天然免疫反應(yīng)是宿主抵御病毒感染與入侵的第一道防線,宿主細(xì)胞受到病毒感染之后,病毒的核酸、復(fù)制中間體以及一些誘導(dǎo)產(chǎn)物,被細(xì)胞內(nèi)的模式識別受體(pattern recognition receptors, PRRs)識別,誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)干擾素(interferons, IFNs)等抗病毒分子,引起抗病毒天然免疫反應(yīng),例如RNA病毒在復(fù)制過程中產(chǎn)生大量的雙鏈RNA (double-stranded RNA, dsRNA),被定位在細(xì)胞質(zhì)中的模式識別受體RIG-I (retinoic acid-inducible gene I)所識別。RIG-I招募接頭蛋白VISA (virus-induced signaling adaptor), VISA一方面能夠招募下游接頭蛋白MITA (mediator of IRF3activation),通過蛋白激酶TBK1磷酸化修飾轉(zhuǎn)錄因子IRF3, IRF3形成二聚體進(jìn)入細(xì)胞核；另一方面,VISA與TRAF6相互作用,通過IKK復(fù)合物磷酸化修飾IκBα,導(dǎo)致其泛素化降解,釋放出轉(zhuǎn)錄因子NF-κB, NF-κB轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)。進(jìn)入細(xì)胞核的IRF3和NF-κB分別...

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 研究背景
    1 抗病毒天然免疫概述
        1.1 天然免疫簡介
        1.2 I型干擾素及其相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的介紹
    2 模式識別受體對病原相關(guān)分子模式的識別機(jī)制
        2.1 Toll樣受體(Toll-like receptor,TLR)
        2.2 RIG-I樣受體(RIG-I like receptor,RLR)
        2.3 NOD樣受體
        2.4 DNA受體
    3 RLRs以及TLRs介導(dǎo)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
        3.1 RLRs介導(dǎo)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制
            3.1.1 RLRs介導(dǎo)的IRF3的激活
            3.1.2 RLRs介導(dǎo)的NF-κB的激活
        3.2 TLRs介導(dǎo)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制
            3.2.1 TLRs介導(dǎo)的IRF3的激活
            3.2.2 TLRs介導(dǎo)的NF-κB的激活
        3.3 細(xì)胞抗病毒信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的調(diào)節(jié)機(jī)制
            3.3.1 蛋白質(zhì)修飾調(diào)控
            3.3.2 信號復(fù)合物組裝以及分子相互作用調(diào)控
第二章 實驗材料與實驗方法
    1 實驗材料
        1.1 熒光素酶報告基因載體以及試劑盒
        1.2 表達(dá)克隆載體
        1.3 細(xì)胞與細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)材料
        1.4 細(xì)胞因子以及病毒
        1.5 抗體
        1.6 其它試劑或者耗材
        1.7 實驗儀器和設(shè)備
    2 實驗方法
        2.1 RNAi載體和表達(dá)克隆載體的構(gòu)建
        2.2 熒光素酶報告基因?qū)嶒?br>        2.3 免疫共沉淀以及Western Blotting實驗
        2.4 細(xì)胞核細(xì)胞質(zhì)分離
        2.5 細(xì)胞器分離
        2.6 RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄PCR實驗
        2.7 空斑實驗
        2.8 泛素化修飾實驗
        2.9 免疫熒光共聚焦顯微觀察實驗
        2.10 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
        2.11 ELISA檢測
        2.12 逆轉(zhuǎn)錄病毒建立穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系
        2.13 凝膠過濾層析實驗
第三章 GSK3β在細(xì)胞抗病毒天然免疫反應(yīng)中的調(diào)控機(jī)制研究
    1 研究背景與立項依據(jù)
    2 實驗結(jié)果
        2.1 GSK3β促進(jìn)病毒誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子IRF3的激活和IFNB1基因的轉(zhuǎn)錄
        2.2 GSK3β表達(dá)的下調(diào)抑制病毒誘導(dǎo)的IRF3激活和IFNB1基因轉(zhuǎn)錄
        2.3 Gsk3b^-/-的MEFs中病毒誘導(dǎo)的IRF3激活和IFN-β表達(dá)顯著降低
        2.4 GSK3β在TBK1水平調(diào)控病毒誘導(dǎo)的IRF3激活和IFN-β產(chǎn)生
        2.5 GSK3β促進(jìn)TBK1的寡聚化和自身磷酸化
        2.6 TBK1 S172自身磷酸化對IRF3的激活和IFN-β的表達(dá)是必需的
        2.7 GSK3β表達(dá)的下調(diào)抑制病毒誘導(dǎo)的NF-κB激活
    3 小結(jié)和討論
第四章 FoxO1負(fù)調(diào)控細(xì)胞抗病毒天然免疫的機(jī)制研究
    1 研究背景與立項依據(jù)
    2 實驗結(jié)果
        2.1 篩選調(diào)控病毒誘導(dǎo)IFN-β啟動子激活的分子
        2.2 過量表達(dá)FoxO1能夠抑制病毒誘導(dǎo)的IFN-β表達(dá)
        2.3 下調(diào)FoxO1的表達(dá)能夠促進(jìn)病毒誘導(dǎo)的IFN-β表達(dá)
        2.4 FoxO1在IRF3水平調(diào)控IFN-β的表達(dá)
        2.5 病毒感染誘導(dǎo)FoxO1與IRF3的相互作用
        2.6 FoxO1能夠介導(dǎo)IRF3的降解
        2.7 FoXO1能夠促進(jìn)IRF3 K48連接的多聚泛素化修飾
    3 小結(jié)和討論
第五章 研究總結(jié)和展望
參考文獻(xiàn)
縮略詞表
作者簡歷
讀博期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3935615