彎曲桿菌（Campylobacter）,尤其是空腸彎曲桿菌（Campylobacter jejuni）是一種非常重要的食源性致病菌。氟喹諾酮類和大環(huán)內(nèi)酯類藥物是治療彎曲桿菌感染的首選藥物。由于彎曲桿菌對氟喹諾酮類藥物的耐藥問題日益嚴重,大環(huán)內(nèi)酯類藥物對彎曲桿菌的治療就顯得尤為重要。作為世界第三大類藥物,大環(huán)內(nèi)酯類藥物,尤其是泰樂菌素（動物飼料添加劑）和紅霉素（治療用藥）被廣泛用于獸醫(yī)和人醫(yī)臨床。目前,一些流行病學調查數(shù)據(jù)顯示,彎曲桿菌對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的耐藥率呈現(xiàn)上升趨勢,若不加以防范,就有可能使人彎曲桿菌病的治療陷入無藥可用的境地。因此控制大環(huán)內(nèi)酯耐藥彎曲桿菌的產(chǎn)生、擴散和流行勢在必行。為從源頭上控制耐藥菌的產(chǎn)生,我們必須研究彎曲桿菌大環(huán)內(nèi)酯耐藥性的產(chǎn)生規(guī)律和機制；為有效控制耐藥菌的擴散和流行,我們必須研究耐藥菌的適應性及其機制,因為耐藥菌的適應性是決定其在環(huán)境中擴散和流行的基本因素。 鑒于高水平大環(huán)內(nèi)酯耐藥彎曲桿菌的危害性,本研究首先建立了一種基于TaqMan探針的實時熒光定量PCR方法,用于特異性鑒別和定量分析彎曲桿菌23SrRNA基因突變,并對臨床菌的耐藥突變進行了初步調... 

【文章頁數(shù)】：189 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 立題依據(jù)
    1.2 彎曲桿菌大環(huán)內(nèi)酯耐藥性和適應性研究進展
    1.3 研究內(nèi)容和目標
2 實時熒光定量PCR方法檢測彎曲桿菌大環(huán)內(nèi)酯耐藥突變
    2.1 引言
    2.2 材料方法
        2.2.1 藥品與試劑
        2.2.2 主要儀器設備
        2.2.3 菌株、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件
        2.2.4 彎曲桿菌的藥物敏感性測定
        2.2.5 細菌基因組提取
        2.2.6 彎曲桿菌耐藥相關突變點的測序鑒定
        2.2.7 標準質粒的構建與確證
        2.2.8 TaqMan real-time PCR方法的建立
        2.2.9 TaqMan real-time PCR的特異性考查
        2.2.10 TaqMan real-time PCR的靈敏性考查
        2.2.11 彎曲桿菌分離株的突變分析
    2.3 結果
        2.3.1 標準質粒的序列確證
        2.3.2 TaqMan real-time PCR的特異性
        2.3.3 TaqMan real-time PCR的靈敏性
        2.3.4 彎曲桿菌分離株的耐藥突變特性
    2.4 討論
3 高水平大環(huán)內(nèi)酯耐藥彎曲桿菌的體外獲取和適應性分析
    3.1 引言
    3.2 材料方法
        3.2.1 藥物
        3.2.2 主要儀器設備
        3.2.3 菌種和培養(yǎng)條件
        3.2.4 彎曲桿菌對泰樂菌素的MIC、MPC和MSW的測定
        3.2.5 固定濃度誘導實驗和穩(wěn)定性考察
        3.2.6 耐藥相關突變分析
        3.2.7 耐藥菌體外適應性分析
    3.3 結果
        3.3.1 兩株敏感菌對泰樂菌素的MIC、MPC和MSW值
        3.3.2 體外誘導耐藥菌的表型和基因突變類型
        3.3.3 高水平耐藥菌的體外相對適應性
    3.4 討論
4 大環(huán)內(nèi)酯耐藥彎曲桿菌的逐步產(chǎn)生過程及其適應性變化
    4.1 引言
    4.2 材料方法
        4.2.1 藥物
        4.2.2 主要儀器設備
        4.2.3 菌種和培養(yǎng)條件
        4.2.4 彎曲桿菌對紅霉素和泰樂菌素的MIC、MPC和MSW的測定
        4.2.5 體外誘導實驗
        4.2.6 耐藥相關突變分析
        4.2.7 耐藥菌體外適應性分析
    4.3 結果
        4.3.1 兩株敏感菌對紅霉素和泰樂菌素的MIC、MPC和MSW值
        4.3.2 體外誘導過程中耐藥菌的MIC和靶基因突變類型
        4.3.3 耐藥菌的體外相對適應性結果
    4.4 討論
5 大環(huán)內(nèi)酯耐藥空腸彎曲桿菌的基因表達差異分析
    5.1 引言
    5.2 材料方法
        5.2.1 實驗相關試劑
        5.2.2 主要儀器設備
        5.2.3 菌株和背景
        5.2.4 細菌總RNA提取和純化
        5.2.5 差異表達基因的檢測(基因芯片)
        5.2.6 差異表達基因的數(shù)據(jù)分析(基因芯片)
        5.2.7 部分差異基因的確證(Real-time RT-PCR、Western-blot)
    5.3 結果
        5.3.1 細菌總RNA的質量和純度鑒定
        5.3.2 基因芯片的質量和數(shù)據(jù)處理的可靠性
        5.3.3 68E3系列中耐藥菌的基因表達差異
        5.3.4 76E6系列中耐藥菌的基因表達差異
        5.3.5 68E3和76E6系列中差異基因的比較分析
    5.4 討論
        5.4.1 彎曲桿菌對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的耐藥新機制
        5.4.2 彎曲桿菌大環(huán)內(nèi)酯類耐藥相關適應性機制
6 全文創(chuàng)新性總結
7 彎曲桿菌對抗生素耐藥性和適應性研究進展(綜述)
    7.1 彎曲桿菌對重要抗生素的耐藥性流行情況
    7.2 彎曲桿菌對重要抗生素的耐藥性產(chǎn)生和耐藥機制
        7.2.1 彎曲桿菌對氟喹諾酮類藥物的耐藥性產(chǎn)生和耐藥機制
        7.2.2 彎曲桿菌對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的耐藥性產(chǎn)生和耐藥機制
        7.2.3 彎曲桿菌對四環(huán)素類藥物的耐藥性產(chǎn)生和耐藥機制
        7.2.4 彎曲桿菌的多重耐藥機制
    7.3 耐藥彎曲桿菌的適應性研究
        7.3.1 氟喹諾酮類耐藥彎曲桿菌的適應性
        7.3.2 大環(huán)內(nèi)酯類耐藥彎曲桿菌的適應性
        7.3.3 四環(huán)素類耐藥彎曲桿菌的適應性
    7.4 結論
參考文獻
致謝
作者簡介
答辯主要問題及回答



本文編號：3678484