目的優(yōu)化流感減毒活疫苗誘發(fā)黏膜IgA抗體的ELISA檢測方法,并制備IgA抗體實驗室內(nèi)控品。方法采用ELISA檢測法對流感病毒抗原（全病毒及其相應HA抗原）及包被濃度（0. 5、1、2、4μg/mL）、封閉液（1%BSA、10%FBS、5%脫脂奶粉）及封閉時間（1、1. 5、2 h）、樣本稀釋液（含1%BSA的PBST、含2%脫脂奶粉的PBST、樣本保存液）及樣本作用時間（45、60、75 min）、酶標抗體稀釋度（1∶1 000、1∶2 000、1∶4 000、1∶8 000）進行優(yōu)化。采用優(yōu)化的方法制備針對H1N1、H3N2和B型3個型別流感病毒的IgA抗體檢測用實驗內(nèi)控品,并用該方法對接種三價流感減毒活疫苗的20名志愿者的鼻咽拭子樣本進行檢測。結(jié)果最適間接ELISA法檢測條件為:以全病毒作為包被抗原,包被濃度為1μg/mL;以含1%牛血清白蛋白為封閉液封閉2 h;樣本稀釋液為2%脫脂奶粉的PBST,作用時間為60 min;酶標抗體稀釋度為1∶1 000。采用優(yōu)化方法制備的H1N1、H3N2、B型IgA抗體陽性實驗室內(nèi)控品幾何平均滴度分別為23、45、35,可接受范圍分別為16～3... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒
    1.2 樣本
    1.3 主要試劑
    1.4 方法的建立
    1.5 反應條件的優(yōu)化
        1.5.1 包被抗原的確定
        1.5.2 包被抗原濃度的確定
        1.5.3 封閉液的確定
        1.5.4 封閉時間的確定
        1.5.5 樣本稀釋液的確定
        1.5.6 樣本孵育時間的確定
        1.5.7 酶標二抗稀釋度的確定
    1.6 實驗室內(nèi)控品的制備
    1.7 方法的初步應用
    1.8統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 最適反應條件
        2.1.1 最適包被抗原
        2.1.2 最適抗原包被濃度
        2.1.3 最適封閉液
        2.1.4 最適封閉時間
        2.1.5 最適樣本稀釋液
        2.1.6 最適樣品孵育時間
        2.1.7 最適酶標二抗稀釋度
    2.2 實驗室內(nèi)控品標定結(jié)果
    2.3 方法的初步應用
3 討論



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