目的 探討胎肝Sca-1⁺細(xì)胞橫向分化的能力、特點(diǎn)和在腎損傷修復(fù)中的作用。方法取14.5天C57BL／6j小鼠的胎肝，制成單細(xì)胞懸液；用快速PCR方法鑒定細(xì)胞的性別；收集雄性細(xì)胞，用MACS(magnetic cell sorting)技術(shù)分離雄性胎肝Sca-1⁺(Stem Cell Antigen-1)細(xì)胞；用同樣方法分離骨髓Sca-1⁺細(xì)胞；將2×10⁴的雄性胎肝Sca-1⁺細(xì)胞移植給受致死量γ照射的同系成年雌性小鼠；2～6月后取受體小鼠的腎、肝、肺、胃和小腸組織，制作3-5μm石蠟切片；用原位雜交技術(shù)追蹤Y染色體來(lái)確定細(xì)胞的來(lái)源，同時(shí)用特異性組織化學(xué)技術(shù)顯示組織特征。為了研究胎肝Sca-1⁺細(xì)胞修復(fù)能力，用甘油誘導(dǎo)小鼠急性腎功能衰竭(acute renal failure．ARF)的模型；3h后，腹膜下注射10μg／kg的G-CSF連續(xù)5天，監(jiān)測(cè)血清肌酐和尿素氮水平以及腎組織病理形態(tài)。為了消除內(nèi)源雌性干細(xì)胞的作用，用致死量射線清除小鼠體內(nèi)造血干細(xì)胞，...

【文章頁(yè)數(shù)】：121 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
前言
    研究假說(shuō)、立體依據(jù)、研究方案
    研究背景和相關(guān)領(lǐng)域的研究動(dòng)態(tài)
        一、 干細(xì)胞研究
            (一) 干細(xì)胞的特征，分類和研究意義
            (二) 傳統(tǒng)干細(xì)胞的應(yīng)用
            (三) 干細(xì)胞研究的新進(jìn)展-骨髓干細(xì)胞的橫向分化及初步應(yīng)用
        二、 胎肝干細(xì)胞(造血干細(xì)胞)的生物學(xué)特性
        三、 腎臟組織功能衰竭及其治療
第一部分 小鼠胎肝Sca-1⁺細(xì)胞的分化潛能
    一、 實(shí)驗(yàn)材料
    二、 實(shí)驗(yàn)方法
        1 胎肝細(xì)胞懸液制備
        2 快速PCR擴(kuò)增鑒定胎鼠性別
        3 MACS分離Sac-1⁺細(xì)胞
        4 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        5 臺(tái)盼藍(lán)排除法計(jì)數(shù)活細(xì)胞
        6 胎肝Sca-1⁺細(xì)胞移植
        7 胎肝Sca-1⁺細(xì)胞移植后造血重建的觀察
        8 組織取材、固定、包埋及切片
        9 堿性磷酸酶標(biāo)記免疫組織化學(xué)染色
        10 小鼠Y染色體熒光原位雜交
        11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 雄性胎肝Sca-1⁺細(xì)胞制備情況
        2 雄性胎肝Sca-1⁺細(xì)胞移植結(jié)果
        3 雄性胎肝Sca-1⁺細(xì)胞的分化
    四、 討論
    五、 第一部分圖像結(jié)果
第二部分 小鼠急性腎功能衰竭模型及G-CSF的作用
    一、 實(shí)驗(yàn)材料
    二、 實(shí)驗(yàn)方法
        1 建立小鼠急性腎功能衰竭模型
        2 G-CSF處理
        3 腎組織切片HE染色
        4 小鼠血清尿素氮含量測(cè)定-GLDH法
        5 小鼠血清肌酐含量測(cè)定-苦味酸速率法
        6 腎組織切片的觀察和統(tǒng)計(jì)處理
    三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 腎組織切片病變測(cè)定結(jié)果
        2 不同劑量甘油對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠的作用
        3 甘油注射后不同時(shí)間血清肌酐和尿素氮濃度
        4 G-CSF注射后血清肌酐和尿素氮濃度
        5 G-CSF注射后腎臟組織切片的病理變化
        6 實(shí)驗(yàn)小鼠的生存情況
    四、 討論
    五、 第二部分圖像結(jié)果
第三部分 小鼠胎肝Sca-1⁺細(xì)胞在腎功能損傷修復(fù)中的作用
    一、 實(shí)驗(yàn)材料
    二、 實(shí)驗(yàn)方法
        1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2 Y染色體FISH分析
    三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 FITC標(biāo)記Y染色體常染色質(zhì)FISH
        2 受體小鼠腎組織切片中的Y染色體陽(yáng)性細(xì)胞
        3 誘導(dǎo)組小鼠腎組織切片中的Y染色體陽(yáng)性細(xì)胞
        4 輸注組小鼠腎組織切片中的Y染色體陽(yáng)性細(xì)胞
        5 實(shí)驗(yàn)小鼠的存活情況
    四、 討論
    五、 第四部分圖像結(jié)果
第四部分 胎肝與骨髓Sca-1⁺細(xì)胞向腎組織細(xì)胞潛能的比較
    一、 實(shí)驗(yàn)材料
    二、 實(shí)驗(yàn)方法
        1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2 Y染色體FISH分析
        3 PCR擴(kuò)增分析腎組織SRY基因
    三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 ARF模型小鼠腎組織切片中的Y染色體陽(yáng)性細(xì)胞
        2 ARF模型小鼠腎組織基因組中的SRY基因
    四、 討論
結(jié)論和建議
參考資料



本文編號(hào)：3905569