本文關鍵詞：豬胰島素啟動子報告系統(tǒng)的構建及其在胰島間充質干細胞誘導分化檢測中的應用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為了構建豬胰島素啟動子(IP)-綠色熒光蛋白(GFP)報告系統(tǒng),評價其在胰島間充質干細胞(PIMSCs)誘導分化過程中的應用價值,試驗以胎豬胰腺組織基因組DNA為模板,PCR擴增獲得IP基因片段,T載體連接測序后,構建p EGFP-IP重組質粒,經(jīng)PCR和雙酶切鑒定后,分別轉染原代胎豬胰腺細胞和PIMSCs,48 h后觀察熒光表達情況,轉染重組質粒的PIMSCs體外誘導2周后,觀察綠色熒光表達情況,并進行GFP和胰島素的Western-blot檢測。結果表明:PCR擴增得到1條659 bp大小的基因片段,其測序結果與Gen Bank公布的IP基因序列一致。經(jīng)PCR和雙酶切鑒定,p EGFPIP重組質粒構建成功。重組質粒轉染48 h后,部分原代胎豬胰腺細胞強表達綠色熒光,而PIMSCs則不表達。誘導2周后,部分PIMSCs表達綠色熒光,同時隨著綠色熒光的表達增強,其胰島素表達也相應增強。說明成功構建出了豬胰島素啟動子-綠色熒光蛋白報告系統(tǒng),該報告系統(tǒng)具有表達特異性,可用于檢測由PIMSCs誘導分化得到的胰島素分泌細胞。
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學檢驗學院;西北農林科技大學國家干細胞研究中心陜西省分中心;寧夏醫(yī)科大學實驗動物中心;
【關鍵詞】： 胰島素啟動子 胰島間充質干細胞 豬 載體構建 誘導分化
【基金】：國家自然科學基金項目(30671067) 寧夏回族自治區(qū)衛(wèi)生廳項目(2012024) 寧夏醫(yī)科大學面上項目(XM2011008)
【分類號】：R3416
【正文快照】： 細胞替代療法在糖尿病治療過程中呈現(xiàn)出了巨大的潛力,已有研究者通過體外誘導分化由干細胞得到了胰島素分泌細胞,并取得了一定的移植治療效果[1-2]。然而,該方法的應用受到了供體細胞來源不足、細胞移植免疫排斥、體外誘導分化效率低以及移植后成瘤等因素的制約。由于豬的胰島

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  本文關鍵詞：豬胰島素啟動子報告系統(tǒng)的構建及其在胰島間充質干細胞誘導分化檢測中的應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：397193