目的： 研究人β-防御素2促進(jìn)樹突狀細(xì)胞成熟的作用及其對(duì)乙肝疫苗免疫BALB/c小鼠免疫功能的影響。 方法： 1.用重組小鼠IL-4(10ng/mL)、GM-CSF(20ng/mL)誘導(dǎo)小鼠骨髓細(xì)分化培養(yǎng)胞6天，通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞集落形成，同時(shí)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面分子（CD11c、MHCII、CD80、CD86）。 2.用濃度分別為0ng/mL、12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的HBD2刺激培養(yǎng)BMDCs24h，通過qRT-PCR檢測(cè)IL-6、IL-12p40mRNA表達(dá)，通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)MHCII、CD11C、CD80、CD86陽性細(xì)胞百分率。 3.將小鼠隨機(jī)分2組：分別在大腿內(nèi)側(cè)肌注射PBS200uL/只和HBD2300ng/只，并分別在注射后第4h、8h、12h眼眶采血和無菌條件下摘取脾臟。ELISA檢測(cè)血清IL-12p70、IFN-γ含量，并采用qRT-PCR檢測(cè)脾組織IL-6、IL-12p40、IFN-γ mRNA表達(dá)。 4.將40只4-6周齡雌性BALB/c小鼠隨機(jī)均分為4組，前3組分別于大腿內(nèi)側(cè)肌肉注射PBS200uL、乙肝疫...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖3.1骨髓細(xì)胞不同培養(yǎng)時(shí)間生長狀態(tài)圖A第1天BMDC倒置顯微鏡觀察（×100）圖B第2天BMDC倒置顯微鏡觀察（×100）

倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)第1天可見大量圓形細(xì)胞密集生長（見圖3.1A）；第2天可見大量點(diǎn)狀細(xì)胞集落（見圖3.1B），第3天見呈簇狀生長的細(xì)胞集落（見圖3.1C）；第5天較多細(xì)胞呈半懸浮生長，并可見大量集落（見圖3.1D）；第6天可見大量細(xì)胞從集落脫離，呈懸浮生....

圖3.2培養(yǎng)第六天細(xì)胞表面分子表達(dá)情況（%）

圖3.2培養(yǎng)第六天細(xì)胞表面分子表達(dá)情況（%）3.2HBD2誘導(dǎo)BMDCs成熟的鑒定和表達(dá)細(xì)胞因子的檢測(cè)3.2.1流式細(xì)胞儀對(duì)BMDCs表面分子的檢測(cè)將培養(yǎng)第6天的BMDCs細(xì)胞用不同濃度(0ng/mL、12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL....

圖3.3不同濃度HBD2誘導(dǎo)BMDCs表面分子表達(dá)情況(%)

16圖3.3不同濃度HBD2誘導(dǎo)BMDCs表面分子表達(dá)情況(%)3.2.2HBD2對(duì)BMDCs細(xì)胞因子IL-6、IL-12p40mRNA表達(dá)影響3.2.2.1RNA純度的鑒定用紫外分光光度計(jì)分別測(cè)定各樣品RNA（1:200稀釋）的OD值，OD....

圖3.5基因Mrnade擴(kuò)增與溶解曲線

圖3.4RNA電泳結(jié)果3.2.2.3qRT-PCR測(cè)定IL-6、IL-12p40、β-actinmRNA的擴(kuò)增和溶解曲線qRT-PCR測(cè)定IL-6、IL-12p40、β-actinmRNA擴(kuò)增和溶解曲線見圖3.5。由圖可見各樣本中IL-6、IL-12p....

本文編號(hào)：3910190