本文關(guān)鍵詞：成年豚鼠新皮質(zhì)淺層神經(jīng)球培養(yǎng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的分析成年豚鼠新皮質(zhì)淺層細(xì)胞體外增殖和分化潛能,探討新皮質(zhì)淺層存在成年神經(jīng)發(fā)生的可能性。 方法分離不同年齡段豚鼠不同部位腦組織,包括新皮質(zhì)淺層、深層以及海馬腦組織,體外懸浮培養(yǎng)、擴增及傳代,比較不同年齡、不同部位組織來源的神經(jīng)球樣細(xì)胞簇形成率的差異；用Nestin免疫熒光染色進一步檢測成年豚鼠皮質(zhì)淺層分離出的細(xì)胞是否具有神經(jīng)干/祖細(xì)胞的特性；去除生長因子后,用胎牛血清和NGF誘導(dǎo)成年豚鼠新皮質(zhì)淺層神經(jīng)干/祖細(xì)胞進行分化,通過免疫熒光染色檢測神經(jīng)元標(biāo)記物MAP-2、β-Ⅲ Tubulin和星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物GFAP的表達；并應(yīng)用膜片鉗技術(shù)對誘導(dǎo)分化后神經(jīng)元的電生理功能進行檢測。 結(jié)果所取的豚鼠腦組織細(xì)胞在體外可以形成集落樣生長的神經(jīng)球,幾乎整個神經(jīng)球均由Nestin陽性細(xì)胞組成,部分神經(jīng)球細(xì)胞共表達GFAP。誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞顯示不同比例的神經(jīng)元標(biāo)記物MAP-2、β-Ⅲ Tubulin和星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物GFAP染色陽性。膜片鉗檢測可見誘導(dǎo)分化后的神經(jīng)元具有典型的Na+-K+電流及持續(xù)的動作電位。隨著年齡增長,海馬區(qū)克隆形成率逐漸降低,皮質(zhì)區(qū)克隆形成率并沒有明顯的年齡相關(guān)性。 結(jié)論原代培養(yǎng)形成的神經(jīng)球樣細(xì)胞簇具有良好的細(xì)胞狀態(tài)和增殖能力。豚鼠海馬區(qū)細(xì)胞的克隆形成能力有隨著其年齡增長呈現(xiàn)遞減趨勢,而皮質(zhì)區(qū)克隆形成率卻沒有明顯的年齡相關(guān)性。成年豚鼠新皮質(zhì)淺層細(xì)胞能夠體外增殖,并且能夠分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞和具有生理功能的神經(jīng)元,該區(qū)可能為潛在的神經(jīng)發(fā)生區(qū)。圖9幅,表0個,參考文獻49篇。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)干/祖細(xì)胞 神經(jīng)球 細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞分化 皮質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 目錄7-9
• 符號說明9-10
• 1 前言10-11
• 2 材料與方法11-17
• 2.1 實驗動物11
• 2.2 主要試劑及設(shè)備11-12
• 2.3 主要試劑配制12-13
• 2.4 實驗方法13-17
• 2.4.1 原代神經(jīng)干/祖細(xì)胞取材及接種13
• 2.4.2 神經(jīng)干/祖細(xì)胞克隆培養(yǎng)13
• 2.4.3 計算克隆培養(yǎng)體系下不同年齡段不同部位的克隆形成率13-14
• 2.4.4 神經(jīng)干/祖細(xì)胞傳代培養(yǎng)14
• 2.4.5 神經(jīng)干/祖細(xì)胞特異性標(biāo)志物Nestin的免疫熒光細(xì)胞化學(xué)鑒定14-15
• 2.4.6 貼壁神經(jīng)球的GFAP和Nestin免疫熒光雙標(biāo)鑒定15
• 2.4.7 神經(jīng)干/祖細(xì)胞誘導(dǎo)分化及免疫熒光鑒定15-16
• 2.4.8 膜片鉗檢測細(xì)胞電生理特性16
• 2.4.9 神經(jīng)干/祖細(xì)胞凍存和復(fù)蘇16-17
• 3 結(jié)果17-19
• 3.1 神經(jīng)干/祖細(xì)胞原代分離培養(yǎng)結(jié)果及鑒定17
• 3.2 神經(jīng)干/祖細(xì)胞傳代培養(yǎng)結(jié)果17
• 3.3 神經(jīng)干/祖細(xì)胞誘導(dǎo)分化培養(yǎng)結(jié)果及免疫熒光鑒定17-18
• 3.4 神經(jīng)干/祖細(xì)胞誘導(dǎo)分化所得神經(jīng)元電生理功能檢測18
• 3.5 不同年齡段不同部位神經(jīng)干/祖細(xì)胞克隆增殖潛能比較18-19
• 4 討論19-25
• 4.1 成年哺乳動物神經(jīng)干細(xì)胞與神經(jīng)發(fā)生19-20
• 4.2 大、中型成年哺乳動物神經(jīng)球培養(yǎng)的建立與優(yōu)化20-22
• 4.2.1 腦組織分離消化20-21
• 4.2.2 細(xì)胞種板與傳代21
• 4.2.3 培養(yǎng)基成分選擇21-22
• 4.2.4 細(xì)胞凍存復(fù)蘇22
• 4.3 成年豚鼠皮質(zhì)淺層來源神經(jīng)球的鑒定22-25
• 5 結(jié)論25-26
• 圖片說明26-33
• 參考文獻33-38
• 綜述38-50
• 參考文獻45-50
• 攻讀學(xué)位期間的成果50-51
• 致謝51

【共引文獻】

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本文編號：373413