目的過表達(dá)心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子(GATA-4)的小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)分泌的外泌體(BMSCGATA-4-exosome可能是修復(fù)心肌損傷的關(guān)鍵分子,文章探討過表達(dá)GATA-4小鼠BMSC分泌外泌體(BMSCGATA-4exosome)抑制心肌細(xì)胞凋亡的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。方法在過表達(dá)GATA-4小鼠BMSC培養(yǎng)體系內(nèi)加入miR-330-3p模擬劑(miR-330-3p-mimic)提取分泌的exosome與心肌細(xì)胞在低氧無血清條件下培養(yǎng)24h作為實(shí)驗(yàn)組(過表達(dá)miR-330-3p組),將過表達(dá)GATA-4組、空載體組、BMSC組作為混雜因素對(duì)照,同時(shí)將在低氧無血清條件下單獨(dú)培養(yǎng)24h的心肌細(xì)胞及在正常條件下單獨(dú)培養(yǎng)24h的心肌細(xì)胞作為陽性及陰性對(duì)照組。采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)各組心肌細(xì)胞的凋亡率。采用RT-PCR檢測(cè)各組心肌細(xì)胞內(nèi)miR-330-3p的表達(dá)量。并根據(jù)microRNA靶基因預(yù)測(cè)結(jié)果采用Western blot檢測(cè)miR-330-3p對(duì)應(yīng)靶基因Ap2m1及Cnot4轉(zhuǎn)錄蛋白表達(dá)。結(jié)果超過90%小鼠的BMSC表達(dá)CD29(表達(dá)率為99.71%)、CD44(表達(dá)率為97.28%)...

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【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 小鼠BMSC的分離和培養(yǎng)及鑒定
        1.2.2 慢病毒載體及基因開啟技術(shù)構(gòu)建過表達(dá)GATA-4 BMSCs
        1.2.3 細(xì)胞的分組及處理
        1.2.4 采用RT-PCR方法檢測(cè)
        1.2.5 根據(jù)基因庫推測(cè)miR-330-3p的靶基因
        1.2.6 用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和West-ern blot技術(shù)檢測(cè)Ap2m1、Cnot4的表達(dá)
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 小鼠BMSCsCD29、CD44及SCA-1的表達(dá)
    2.2 各組細(xì)胞的凋亡率及心肌細(xì)胞內(nèi)miR-330-3p的表達(dá)比較
    2.3 各組心肌細(xì)胞中Ap2m1和Cnot4的表達(dá)水平
3 討論



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