目的過表達心肌細胞轉(zhuǎn)錄因子(GATA-4)的小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSC)分泌的外泌體(BMSCGATA-4-exosome可能是修復心肌損傷的關鍵分子,文章探討過表達GATA-4小鼠BMSC分泌外泌體(BMSCGATA-4exosome)抑制心肌細胞凋亡的分子調(diào)控網(wǎng)絡。方法在過表達GATA-4小鼠BMSC培養(yǎng)體系內(nèi)加入miR-330-3p模擬劑(miR-330-3p-mimic)提取分泌的exosome與心肌細胞在低氧無血清條件下培養(yǎng)24h作為實驗組(過表達miR-330-3p組),將過表達GATA-4組、空載體組、BMSC組作為混雜因素對照,同時將在低氧無血清條件下單獨培養(yǎng)24h的心肌細胞及在正常條件下單獨培養(yǎng)24h的心肌細胞作為陽性及陰性對照組。采用流式細胞技術檢測各組心肌細胞的凋亡率。采用RT-PCR檢測各組心肌細胞內(nèi)miR-330-3p的表達量。并根據(jù)microRNA靶基因預測結(jié)果采用Western blot檢測miR-330-3p對應靶基因Ap2m1及Cnot4轉(zhuǎn)錄蛋白表達。結(jié)果超過90%小鼠的BMSC表達CD29(表達率為99.71%)、CD44(表達率為97.28%)...

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【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 實驗材料
    1.2 實驗方法
        1.2.1 小鼠BMSC的分離和培養(yǎng)及鑒定
        1.2.2 慢病毒載體及基因開啟技術構建過表達GATA-4 BMSCs
        1.2.3 細胞的分組及處理
        1.2.4 采用RT-PCR方法檢測
        1.2.5 根據(jù)基因庫推測miR-330-3p的靶基因
        1.2.6 用流式細胞技術檢測細胞凋亡率和West-ern blot技術檢測Ap2m1、Cnot4的表達
    1.3 統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 小鼠BMSCsCD29、CD44及SCA-1的表達
    2.2 各組細胞的凋亡率及心肌細胞內(nèi)miR-330-3p的表達比較
    2.3 各組心肌細胞中Ap2m1和Cnot4的表達水平
3 討論



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