本文關(guān)鍵詞：CD38對(duì)B細(xì)胞發(fā)育的影響及其機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的: CD38在心血管疾病、腫瘤及代謝性疾病中有著廣泛的調(diào)節(jié)作用；但其在免疫系統(tǒng)中的作用少見報(bào)道。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)TLR4mut小鼠B細(xì)胞發(fā)育障礙，且CD38-/-小鼠脾臟中TLR4的表達(dá)顯著下降。本研究旨在闡明CD38缺陷對(duì)TLR4分布及表達(dá)的影響，揭示CD38缺陷對(duì)B細(xì)胞發(fā)育的影響及其節(jié)點(diǎn)，探索CD38在抗炎癥反應(yīng)中的潛在作用及其機(jī)制。這方面的研究將彌補(bǔ)我們對(duì)CD38在B細(xì)胞發(fā)育中作用認(rèn)識(shí)的缺陷，為醫(yī)學(xué)干預(yù)提供新的靶點(diǎn)。 方法: 1.通過小鼠尾巴DNA提取、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chainreaction,PCR）技術(shù)擴(kuò)增CD38和Neo基因，鑒定小鼠是否成功敲除CD38基因； 2.通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Reverse transcriotion-polymerase chainreaction, RT-PCR）檢測(cè)WT和CD38-/-小鼠內(nèi)臟器官(心、肝、脾、肺、腎、腦、胸腺及淋巴結(jié))中TLR4的mRNA表達(dá)水平； 3.分別通過Real-time PCR和蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)WT和CD38-/-小鼠脾臟中TLR4的mRNA和蛋白表達(dá)水平，同時(shí)通過蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)Sirt1和NF-κB的蛋白表達(dá)水平； 4.通過Real-time PCR檢測(cè)WT和CD38-/-小鼠脾臟中炎性因子(包括TNF-α，MCP-1，IL-1β和IL-6)的表達(dá)水平； 5.通過HE染色和免疫組織化學(xué)技術(shù)(Immunohistochemistry,IHC-P)比較WT和CD38-/-小鼠脾臟的組織學(xué)差異； 6.通過磁珠分選法從WT和CD38-/-小鼠脾臟中進(jìn)一步分選純化出B細(xì)胞，然后通過Real-time PCR和蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)B細(xì)胞中TLR4的mRNA和蛋白表達(dá)，同時(shí)通過蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)Sirt1和NF-κB的蛋白表達(dá)水平； 7.通過Real-time PCR檢測(cè)WT和CD38-/-小鼠B細(xì)胞中炎性因子(包括TNF-α，MCP-1，IL-1β和IL-6)的表達(dá)水平； 8.采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法比較WT和CD38-/-小鼠脾臟總細(xì)胞和B細(xì)胞數(shù)量差異； 9.通過流式細(xì)胞分析技術(shù)和相應(yīng)表面抗體染色檢測(cè)B細(xì)胞的發(fā)育、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果: 1.實(shí)驗(yàn)所用CD38基因敲除小鼠均為純合子，保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性； 2.主要臟器中脾臟TLR4的表達(dá)特異性下降，CD38敲除小鼠的TLR4表達(dá)水平呈2倍左右降低； 3. CD38敲除小鼠脾臟發(fā)育受限，其炎性因子TNF-α、MCP-1和IL-6表達(dá)顯著下降，而IL-1β表達(dá)顯著升高； 4. CD38敲除小鼠脾臟中NF-κB和Sirt1蛋白的表達(dá)水平顯著升高； 5. CD38敲除小鼠脾臟中巨噬細(xì)胞數(shù)目減少； 6. CD38敲除小鼠的B細(xì)胞數(shù)量呈2倍下降，且其MCP-1的表達(dá)顯著降低，，IL-1β的表達(dá)顯著升高，變化趨勢(shì)與脾臟一致，而TNF-α、IL-6的表達(dá)沒有很明顯的差異； 7. CD38敲除小鼠的B細(xì)胞中TLR4表達(dá)降低，而NF-κB和Sirt1基因的表達(dá)顯著上升； 8. CD38敲除小鼠B細(xì)胞發(fā)育障礙，體現(xiàn)在成熟B細(xì)胞數(shù)目減少和T1-T2發(fā)育阻滯，但其細(xì)胞周期和凋亡不受影響；結(jié)論: CD38基因敲除一方面通過降低B細(xì)胞中TLR4基因的表達(dá)，引起MCP-1的表達(dá)下降；另一方面通過增強(qiáng)Sirt1基因的表達(dá)，去乙酰化NF-κB，抑制MCP-1的表達(dá)；二者可能共同抑制T1-T2的轉(zhuǎn)型，從而影響B(tài)細(xì)胞的發(fā)育成熟。
【關(guān)鍵詞】：CD38 B細(xì)胞 發(fā)育 炎性因子 Toll樣受體4
