目的制備高滴度慢病毒載體并探討不同感染方式T細(xì)胞及其亞群的感染能力。方法使用有限稀釋的慢病毒感染HT1080細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞感染率,建立慢病毒滴度檢測(cè)方法。比較不同轉(zhuǎn)染試劑(磷酸鈣、PEI、PEI-pro、Xfect納米顆粒)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞制備的慢病毒載體滴度。使用制備的高滴度慢病毒直接感染T細(xì)胞或使用Polybrene和Retronectin促進(jìn)慢病毒感染T細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T細(xì)胞及其亞群的感染率。結(jié)果建立了流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)慢病毒滴度的方法。4種轉(zhuǎn)染方法中使用Xfect納米顆粒制備的慢病毒滴度最高。慢病毒直接感染和加入Polybrene促進(jìn)感染T細(xì)胞感染率均可達(dá)50%以上,未觀察到Polybrene明顯促進(jìn)T細(xì)胞感染作用。高滴度慢病毒對(duì)各分化階段T細(xì)胞亞群的感染率均在50%以上。結(jié)論成功制備高滴度慢病毒載體,且對(duì)T細(xì)胞各亞群感染能力無(wú)明顯差異。本研究為慢病毒感染定向分化T細(xì)胞亞群的細(xì)胞回輸治療提供了研究基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 樣本來源
    1.2 試劑
    1.3 儀器
    1.4 不同轉(zhuǎn)染試劑制備慢病毒
        1.4.1 磷酸鈣（CaPO4）沉淀法
        1.4.2 PEI轉(zhuǎn)染
        1.4.3 PEI-pro轉(zhuǎn)染
        1.4.4 Xfect納米顆粒轉(zhuǎn)染
    1.5 慢病毒滴度滴定方法
    1.6 外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離與T細(xì)胞活化
    1.7 T細(xì)胞感染方法
        1.7.1 慢病毒直接感染（Only Lentivirus)
        1.7.2 使用Polybrene促進(jìn)感染
        1.7.3 使用Retronectin促進(jìn)感染
    1.8 流式分析檢測(cè)T細(xì)胞及其亞群的感染率
    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 慢病毒滴度檢測(cè)方法的建立
    2.2 高滴度慢病毒載體的制備
    2.3 不同感染方式T細(xì)胞及其亞群感染能力的比較
3 討論



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