本文關(guān)鍵詞：豬胰島素啟動(dòng)子報(bào)告系統(tǒng)的構(gòu)建及其在胰島間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化檢測(cè)中的應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為了構(gòu)建豬胰島素啟動(dòng)子(IP)-綠色熒光蛋白(GFP)報(bào)告系統(tǒng),評(píng)價(jià)其在胰島間充質(zhì)干細(xì)胞(PIMSCs)誘導(dǎo)分化過程中的應(yīng)用價(jià)值,試驗(yàn)以胎豬胰腺組織基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增獲得IP基因片段,T載體連接測(cè)序后,構(gòu)建p EGFP-IP重組質(zhì)粒,經(jīng)PCR和雙酶切鑒定后,分別轉(zhuǎn)染原代胎豬胰腺細(xì)胞和PIMSCs,48 h后觀察熒光表達(dá)情況,轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒的PIMSCs體外誘導(dǎo)2周后,觀察綠色熒光表達(dá)情況,并進(jìn)行GFP和胰島素的Western-blot檢測(cè)。結(jié)果表明:PCR擴(kuò)增得到1條659 bp大小的基因片段,其測(cè)序結(jié)果與Gen Bank公布的IP基因序列一致。經(jīng)PCR和雙酶切鑒定,p EGFPIP重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染48 h后,部分原代胎豬胰腺細(xì)胞強(qiáng)表達(dá)綠色熒光,而PIMSCs則不表達(dá)。誘導(dǎo)2周后,部分PIMSCs表達(dá)綠色熒光,同時(shí)隨著綠色熒光的表達(dá)增強(qiáng),其胰島素表達(dá)也相應(yīng)增強(qiáng)。說明成功構(gòu)建出了豬胰島素啟動(dòng)子-綠色熒光蛋白報(bào)告系統(tǒng),該報(bào)告系統(tǒng)具有表達(dá)特異性,可用于檢測(cè)由PIMSCs誘導(dǎo)分化得到的胰島素分泌細(xì)胞。
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院;西北農(nóng)林科技大學(xué)國(guó)家干細(xì)胞研究中心陜西省分中心;寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;
【關(guān)鍵詞】： 胰島素啟動(dòng)子 胰島間充質(zhì)干細(xì)胞 豬 載體構(gòu)建 誘導(dǎo)分化
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30671067) 寧夏回族自治區(qū)衛(wèi)生廳項(xiàng)目(2012024) 寧夏醫(yī)科大學(xué)面上項(xiàng)目(XM2011008)
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： 細(xì)胞替代療法在糖尿病治療過程中呈現(xiàn)出了巨大的潛力,已有研究者通過體外誘導(dǎo)分化由干細(xì)胞得到了胰島素分泌細(xì)胞,并取得了一定的移植治療效果[1-2]。然而,該方法的應(yīng)用受到了供體細(xì)胞來源不足、細(xì)胞移植免疫排斥、體外誘導(dǎo)分化效率低以及移植后成瘤等因素的制約。由于豬的胰島

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本文編號(hào)：397193