目的研究慢病毒介導(dǎo)弓形蟲效應(yīng)分子ROP16_Ⅰ/Ⅲ(ToxoROP16_Ⅰ/Ⅲ)經(jīng)旁路途徑誘導(dǎo)巨噬細胞RAW264.7(Mφ)向M2型巨噬細胞偏移(M2),抑制經(jīng)典途徑激活巨噬細胞(M1)炎性因子的產(chǎn)生。方法構(gòu)建表達ROP16_Ⅰ/Ⅲ的重組慢病毒,轉(zhuǎn)染Mφ,通過激活旁路途徑向M2型細胞偏移。脂多糖(LPS)誘導(dǎo)Mφ通過經(jīng)典途徑向M1型巨噬細胞細胞偏移。M1和M2細胞進行混合培養(yǎng)。用qRT-PCR檢測TNF-α、IL-1β、TGF-β1、IL-10、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg-1)的表達。Western blot檢測ROP16_Ⅰ/Ⅲ、iNOS、Arg-1和PD-L2的蛋白表達。結(jié)果構(gòu)建ROP16_Ⅰ/Ⅲ重組慢病毒并成功穩(wěn)轉(zhuǎn)Mφ,觀察可見綠色熒光表達;Arg-1、PD-L2蛋白和TGF-β1、IL-10、Arg-1的mRNA表達升高,表明ROP16_Ⅰ/Ⅲ誘導(dǎo)了M2的偏移。LPS刺激后, qRT-PCR檢測巨噬細胞的TNF-α和IL-1βmRNA...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細胞系
        1.1.2 重組質(zhì)粒和慢病毒包裝
        1.1.3 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)
        1.2.2 重組慢病毒ROP16Ⅰ/Ⅲ穩(wěn)轉(zhuǎn)Mφ
        1.2.3 Western blot檢測
        1.2.4 qRT-PCR檢測mRNA水平的變化
    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 重組慢病毒ROP16Ⅰ/Ⅲ轉(zhuǎn)染Mφ
    2.2 LPS刺激Mφ偏移
    2.3 重組慢病毒Lv-ROP16Ⅰ/Ⅲ穩(wěn)轉(zhuǎn)Mφ偏移
    2.4 Western blot 測M1和M2混合培養(yǎng)iNOS、Arg-1和PD-L2表達
    2.5 qRT-PCR測M1和M2混合培養(yǎng)IL-1β、TNF-α和iNOS表達
3 討論



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