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 第1章 緒論12-20
• 1.1 CD38 與固有免疫12-17
• 1.1.1 CD38 簡(jiǎn)述12-13
• 1.1.2 固有免疫與 TLR 信號(hào)13-14
• 1.1.3 炎性因子與 B 細(xì)胞發(fā)育14-16
• 1.1.4 CD38 與固有免疫16
• 1.1.5 CD38 與炎性反應(yīng)16-17
• 1.2 B 細(xì)胞發(fā)育相關(guān)因子17-19
• 1.2.1 Sirt1 與 CD3817-18
• 1.2.2 TLR/NF-ΚB 信號(hào)通路18-19
• 1.3 小結(jié)19-20
• 第2章 CD38 基因敲除對(duì) TLR4 分布及表達(dá)的影響20-29
• 2.1 引言20
• 2.2 材料和方法20-26
• 2.2.1 小鼠 CD38 基因整體水平敲除的原理及其鑒定20-22
• 2.2.2 小鼠主要臟器中總 RNA 的提取22
• 2.2.3 RNA 濃度的測(cè)定22-23
• 2.2.4 RNA 逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA23
• 2.2.5 PCR 擴(kuò)增 TLR4 基因的 mRNA23-24
• 2.2.6 瓊脂糖凝膠電泳24
• 2.2.7 凝膠成像系統(tǒng)分析24
• 2.2.8 脾臟總蛋白的提取24
• 2.2.9 Western Blot 法檢測(cè)脾臟中 TLR4 的蛋白表達(dá)水平24-26
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-28
• 2.3.1 CD38 基因敲除小鼠基因型鑒定26-27
• 2.3.2 CD38 基因敲除對(duì) TLR4 基因在不同臟器中分布及表達(dá)的影響27-28
• 2.3.3 CD38 基因敲除對(duì)脾臟中 TLR4 基因表達(dá)的影響28
• 2.4 結(jié)論28-29
• 第3章 CD38 基因敲除對(duì)脾臟及其炎性因子的影響29-38
• 3.1 引言29
• 3.2 材料和方法29-34
• 3.2.1 Western Blot 檢測(cè)脾臟中 TLR4、NF-κB 和 Sirt1 的蛋白表達(dá)水平29
• 3.2.2 熒光定量 PCR 檢測(cè)脾臟中 TLR4 和細(xì)胞炎性因子的 mRNA 表達(dá)29-31
• 3.2.3 組織 HE 染色31-32
• 3.2.4 免疫組化32-34
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-37
• 3.3.1 CD38 基因敲除對(duì)小鼠脾臟大小及重量的影響34-35
• 3.3.2 CD38 基因敲除對(duì)小鼠脾臟中炎性因子表達(dá)水平的影響35
• 3.3.3 CD38 基因敲除對(duì)小鼠脾臟中 NF-κB 和 Sirt1 蛋白表達(dá)的影響35-36
• 3.3.4 CD38 基因敲除對(duì)小鼠脾臟炎性細(xì)胞的影響36-37
• 3.4 結(jié)論37-38
• 第4章 CD38 基因敲除對(duì) B 細(xì)胞發(fā)育的影響及其機(jī)制38-47
• 4.1 引言38
• 4.2 材料和方法38-40
• 4.2.1 B 細(xì)胞的分選38-39
• 4.2.2 B 細(xì)胞中 RNA 的提取39
• 4.2.3 熒光定量 PCR 檢測(cè) B 細(xì)胞中 TLR4 和炎性因子的 m RNA 表達(dá)水平39
• 4.2.4 B 細(xì)胞中 TLR4、NF-κB 和 Sirt1 基因的蛋白表達(dá)水平39
• 4.2.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè) B 細(xì)胞的發(fā)育情況39-40
• 4.2.6 流式細(xì)胞儀檢測(cè) B 細(xì)胞的細(xì)胞周期40
• 4.2.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè) B 細(xì)胞的凋亡40
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-46
• 4.3.1 CD38 基因敲除對(duì)小鼠脾臟總細(xì)胞和 B 細(xì)胞數(shù)量的影響40-41
• 4.3.2 CD38 基因敲除對(duì)小鼠脾臟 B 細(xì)胞中炎性因子表達(dá)的影響41-42
• 4.3.3 CD38 基因敲除對(duì)小鼠脾臟 B 細(xì)胞中 NF-κB 和 Sirt1 蛋白表達(dá)的影響42-43
• 4.3.4 CD38 基因敲除對(duì)小鼠脾臟 B 細(xì)胞發(fā)育的影響43-45
• 4.3.5 CD38 基因敲除對(duì)小鼠脾臟 B 細(xì)胞細(xì)胞周期和凋亡的影響45-46
• 4.4 結(jié)論46-47
• 第5章 討論47-49
• 致謝49-50
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 附錄53-56
• 攻讀學(xué)位期間研究業(yè)績(jī)56-57
• 綜述57-63
• 參考文獻(xiàn)61-63

