鴨病毒性腸炎（Duck viral enteritis, DVE）又稱鴨瘟（Duck piague, DP）由鴨腸炎病毒（Duck enteritis virus, DEV）;引起的,發(fā)生于鴨、鵝及多種雁形目動物的一種的急性、高度接觸性傳染病�；蛞呙缫云洫毺氐膬�(yōu)勢在基因工程疫苗研究中備受關(guān)注。 本研究對DEV gC的理論免疫原性和gC基因疫苗對BALB/c小鼠的免疫原性及其免疫佐劑等開展系列研究,獲得以下結(jié)果： 1.鴨腸炎病毒gC基因免疫原性理論預(yù)測：同源性分析顯示DEV gC與MDV-1、MDV-2 gC的同源性最高和親緣關(guān)系最近；功能預(yù)測顯示DEV gC可能屬于免疫反應(yīng)基因范疇,具有細胞外膜蛋白功能和酶性質(zhì),但不屬于任何一種酶類,進一步對其結(jié)構(gòu)與功能預(yù)測發(fā)現(xiàn)21～54、48～68、160-200aa可能與肝素結(jié)合有關(guān),29-110aa與gC阻礙備解素與C3b結(jié)合有關(guān),168-225和254-332aa與gC與C3b結(jié)合有關(guān)；細胞表位的預(yù)測顯示DEV gC存在豐富的T和B細胞表位,表明DEV gC可能具有良好免疫原性。 2.殼聚糖作為pcDNA-DEV... 

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
論文的創(chuàng)新性工作
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一部分 文獻綜述及選題目的和意義
    第一章 皰疹病毒gC基因工程疫苗的研究進展
        1. gC的功能
            1.1 gC在病毒防御方面的功能
            1.2 gC在病毒攻擊方面的功能
        2. gC潛在的皰疹病毒疫苗策略
            2.1 基于gC的防御作用
            2.2 基于gC的攻擊作用
        3. gC基因工程疫苗的研究與應(yīng)用
            3.1 基因缺失減毒活疫苗
            3.2 重組亞單位疫苗
            3.3 重組病毒活載體疫苗
            3.4 DNA疫苗
        4. 展望
        5. 選題目的和意義
第二部分 實驗研究
    第二章 鴨腸炎病毒gC基因免疫原性理論預(yù)測
        1. 實驗材料
        2. 實驗方法
            2.1 DEV gC同源性分析
            2.2 DEV gC二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
            2.3 DEV gC功能區(qū)的預(yù)測
            2.4 DEV gC T細胞表位的預(yù)測
            2.5 DEV gC B細胞表位的預(yù)測
        3. 結(jié)果
            3.1 DEV gC同源性分析
            3.2 DEV gC二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
            3.3 DEV gC功能區(qū)的預(yù)測
            3.4 DEV gC T細胞表位的預(yù)測
            3.5 DEV gC B細胞表位預(yù)測
        4. 討論
        5. 小結(jié)
    第三章 殼聚糖作為pcDNA-DEV-gC疫苗遞送載體:制備和生物學(xué)特性研究
        1. 實驗材料
            1.1 載體和細胞
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2. 試驗方法
            2.1 殼聚糖/pcDNA-DEV-gC復(fù)合物制備
            2.2 殼聚糖/pcDNA-DEV-gC復(fù)合物對質(zhì)粒包封率的測定
            2.3 殼聚糖/pcDNA-DEV-gC復(fù)合物形態(tài)和粒徑的測定
            2.4 酶降解保護試驗
            2.5 體外細胞毒性試驗
            2.6 體外轉(zhuǎn)染實驗
        3. 結(jié)果
            3.1 0.8%瓊脂糖凝膠電泳初步檢測復(fù)合物制備效果
            3.2 殼聚糖/pcDNA-DEV-gC復(fù)合物對質(zhì)粒的包封率
            3.3 殼聚糖/pcDNA-DEV-gC復(fù)合物的形態(tài)和粒徑
            3.4 酶降解保護試驗
            3.5 體外轉(zhuǎn)染實驗
            3.6 體外細胞毒性實驗
        4. 討論
        5. 小結(jié)
    第四章 陽性脂質(zhì)體作為pcDNA-DEV-gC疫苗遞送載體制備和生物學(xué)特性研究
        1. 實驗材料
            1.1 載體和細胞
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2. 試驗方法
            2.1 陽性脂質(zhì)體/pcDNA-DEV-gC復(fù)合物制備
            2.2 陽性脂質(zhì)體/pcDNA-DEV-gC復(fù)合物對質(zhì)粒包封率的測定
            2.3 陽性脂質(zhì)體/pcDNA-DEV-gC復(fù)合物形態(tài)和粒徑的測定
            2.4 酶降解保護試驗
            2.5 體外細胞毒性試驗
            2.6 體外轉(zhuǎn)染實驗
