目的 探討胎肝Sca-1⁺細胞橫向分化的能力、特點和在腎損傷修復中的作用。方法取14.5天C57BL／6j小鼠的胎肝，制成單細胞懸液；用快速PCR方法鑒定細胞的性別；收集雄性細胞，用MACS(magnetic cell sorting)技術分離雄性胎肝Sca-1⁺(Stem Cell Antigen-1)細胞；用同樣方法分離骨髓Sca-1⁺細胞；將2×10⁴的雄性胎肝Sca-1⁺細胞移植給受致死量γ照射的同系成年雌性小鼠；2～6月后取受體小鼠的腎、肝、肺、胃和小腸組織，制作3-5μm石蠟切片；用原位雜交技術追蹤Y染色體來確定細胞的來源，同時用特異性組織化學技術顯示組織特征。為了研究胎肝Sca-1⁺細胞修復能力，用甘油誘導小鼠急性腎功能衰竭(acute renal failure．ARF)的模型；3h后，腹膜下注射10μg／kg的G-CSF連續(xù)5天，監(jiān)測血清肌酐和尿素氮水平以及腎組織病理形態(tài)。為了消除內源雌性干細胞的作用，用致死量射線清除小鼠體內造血干細胞，...

【文章頁數】：121 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
前言
    研究假說、立體依據、研究方案
    研究背景和相關領域的研究動態(tài)
        一、 干細胞研究
            (一) 干細胞的特征，分類和研究意義
            (二) 傳統干細胞的應用
            (三) 干細胞研究的新進展-骨髓干細胞的橫向分化及初步應用
        二、 胎肝干細胞(造血干細胞)的生物學特性
        三、 腎臟組織功能衰竭及其治療
第一部分 小鼠胎肝Sca-1⁺細胞的分化潛能
    一、 實驗材料
    二、 實驗方法
        1 胎肝細胞懸液制備
        2 快速PCR擴增鑒定胎鼠性別
        3 MACS分離Sac-1⁺細胞
        4 細胞計數
        5 臺盼藍排除法計數活細胞
        6 胎肝Sca-1⁺細胞移植
        7 胎肝Sca-1⁺細胞移植后造血重建的觀察
        8 組織取材、固定、包埋及切片
        9 堿性磷酸酶標記免疫組織化學染色
        10 小鼠Y染色體熒光原位雜交
        11 統計學處理
    三、 實驗結果
        1 雄性胎肝Sca-1⁺細胞制備情況
        2 雄性胎肝Sca-1⁺細胞移植結果
        3 雄性胎肝Sca-1⁺細胞的分化
    四、 討論
    五、 第一部分圖像結果
第二部分 小鼠急性腎功能衰竭模型及G-CSF的作用
    一、 實驗材料
    二、 實驗方法
        1 建立小鼠急性腎功能衰竭模型
        2 G-CSF處理
        3 腎組織切片HE染色
        4 小鼠血清尿素氮含量測定-GLDH法
        5 小鼠血清肌酐含量測定-苦味酸速率法
        6 腎組織切片的觀察和統計處理
    三、 實驗結果
        1 腎組織切片病變測定結果
        2 不同劑量甘油對實驗小鼠的作用
        3 甘油注射后不同時間血清肌酐和尿素氮濃度
        4 G-CSF注射后血清肌酐和尿素氮濃度
        5 G-CSF注射后腎臟組織切片的病理變化
        6 實驗小鼠的生存情況
    四、 討論
    五、 第二部分圖像結果
第三部分 小鼠胎肝Sca-1⁺細胞在腎功能損傷修復中的作用
    一、 實驗材料
    二、 實驗方法
        1 動物實驗
        2 Y染色體FISH分析
    三、 實驗結果
        1 FITC標記Y染色體常染色質FISH
        2 受體小鼠腎組織切片中的Y染色體陽性細胞
        3 誘導組小鼠腎組織切片中的Y染色體陽性細胞
        4 輸注組小鼠腎組織切片中的Y染色體陽性細胞
        5 實驗小鼠的存活情況
    四、 討論
    五、 第四部分圖像結果
第四部分 胎肝與骨髓Sca-1⁺細胞向腎組織細胞潛能的比較
    一、 實驗材料
    二、 實驗方法
        1 動物實驗
        2 Y染色體FISH分析
        3 PCR擴增分析腎組織SRY基因
    三、 實驗結果
        1 ARF模型小鼠腎組織切片中的Y染色體陽性細胞
        2 ARF模型小鼠腎組織基因組中的SRY基因
    四、 討論
結論和建議
參考資料



本文編號：3905569