本文關鍵詞：幽門螺桿菌經(jīng)ROS通路激活NLRP3炎癥復合體誘導THP-1細胞分泌IL-1β和IL-18，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的: NLRP3（NACTH domain-leucine-rich repeat,and PYD-containing protein，NLRP3）炎癥復合體能被多種激活劑所激活�；钚匝�(Reactive oxygen species，ROS)是激活NLRP3信號通路的信號之一。本實驗以THP-1（人單核細胞）來源的巨噬細胞為模型，觀察幽門螺桿菌（Helicobacter pylori, H. pylori）對NLRP3炎癥復合體活化的影響及ROS在其中的作用。 方法: 將THP-1細胞與H. pylori SS1共孵育，按照不同MOI（感染復數(shù)）200:1、100:1、50:1、25:1，并于0h、3h、6h、12h、24h收集培養(yǎng)上清及細胞，ELISA檢測IL-1β和IL-18含量，F(xiàn)CM檢測ROS的水平，Realtime-PCR檢測NLRP3、caspase-1（cysteiny aspartate-specific protease-1，caspase-1）mRNA水平，Western blot檢測caspase-1的表達情況。采用RNA干擾技術(shù)干擾NLRP3基因表達，觀察NLRP3-siRNA對H. pylori誘導的IL-1β和IL-18分泌的影響。用25mM的ROS清除劑N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC）預處理THP-1細胞30min，再按照MOI=100:1加入H. pylori SS1處理，觀察NAC預處理對H. pylori誘導的NLRP3、caspase-1mRNA表達以及IL-1β、IL-18分泌的影響。 結(jié)果: (1) H. pylori能以時間依賴性和劑量依賴性方式誘導THP-1細胞產(chǎn)生IL-1β和IL-18；用MOI為100:1的H. pylori刺激THP-1巨噬細胞，IL-1β在6h達到最高，IL-18在12h達到最高（P0.05）；當MOI為200:1時，IL-1β和IL-18產(chǎn)生水平減少。 (2) FCM檢測結(jié)果顯示，H. pylori能以時間依賴性方式誘導THP-1細胞產(chǎn)生ROS，，其中于刺激6h達到高峰（p0.01）；NAC預處理可明顯清除H. pylori處理后THP-1細胞ROS產(chǎn)生（p0.05），于3h、6h、12h、24h ROS熒光值分別減少6.79%、33.63%、19.59%、14.68%。 (3) Realtime-PCR結(jié)果顯示， H. pylori刺激THP-1細胞使細胞NLRP3、caspase-1mRNA表達均有表達，NLRP3mRNA于6h開始升高，12h達到高峰（p0.05），caspase-1mRNA于3h開始升高，12h達到高峰（p0.01）；NAC預處理后NLRP3（p0.05）、caspase-1（p0.01）mRNA表達水平降低。 (4) Western blot結(jié)果顯示，H. pylori刺激的THP-1細胞后caspase-1p10（10KD）的蛋白含量升高，于刺激12h含量達到高峰，與NAC處理前相比，抑制后各組含量下降。 (5) NLRP3-siRNA轉(zhuǎn)染細胞后，IL-1β和IL-18產(chǎn)生減少。 結(jié)論: (1) H. pylori可誘導THP-1細胞分泌IL-1β和IL-18； (2) H. pylori通過ROS途徑激活NLRP3炎癥復合體。
【關鍵詞】：幽門螺桿菌 NLRP3 caspase-1 IL-1β IL-18 ROS
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R378
【目錄】：

• 主要英文縮略語索引4-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 1 前言10-13
• 2 實驗材料13-16
• 3 實驗方法16-24
• 4 實驗結(jié)果24-37
• 5 討論37-40
• 6 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-44
• 綜述44-51
• 參考文獻48-51
• 發(fā)表及待發(fā)表論文51-52
• 致謝52

【共引文獻】

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  本文關鍵詞：幽門螺桿菌經(jīng)ROS通路激活NLRP3炎癥復合體誘導THP-1細胞分泌IL-1β和IL-18，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：370935