巨噬細胞是一類分布廣泛的吞噬細胞,由血液循環(huán)系統(tǒng)中的單核細胞遷移至組織處分化而來,是固有免疫的重要組成成員。巨噬細胞上表達多種Toll樣受體（Toll-like receptors,TLRs）,能識別來自不同病原微生物上的病原體相關(guān)分子模式（Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）,并能迅速有效得做出反應(yīng),清除病原體,參與機體抵抗感染的第一道防線。同時,清除病原體的過程又不可避免會伴隨炎癥反應(yīng)。而巨噬細胞是最先與病原體發(fā)生接觸的細胞之一,因此,巨噬細胞又是一類非常重要的炎癥細胞,能夠介導并促進炎癥反應(yīng),其過度活化會引起炎癥的調(diào)控失衡,使生理性炎癥反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)椴±硇缘拿庖邠p傷,從而導致多種炎癥性疾病,如膿毒癥。在巨噬細胞表達的多種TLRs,以TLR4介導的巨噬細胞炎性活化研究最為廣泛,有多種針對TLR4的膿毒癥藥物都用于臨床實驗,但都因效果不佳或副作用太大而被撤銷。因此,研究的目光開始轉(zhuǎn)向到位于內(nèi)體的TLR3上。TLR3是一種核酸感受器,它可以識別來自病毒或宿主細胞的雙鏈RNA（Double-strained RNA, dsRNA）和模擬物... 

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【學位級別】：博士

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摘要
ABSTRACT
第一章 外源小分子FC-99干預(yù)可抑制TLR3介導的巨噬細胞炎癥反應(yīng)
    1.1 前言
        1.1.1 Toll-like receptor及其相關(guān)通路
        1.1.2 TLR3信號通路
        1.1.3 TLR3與炎癥
    1.2 實驗材料
        1.2.1 實驗對象
        1.2.2 主要實驗試劑
        1.2.3 主要實驗儀器
    1.3 實驗方法
        1.3.1 FC-99的配置
        1.3.2 小鼠腹腔巨噬細胞的獲取
        1.3.3 細胞活力的檢測
        1.3.4 Poly(I：C)攝取能力的檢測
        1.3.5 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測炎性因子蛋白水平
        1.3.6 熒光定量PCR分析炎性因子mRNA水平
        1.3.7 Western blot檢測蛋白表達水平
        1.3.8 數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計
    1.4 結(jié)果
        1.4.1 FC-99不影響腹腔巨噬細胞的細胞活力
        1.4.2 FC-99不影響巨噬細胞對外源性poly(I：C)的攝取
        1.4.3 FC-99抑制poly(I：C)誘導的巨噬細胞炎性反應(yīng)
        1.4.4 FC-99抑制TLR3介導的MAPK/NF-KB信號通路
    1.5 討論
    1.6 參考文獻
第二章 FC-99通過IRF3/IFN-α/JAK/STAT1通路降低TLR3的表達
    2.1 前言
        2.1.1 TLR3的過度表達與活化加劇病毒誘導的炎癥損傷
        2.1.2 TLR3參與介導自身免疫病的發(fā)生
        2.1.3 TLR3介導了系統(tǒng)性炎癥的發(fā)生與發(fā)展
        2.1.4 IFN-α通路參與誘導TLR3的表達
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗對象
        2.2.2 主要實驗試劑
        2.2.3 主要實驗器材
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細胞系培養(yǎng)
        2.3.2 腹腔巨噬細胞的獲取
        2.3.3 小鼠骨髓來源DCs的獲取
        2.3.4 小鼠脾臟細胞的獲取
        2.3.5 流式細胞術(shù)檢測巨噬細胞TLR3的表達
        2.3.6 IFNAR1干擾技術(shù)
        2.3.7 數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 FC-99抑制poly(I：C)誘導的TLR3表達
        2.4.2 FC-99對TLR3的抑制作用不具有細胞依賴性
        2.4.3 Poly(I：C)誘導TLR3的表達依賴于Ⅰ型干擾素
        2.4.4 FC-99通過IRF3抑制Ⅰ型干擾素的表達
        2.4.5 FC-99通過JAK/STAT1抑制IFN-α誘導的TLR3
    2.5 討論
    2.6 參考文獻
第三章 FC-99通過誘導PPAR-γ促進巨噬細胞M2型極化
    3.1 前言
        3.1.1 炎癥與巨噬細胞極化
        3.1.2 巨噬細胞M2型極化的分子機制
        3.1.3 M2型巨噬細胞與疾病
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗對象
        3.2.2 主要實驗試劑
        3.2.3 主要實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 巨噬細胞極化的誘導
        3.3.2 STAT6干擾實驗
        3.3.3 流式細胞術(shù)檢測M2表面標記Mrc(CD206)
        3.3.4 Q-PCR技術(shù)、ELISA與Western blot
        3.3.5 數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 M1、M2的表型鑒定
        3.4.2 FC-99誘導M1向M2的轉(zhuǎn)化并促進IL-4誘導的M2型基因的表達
        3.4.3 FC-99促進M2型巨噬細胞相關(guān)基因的表達
        3.4.4 FC-99不通過STAT6誘導Mrc的表達
        3.4.5 FC-99通過PPAR-γ誘導Mrc的表達
    3.5 討論
    3.6 參考文獻
第四章 TLR3的降低與巨噬細胞M2型極化有助于緩解CLP誘導的小鼠膿毒癥
    4.1 前言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 實驗對象
        4.2.2 主要實驗試劑
        4.2.3 主要實驗儀器
    4.3 實驗方法
        4.3.1 盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)誘導小鼠膿毒癥
        4.3.2 生化指標的檢測
        4.3.3 血清炎性因子的檢測
        4.3.4 流式細胞術(shù)檢測TLR3的表達
        4.3.5 細胞凋亡的檢測
        4.3.6 小鼠血液和腹腔液細菌集落培養(yǎng)
        4.3.7 器官組織的HE染色
        4.3.8 器官組織中TLR3表達的檢測
        4.3.9 小鼠存活率實驗
        4.3.10 數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 FC-99減輕CLP誘導的器官功能障礙與損傷
        4.4.2 FC-99緩解CLP誘導的急性肺損傷
        4.4.3 FC-99降低CLP誘導的小鼠系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)
        4.4.4 FC-99降低CLP誘導的細胞凋亡并增強細菌清除
        4.4.5 FC-99抑制CLP誘導的小鼠死亡率
        4.4.6 FC-99抑制膿毒癥小鼠TLR3在系統(tǒng)及局部的表達
        4.4.7 FC-99干預(yù)肝臟巨噬細胞的極化
    4.5 討論
    4.6 參考文獻
結(jié)論
博士研究生期間發(fā)表及待發(fā)表論文列表
致謝



本文編號：3665255