目的研究破骨細(xì)胞分化中miR-125a受轉(zhuǎn)錄因子NFATc1的調(diào)控模式及其作用機(jī)制,尋找骨代謝疾病新的治療靶點(diǎn)。方法單核細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）和核因子-κB配體的受體激活劑（RANKL）誘導(dǎo)CD₁₄⁺外周血單核細(xì)胞（PBMCs）向破骨細(xì)胞分化。生物信息學(xué)運(yùn)算預(yù)測結(jié)合于miR-125a啟動(dòng)子區(qū)域的轉(zhuǎn)錄因子,過表達(dá)實(shí)驗(yàn)和抑制實(shí)驗(yàn)用于研究轉(zhuǎn)錄因子對miR-125a在破骨細(xì)胞分化中表達(dá)的影響,熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-125a與其靶基因之間的結(jié)合,凝膠遷移電泳實(shí)驗(yàn)（EMSA）和染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)（CHIP）驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄因子與miR-125a啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合。結(jié)果凝膠遷移電泳和染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)證明了NFATc1結(jié)合于miR-125a的啟動(dòng)子靶位點(diǎn)。過表達(dá)NFATc1抑制miR-125a的表達(dá);抑制NFATc1的表達(dá)則升高miR-125a的表達(dá)。結(jié)論 miR-125a在作用于其靶基因——腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子（TRAF）6的同時(shí)受到轉(zhuǎn)錄因子NFATc1的負(fù)反饋調(diào)控,發(fā)揮其在破骨細(xì)胞分化中的調(diào)控作用。表明通過調(diào)控NFATc1的表達(dá)來改變miR... 

【文章來源】：疑難病雜志. 2015,14(03)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1外周血單核細(xì)胞的培養(yǎng):
        1.2.2 破骨細(xì)胞分化:
        1.2.3 實(shí)時(shí)定量PCR分析:
        1.2.4 miR-125a轉(zhuǎn)錄因子預(yù)測:
        1.2.5 質(zhì)粒構(gòu)建與轉(zhuǎn)染:質(zhì)粒構(gòu)建方法按參考文獻(xiàn)
        1.2.6 凝膠遷移電泳實(shí)驗(yàn)(EMSA):
        1.2.7 染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)(CHIP):
        1.2.8 小分子干擾RNA(siRNA)的制備和轉(zhuǎn)染:
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 NFATc1與miR-125a的結(jié)合位點(diǎn)
    2.2 NFATc1對miR-125a轉(zhuǎn)錄的影響
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-125a/TRAF6調(diào)控通路在破骨細(xì)胞分化中的作用研究[J]. 楊麗,趙新蘭,雷丹丹,廖斌,秦愛平.  疑難病雜志. 2014(11)
[2]Biogenesis of Mammalian MicroRNAs:A Global View[J]. Paul Graves.  Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2012(05)



本文編號(hào)：3629756