本文關(guān)鍵詞：定向誘導間充質(zhì)干細胞向心肌細胞方向分化過程中Nkx2.5的表達，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的以心肌組織裂解液定向誘導骨髓源性間充質(zhì)干細胞分化為心肌樣細胞,研究分化過程中Nkx2.5表達的變化規(guī)律,探討分化過程中細胞形態(tài)變化與Nkx2.5表達的關(guān)聯(lián)性及規(guī)律。 方法采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞,并用流式細胞儀對培養(yǎng)的MSCs進行鑒定,建立穩(wěn)定的間充質(zhì)干細胞系。選取第三代生長良好的間充質(zhì)干細胞,添加心肌組織裂解液,誘導骨髓源性間充質(zhì)干細胞向心肌細胞方向分化,在倒置相差顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)變化規(guī)律,利用connexin43和α-Actin免疫細胞化學染色對誘導后的心肌樣細胞進行鑒定。根據(jù)分化中細胞形態(tài)的變化規(guī)律確定5個時間點,以半定量RT-PCR檢測不同時間點Nkx2.5的表達。 結(jié)果第三代BMSCs呈紡錘形,胞漿飽滿,折光性好,流式細胞儀檢測CD34的陽性率為0.254%,CD45的陽性率為0.214%,CD90的陽性率為98.2%,CD29的陽性率為98.9%。誘導1d,細胞形態(tài)未發(fā)生明顯改變；誘導7d,細胞形態(tài)由紡錘形細胞逐漸改變?yōu)槎虠U狀,可見突起伸出,并且數(shù)量隨著誘導時間的延長不斷增多；誘導10d,桿狀細胞之間的突起相互連接成網(wǎng)織狀結(jié)構(gòu)；誘導14d,短桿狀的細胞端端相接,呈“竹節(jié)樣”改變；誘導20d,可觀察到肌管樣結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)并逐漸增多、延長。connexin43和α-Actin免疫細胞化學染色均為陽性。NKx2.5在各時間點的相對含量分別為：(1)誘導1d：0.00；(2)誘導7d：0.14±0.06；(3)誘導10d：0.28±0.04；(4)誘導14d：0.49±0.05；(5)誘導20d：0.71±0.04。 結(jié)論連續(xù)傳代擴增培養(yǎng)可得到純度較高的間充質(zhì)干細胞,可構(gòu)建穩(wěn)定的骨髓間充質(zhì)干細胞系。心肌組織裂解液可定向誘導BMSCs分化為心肌細胞,激活Nkx2.5的表達,隨著定向誘導分化時間的延長,Nkx2.5的表達水平逐漸增強。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細胞 心肌組織裂解液 定向誘導分化 Nkx2.5
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 英文縮略詞4-5
• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-11
• 1. 材料與方法11-29
• 2. 結(jié)果29-33
• 3. 討論33-45
• 4. 結(jié)論45-46
• 5. 存在的問題與展望46-47
• 附圖47-56
• 參考文獻56
• 綜述56-72
• 參考文獻68-72
• 致謝72-73
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文73
• 攻讀碩士學位期間參加的學術(shù)會議73

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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  本文關(guān)鍵詞：定向誘導間充質(zhì)干細胞向心肌細胞方向分化過程中Nkx2.5的表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：380913