xué)位期間已發(fā)表學(xué)術(shù)論文93-94
• 附件194-97
• 附件297-100

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：397398