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 姚魁武;劉張靜;;SIRT1信號(hào)通路對(duì)缺血性心臟病的作用機(jī)制及中醫(yī)藥對(duì)其影響的研究進(jìn)展[J];北京中醫(yī)藥;2013年09期

2 李鉆芳;林如輝;毛敬潔;胡海霞;朱曉勤;陳文列;陳立典;;栝樓桂枝湯對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J];福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2013年05期

3 胡海霞;李鉆芳;林如輝;朱曉勤;陳立典;;瓜蔞桂枝湯對(duì)PC12細(xì)胞的保護(hù)作用[J];福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2014年03期

4 尤曉欣;裴建;;Toll樣受體信號(hào)通路與缺血性中風(fēng)炎癥反應(yīng)機(jī)制的研究進(jìn)展[J];國(guó)際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2014年02期

5 邱權(quán);葉琳;皮靜婷;陳黎黎;陳鴻雁;;PI3K/Akt/FoxO3a信號(hào)通路對(duì)人鼻咽癌CNE-1、CNE-2細(xì)胞增殖及凋亡的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年12期

6 Ren-Min Wu;Na Qi;Yu-Wen Jia;Zhu Guan;Liang-Ren Zhang;Li-He Zhang;Zhen-Jun Yang;;A novel method for the synthesis of sulfur substituted-cyclopyrophosphate of cADPR analogs[J];Chinese Chemical Letters;2014年12期

7 向青;許文;劉杰;張俊賢;陳琳;陳嫻雯;徐偉;褚克丹;;HPLC-DAD法分析栝樓桂枝湯血中移行成分[J];福建中醫(yī)藥;2015年02期

8 張玉琴;李煌;許文;徐偉;黃枚;褚克丹;陳立典;;栝樓桂枝顆粒對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠的血腦屏障通透性及神經(jīng)保護(hù)作用[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年05期

9 陳阿虹;劉杰;許文;李煌;陳嫻雯;蘇世德;褚克丹;徐偉;;RRLC-MS/MS法測(cè)定栝樓桂枝顆粒中γ-氨基丁酸和瓜氨酸含量[J];福建中醫(yī)藥;2015年04期

10 毛釗,楊儉,吳織芬,賴仁勝;老年牙周炎牙齦組織Fas/Apo-1(CD95)抗原表達(dá)的免疫組織化學(xué)研究[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2002年05期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳偉莉;重組人TRAIL的制備和抗腫瘤作用的研究[D];吉林大學(xué);2007年

2 俞雪蓮;上海部分地區(qū)成人感染麻疹病毒的分子流行病學(xué)及致病機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

3 劉麗英;NAMPT對(duì)腦血管內(nèi)皮細(xì)胞功能及缺血性損傷的作用[D];浙江大學(xué);2013年

4 黃攀;IGF-1/PTEN/Akt/FoxO信號(hào)通路在大鼠水浸束縛應(yīng)激中作用研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

5 崔英華;心肌梗死患者SIRT1基因啟動(dòng)子基因分析及功能測(cè)定[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

6 王乾興;小鼠月經(jīng)模型中月經(jīng)發(fā)生關(guān)鍵時(shí)期的確定及孕酮對(duì)相關(guān)基因表達(dá)的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

7 彭倩宜;脂筏—前B細(xì)胞集落增強(qiáng)因子與胰島素通路作用的新視角[D];中南大學(xué);2013年

8 趙永博;SIRT1在創(chuàng)傷性腦損傷后的功能及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 田登梅;內(nèi)皮細(xì)胞靶向的D1R融合蛋白促進(jìn)骨髓和肝臟造血干/祖細(xì)胞植入的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

10 陳嬋;細(xì)胞外RNA和TLR3-Trif信號(hào)通路在心肌缺血再灌注損傷中的作用研究[D];中南大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王軍;重組可溶性人TRAIL抑制腫瘤細(xì)胞增殖的研究[D];武漢大學(xué);2005年

2 婁林潔;定心方對(duì)ApoE基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化及內(nèi)臟脂肪素表達(dá)的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

3 劉張靜;缺血性心肌細(xì)胞凋亡與血府逐瘀口服液干預(yù)SIRT1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制調(diào)控研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

4 楊q

本文編號(hào)：370978