雙特異性抗體（bispecific antibody，BsAb）是增強(qiáng)以抗體為基礎(chǔ)的腫瘤免疫治療效果的發(fā)展方向之一。BsAb含有兩種特異性抗原結(jié)合位點(diǎn)，能在腫瘤細(xì)胞和免疫效應(yīng)細(xì)胞之間架起橋梁，觸發(fā)細(xì)胞毒反應(yīng)，產(chǎn)生導(dǎo)向性的殺傷腫瘤效應(yīng)功能。本研究采用基因工程方法構(gòu)建了抗HER2／neu×抗CD16 BsAb，并對其抗原結(jié)合特性及殺傷HER2／neu過表達(dá)腫瘤細(xì)胞功能進(jìn)行了初步研究。本研究分四個部分。1 抗人CD16單克隆抗體可變區(qū)基因的克隆、表達(dá)及免疫學(xué)特性分析采用5’-RACE（rapid amplification of cDNA end，RACE）克隆策略，從分泌抗人CD16單抗的雜交瘤細(xì)胞B88-9獲得了抗人CD16單抗的重、輕鏈可變區(qū)（VH、VL）及前導(dǎo)肽序列。采用重疊延伸拼接法，通過PCR將VH、VL和Linker Peptide（連接肽）序列在基因水平上拼接，直接合成scFv基因；scFv與人IgG1 Fc區(qū)基因片段插入載體pCI-neo構(gòu)建了scFv-Fc融合蛋白表達(dá)載體并在CHO細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá)。通過G418篩選獲得穩(wěn)定高表達(dá)克隆。更換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，經(jīng)重組蛋白A親和... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 抗人CD16單克隆抗體可變區(qū)基因的克隆、表達(dá)及免疫學(xué)初步特性分析
    1.1 材料與方法
    1.2 結(jié)果
    1.3 討論
第二部分 抗人HER2／neuscFv-Fc融合蛋白的表達(dá)及免疫學(xué)特性分析
    2.1 材料與方法
    2.2 結(jié)果
    2.3 討論
第三部分 “杵臼結(jié)構(gòu)”修飾CH3結(jié)構(gòu)域構(gòu)建抗HER2／neu×抗CD16雙特異性抗體
    3.1 材料與方法
    3.2 結(jié)果
    3.3 討論
第四部分 三價雙特異性抗體的設(shè)計及構(gòu)建
    4.1 材料與方法
    4.2 結(jié)果
    4.3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
致謝
附錄Ⅰ 縮寫詞表
附錄Ⅱ 發(fā)表文章



本文編號：3636272