        3. 結(jié)果
            3.1 0.8%瓊脂糖凝膠電泳初步檢測復(fù)合物制備效果
            3.2 陽性脂質(zhì)體/pcDNA-DEV-gC復(fù)合物對質(zhì)粒的包封率
            3.3 陽性脂質(zhì)體/pcDNA-DEV-gC復(fù)合物的形態(tài)和粒徑
            3.4 酶降解保護試驗
            3.5 體外轉(zhuǎn)染實驗
            3.6 體外細胞毒性實驗
        4. 討論
        5. 小結(jié)
    第五章 間接ELISA檢測鼠抗DEV特異性血清IgG和腸道IgA方法的建立
        1. 實驗材料
            1.1 毒株和細胞
            1.2 實驗動物
            1.3 主要試劑
            1.4 主要儀器
        2. 試驗方法
            2.1 鼠抗DEV多克隆抗體制備
            2.2 建立檢測鼠抗DEV特異性IgG和IgA的間接ELISA方法
        3. 實驗結(jié)果
            3.1 鼠抗DEV多克隆抗體效價測定
            3.2 建立檢測鼠抗DEV特異性IgG和IgA的間接ELISA方法
        4. 討論
        5. 小結(jié)
    第六章 鴨腸炎病毒gC基因疫苗誘導(dǎo)BALB/c小鼠免疫發(fā)生的研究
        1. 實驗材料
            1.1 毒株、質(zhì)粒、疫苗和基因槍"子彈"
            1.2 實驗動物
            1.3 主要試劑
            1.4 主要儀器和軟件
        2. 試驗方法
            2.1 陽性脂質(zhì)體和殼聚糖/pcDNA-DEV-gC基因疫苗納米粒的制備
            2.2 實驗分組及免疫
            2.3 樣品采集及處理
            2.4 外周血T淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗
            2.5 T淋巴細胞亞群數(shù)量變化的檢測
            2.6 間接ELISA方法檢測抗體水平
            2.7 微量中和試驗檢測血清抗體
        3. 結(jié)果
            3.1 疫苗免疫小鼠后的實驗結(jié)果
            3.2 基因疫苗不同免疫途徑免疫小鼠后的效果比較
            3.3 基因疫苗不同免疫劑量免疫小鼠后的效果比較
            3.4 不同遞送載體的比較
            3.5 基因疫苗與弱毒疫苗免疫小鼠后的效果比較
            3.6 微量中和試驗結(jié)果
        4. 討論
            4.1 機體免疫應(yīng)答與病毒感染的關(guān)系
            4.2 小鼠免疫基因疫苗后外周血T淋巴細胞轉(zhuǎn)化效果
            4.3 小鼠免疫基因疫苗后CD4+和CD8+T淋巴細胞動態(tài)變化
            4.4 小鼠免疫基因疫苗后血清抗體IgG的動態(tài)變化
            4.5 小鼠免疫基因疫苗后腸道抗體IgA的動態(tài)變化
            4.6 小鼠免疫基因疫苗后中和抗體的變化
            4.7 免疫劑量對基因疫苗免疫效果的影響
            4.8 免疫途徑對基因疫苗免疫效果的影響
            4.9 遞送載體對基因疫苗免疫效果的影響
            4.10 小鼠免疫基因疫苗和弱毒疫苗后免疫效果的比較
            4.11 影響基因疫苗免疫效果的因素
            4.12 鴨腸炎病毒gC基因疫苗的研究意義及展望
        5. 小結(jié)
參考文獻
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]近交系大、小鼠遺傳檢測方法研究進展[J]. 劉秀英,胡怡秀,黃躍龍,龍智鋼,丘豐,劉運芝,湛志飛,劉建高.  實用預(yù)防醫(yī)學(xué). 2008(06)
[2]鴨瘟病毒gC基因的克隆及其分子特性分析[J]. 徐超,李欣然,信洪一,練蓓,程安春,汪銘書,朱德康,賈仁勇,羅啟慧,陳孝躍.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2008(12)
[3]一種新型鴨瘟病原的分離鑒定及其特性[J]. 刁有祥,呂桂霞,鄭福英,楊杰華,陳慶普,劉悅竹.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2006(02)
[4]近交系小鼠H-2抗原單克隆抗體的對比研究[J]. 馬麗穎,鄭繼奎,譚萍萍,劉雙環(huán),岳秉飛.  中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2005(04)
[5]家禽DNA疫苗研究進展（上）[J]. 張小榮,焦新安.  中國家禽. 2003(24)
[6]鴨瘟鴨病毒性肝炎二聯(lián)弱毒疫苗的研究　1．最佳配比的篩選、安全性及免疫效力[J]. 程安春，汪銘書，崔恒敏，廖德惠，陳孝躍.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 1996(05)
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博士論文
[1]鴨瘟病毒gC基因的發(fā)現(xiàn)、原核表達和應(yīng)用研究[D]. 徐超.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號：3719003