目的研究胸主動(dòng)脈平滑肌瞬時(shí)受體電位離子通道(TRPC)家族C1/C4/C5三個(gè)亞型與大電導(dǎo)鈣激活鉀通道(BK_Ca)蛋白相互作用差異,闡明TRPC1/C4/C5通道在激動(dòng)劑引起的胸主動(dòng)脈平滑肌收縮中的作用。方法采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染小干擾RNA(siRNA)敲低昆明小鼠胸主動(dòng)脈平滑肌組織中TRPC1、TRPC4、TRPC5蛋白表達(dá)并用免疫蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測其表達(dá)水平改變情況;通過離體血管實(shí)驗(yàn)檢測內(nèi)皮素1引起的血管收縮改變;采用免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測TRPC1/C4/C5通道蛋白與BK_Ca蛋白相互作用情況。結(jié)果瞬時(shí)轉(zhuǎn)染特異性TRPC1/C4/C5 siRNA顯著敲低昆明小鼠胸主動(dòng)脈平滑肌中TRPC1/C4/C5蛋白表達(dá);在內(nèi)皮素1引起的胸主動(dòng)脈環(huán)收縮中,TRPC1或TRPC5 siRNA處理組較對(duì)照組血管收縮顯著增強(qiáng),但TRPC4 siRNA處理組較對(duì)照組血管收縮顯著減弱;免疫共沉淀結(jié)果顯示,TRPC1可以共沉淀TRPC4、TRPC5和BK_Ca,同時(shí),TRPC4可以共沉淀TRPC1,TRPC5可以共沉淀TRPC1、BK_Ca

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 試劑與儀器
        1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 方法
        1.2.1 血管環(huán)的制備
        1.2.2 siRNA轉(zhuǎn)染
        1.2.3 離體胸主動(dòng)脈環(huán)張力實(shí)驗(yàn)
        1.2.4 免疫共沉淀
        1.2.5 Western blot
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 TRPC1/C4/C5 siRNA分別敲低其蛋白表達(dá)
    2.2 TRPC1/C4/C5 siRNA對(duì)高鉀引起的胸主動(dòng)脈收縮的影響
    2.3 TRPC1/C4/C5 siRNA對(duì)內(nèi)皮素1引起的胸主動(dòng)脈收縮的影響
    2.4 TRPC1/C4/C5與BKCa蛋白的相互作用
3 討論



本文編號(hào)：3744093