發(fā)布時(shí)間：2022-07-22 20:05

　　巨噬細(xì)胞是一類(lèi)分布廣泛的吞噬細(xì)胞,由血液循環(huán)系統(tǒng)中的單核細(xì)胞遷移至組織處分化而來(lái),是固有免疫的重要組成成員。巨噬細(xì)胞上表達(dá)多種Toll樣受體（Toll-like receptors,TLRs）,能識(shí)別來(lái)自不同病原微生物上的病原體相關(guān)分子模式（Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）,并能迅速有效得做出反應(yīng),清除病原體,參與機(jī)體抵抗感染的第一道防線。同時(shí),清除病原體的過(guò)程又不可避免會(huì)伴隨炎癥反應(yīng)。而巨噬細(xì)胞是最先與病原體發(fā)生接觸的細(xì)胞之一,因此,巨噬細(xì)胞又是一類(lèi)非常重要的炎癥細(xì)胞,能夠介導(dǎo)并促進(jìn)炎癥反應(yīng),其過(guò)度活化會(huì)引起炎癥的調(diào)控失衡,使生理性炎癥反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)椴±硇缘拿庖邠p傷,從而導(dǎo)致多種炎癥性疾病,如膿毒癥。在巨噬細(xì)胞表達(dá)的多種TLRs,以TLR4介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎性活化研究最為廣泛,有多種針對(duì)TLR4的膿毒癥藥物都用于臨床實(shí)驗(yàn),但都因效果不佳或副作用太大而被撤銷(xiāo)。因此,研究的目光開(kāi)始轉(zhuǎn)向到位于內(nèi)體的TLR3上。TLR3是一種核酸感受器,它可以識(shí)別來(lái)自病毒或宿主細(xì)胞的雙鏈RNA（Double-strained RNA, dsRNA）和模擬物... 

【文章頁(yè)數(shù)】：97 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 外源小分子FC-99干預(yù)可抑制TLR3介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)
    1.1 前言
        1.1.1 Toll-like receptor及其相關(guān)通路
        1.1.2 TLR3信號(hào)通路
        1.1.3 TLR3與炎癥
    1.2 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        1.2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 FC-99的配置
        1.3.2 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的獲取
        1.3.3 細(xì)胞活力的檢測(cè)
        1.3.4 Poly(I：C)攝取能力的檢測(cè)
        1.3.5 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)炎性因子蛋白水平
        1.3.6 熒光定量PCR分析炎性因子mRNA水平
        1.3.7 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)水平
        1.3.8 數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì)
    1.4 結(jié)果
        1.4.1 FC-99不影響腹腔巨噬細(xì)胞的細(xì)胞活力
        1.4.2 FC-99不影響巨噬細(xì)胞對(duì)外源性poly(I：C)的攝取
        1.4.3 FC-99抑制poly(I：C)誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎性反應(yīng)
        1.4.4 FC-99抑制TLR3介導(dǎo)的MAPK/NF-KB信號(hào)通路
    1.5 討論
    1.6 參考文獻(xiàn)
第二章 FC-99通過(guò)IRF3/IFN-α/JAK/STAT1通路降低TLR3的表達(dá)
    2.1 前言
        2.1.1 TLR3的過(guò)度表達(dá)與活化加劇病毒誘導(dǎo)的炎癥損傷
        2.1.2 TLR3參與介導(dǎo)自身免疫病的發(fā)生
        2.1.3 TLR3介導(dǎo)了系統(tǒng)性炎癥的發(fā)生與發(fā)展
        2.1.4 IFN-α通路參與誘導(dǎo)TLR3的表達(dá)
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        2.2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.3 主要實(shí)驗(yàn)器材
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞系培養(yǎng)
        2.3.2 腹腔巨噬細(xì)胞的獲取
        2.3.3 小鼠骨髓來(lái)源DCs的獲取
        2.3.4 小鼠脾臟細(xì)胞的獲取
        2.3.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞TLR3的表達(dá)
        2.3.6 IFNAR1干擾技術(shù)
        2.3.7 數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì)
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 FC-99抑制poly(I：C)誘導(dǎo)的TLR3表達(dá)
        2.4.2 FC-99對(duì)TLR3的抑制作用不具有細(xì)胞依賴(lài)性
        2.4.3 Poly(I：C)誘導(dǎo)TLR3的表達(dá)依賴(lài)于Ⅰ型干擾素
        2.4.4 FC-99通過(guò)IRF3抑制Ⅰ型干擾素的表達(dá)
        2.4.5 FC-99通過(guò)JAK/STAT1抑制IFN-α誘導(dǎo)的TLR3
    2.5 討論
    2.6 參考文獻(xiàn)
第三章 FC-99通過(guò)誘導(dǎo)PPAR-γ促進(jìn)巨噬細(xì)胞M2型極化
    3.1 前言
        3.1.1 炎癥與巨噬細(xì)胞極化
        3.1.2 巨噬細(xì)胞M2型極化的分子機(jī)制
        3.1.3 M2型巨噬細(xì)胞與疾病
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        3.2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 巨噬細(xì)胞極化的誘導(dǎo)
        3.3.2 STAT6干擾實(shí)驗(yàn)
        3.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)M2表面標(biāo)記Mrc(CD206)
        3.3.4 Q-PCR技術(shù)、ELISA與Western blot
        3.3.5 數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì)
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 M1、M2的表型鑒定
        3.4.2 FC-99誘導(dǎo)M1向M2的轉(zhuǎn)化并促進(jìn)IL-4誘導(dǎo)的M2型基因的表達(dá)
        3.4.3 FC-99促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)
        3.4.4 FC-99不通過(guò)STAT6誘導(dǎo)Mrc的表達(dá)
        3.4.5 FC-99通過(guò)PPAR-γ誘導(dǎo)Mrc的表達(dá)
    3.5 討論
    3.6 參考文獻(xiàn)
第四章 TLR3的降低與巨噬細(xì)胞M2型極化有助于緩解CLP誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        4.2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)誘導(dǎo)小鼠膿毒癥
        4.3.2 生化指標(biāo)的檢測(cè)
        4.3.3 血清炎性因子的檢測(cè)
        4.3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TLR3的表達(dá)
        4.3.5 細(xì)胞凋亡的檢測(cè)
        4.3.6 小鼠血液和腹腔液細(xì)菌集落培養(yǎng)
        4.3.7 器官組織的HE染色
        4.3.8 器官組織中TLR3表達(dá)的檢測(cè)
        4.3.9 小鼠存活率實(shí)驗(yàn)
        4.3.10 數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì)
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 FC-99減輕CLP誘導(dǎo)的器官功能障礙與損傷
        4.4.2 FC-99緩解CLP誘導(dǎo)的急性肺損傷
        4.4.3 FC-99降低CLP誘導(dǎo)的小鼠系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)
        4.4.4 FC-99降低CLP誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡并增強(qiáng)細(xì)菌清除
        4.4.5 FC-99抑制CLP誘導(dǎo)的小鼠死亡率
        4.4.6 FC-99抑制膿毒癥小鼠TLR3在系統(tǒng)及局部的表達(dá)
        4.4.7 FC-99干預(yù)肝臟巨噬細(xì)胞的極化
    4.5 討論
    4.6 參考文獻(xiàn)
結(jié)論
博士研究生期間發(fā)表及待發(fā)表論文列表
致謝



本文編號(hào)：3665255